Inclusion en Parafina-grupo N_6
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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO
FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUDESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO
CÁTEDRA DE:
TÉCNICAS HISTOLÓGICAS
DOCENTE:
LIC. IVÁN PEÑAFIEL
TEMA:
INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
GRUPO: N°6
TERCER SEMESTRE
PERIODO ACADÉMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016
RIOBAMBA – ECUADOR
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
GRUPO N°-6
INTEGRANTES:
N°- APELLIDOS Y NOMBRES
1 DE LA TORRE ZABALA JESSICA KATHERINE
2 MACHADO YANZA CAROLINA MONSERRATH
3 OROZCO PILCO JOSUE ANDRES
TEMA:INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
PARTICIPACIÓN
N°- 25% 50% 75% 100% Observación Cal. Docente
1 100%Colaboró con todas las necesidades requeridas, para la elaboración del
presente trabajo
2 100%Su colaboración fue clave
para la correcta elaboración del trabajo.
3 100%Trabajó correctamente, y
colaboró en todo lo necesario.
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
INTRODUCCIÓN
Para poder ser estudiados con el microscopio, los tejidos de las biopsias, piezas
quirúrgicas o autopsias deben ser seccionados en cortes muy delgados, generalmente de
entre 3 y 6 micras (milésimas de milímetro). Previamente es necesario conferirles una
consistencia homogénea mediante lo que llamamos:
PROCESO DE INCLUSIÓN. Este se realiza habitualmente mediante procesadores
automáticos de tejidos y estaciones de inclusión.
Inclusión en parafina: Es el proceso que se utiliza habitualmente. Su objetivo es sustituir
el agua de los tejidos por parafina liquida caliente (58º C) que al enfriarse adquirirá una
consistencia adecuada para el corte. Como la parafina es insoluble en agua es preciso
eliminar previamente esta última del tejido, sustituyéndola inicialmente por alcohol
(deshidratación) y posteriormente por tolueno o xileno (aclaramiento) que al ser
solubles en parafina pueden ser sustituidos finalmente por ella. Así se obtendrá un tejido
embebido en parafina que será introducido en moldes con parafina liquida. Al enfriarse
los moldes obtendremos un "bloque de parafina" a partir del cual pueden obtenerse las
secciones. (Servicio de Anatomía Patológica, 2011)
OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL
Adquirir el conocimiento necesario sobre la orientación e inclusión de tejidos en
parafina, para lograr un bloque consistente en el que esté incluido el tejido previamente
procesado.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS
Aprender la definición de inclusión y cuál es la finalidad de la misma.
Identificar el medio de inclusión usado con más frecuencia.
Reconocer los puntos de fusión de la parafina sólida y liquida.
Conocer el equipo para la inclusión de tejidos.
Diferenciar los moldes adecuados de acuerdo con el tamaño de la muestra.
Conocer la orientación del tejido para la realización de un bloque.
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
FUNDAMENTO TEÓRICO
INCLUSIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
Ilustración 1 Bloques de parafina
La inclusión es el proceso por el cual se incrementará la dureza y consistencia de la
pieza para permitir su corte. Esto se consigue incluyendo la pieza en una sustancia que
tenga la dureza y consistencia adecuada. La sustancia habitualmente utilizada en este
proceso es la parafina. El reto consiste en sustituir el agua que hay en el interior y
exterior de las células por parafina.
La parafina es una sustancia que por encima de los 600C es líquida y solidifica por
debajo de esta temperatura, esto facilita de difusión de la parafina por los tejidos cuando
está líquida, no obstante, otro problema que hay que salvar es el hecho que la parafina
es altamente hidrófoba, es decir no se puede mezclar con el agua o sustancias en medio
acuoso. Por ello el siguiente paso que debe sufrir las muestras es la eliminación del agua
de la muestra: la deshidratación.
La deshidratación de las muestras se consigue mediante una sustitución progresiva del
agua por etanol. Para conseguirlo se somete a las piezas a sucesivos baños de etanol de
gradación creciente, empezando por etanol 500 ó 700 y concluyendo con diferentes
baños de etanol absoluto (1000), pasando por baños de etanol 960.
La pieza, ya deshidratada, aún no puede ser pasada a parafina ya que el etanol no es
miscible con la parafina. Se usa un agente intermediario, es decir una sustancia que sea
miscible tanto con el etanol como con la parafina. El intermediario habitualmente usado
es el Xileno, en el que la pieza sufre varios baños para sustituir totalmente al etanol.
Con la pieza en Xileno, se suele pasar por un baño de una mezcla de Xileno-Parafina al
50% para favorecer la penetración de la parafina. Posterior a este baño se suceden
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
varios baños en parafina pura hasta conseguir que la parafina haya penetrado
completamente en toda la pieza. Todos estos baños que incorporan parafina se realizan
en estufa 600C para mantener la parafina líquida. En algunos laboratorios todo este
proceso se realiza de forma automatizada usando un dispositivo (robot), que va
cambiando las muestras de un líquido a otro mediante un programa preestablecido.
Una vez pasado el tiempo necesario para que la parafina penetre en los tejidos, la
cuestión es realizar un bloque con todo ello, que pueda ser usado en el micrótomo para
obtener cortes.
(Martín, 2012)
ESTACION DE INCLUSION DE TEJIDOS EN PARAFINA
Ilustración 2 Estación de tejidos en parafina
La forma más sencilla es usar un molde en el que se vierte la parafina y en el que se
introduce la muestra procesada y se deja enfriar para que el conjunto se solidifique. En
muchos laboratorios se utiliza una estación a tal efecto. Estas estaciones disponen de
depósito de parafina líquida (600C), desde el que se puede dispensar parafina sobre el
molde mediante un grifo; dispone también de una cámara donde se guardan los
diferentes moldes a 600C y una placa caliente (600C) y otra fría (40C). La dinámica es
sencilla, se coloca el molde debajo del grifo dispensador de parafina y se llena con
parafina líquida, se coloca la pieza y se orienta, colocando, por último, la base del casete
de inclusión. Se desplaza con cuidado el conjunto encima de la placa fría para conseguir
una solidificación rápida que no forme cristales y una vez solidificado se extrae el
molde obteniendo un bloque listo para cortar.
(Martín, 2012)
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
Ilustración 3 Colocación del molde Ilustración 4 Dispensador de parafina
Ilustración 5 Colocación de tejido y cubrir con la tapa Ilustración 6 Relleno con parafina la superficie
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
Ilustración 7 Obtención del bloque de parafina
ENCASTRACIÓN EN PARAFINA
Las muestras de tejidos están encastradas en bloques de parafina (o PEG) usando
contenedores disponibles en plástico o porcelana, discos de aluminio, o en "botes
hechos con papel". Cuando uses estos métodos, extiende una fina capa de aceite de
parafina en la superficie antes de vaciar la parafina líquida para permitir que se
desmonte más fácilmente el bloque de parafina.
La encastración de tejidos inhibidos con parafina se realiza más fácilmente sobre una
plataforma de encastración. Esta es una superficie simple de aluminio, que tiene una de
sus superficies calentadas y no la otra. Cuando está caliente, el lado calentado mantiene
la parafina líquida permitiendo que el tejido pueda ser orientado.
(Anónimo)
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ORIENTACION DEL TEJIDO
Ilustración 3 Orientación de los tejidos en parafina
La calidad y la utilidad final de una sección de tejido depende de la ejecución impecable
de cada uno de los pasos del procesamiento; cada paso, a su vez, dependerá
completamente del paso anterior si se desea calidad óptima. Aún con fijación adecuada,
procesamiento impecable, y microtomía profesional, una sección de tejido puede ser
destruida si la inclusión, la localización y la orientación no son adecuadas. El técnico de
histopatología debe escrudiñar cada uno de los fragmentos del tejido recibido, analizar
su estructura, y decidir cómo situar el tejido en el bloque.
Consideraciones generales:
Las secciones de tejidos son incluidas perfectamente planas para asegurarse de que se
obtenga una sección completa. Use la presión justa para mantener la sección plana
contra la superficie del molde. Debe tenerse mucho cuidado para que después no
aparezcan artefactos causados por un manejo inadecuado de las muestras de tejido.
Estructuras Tubulares
Estructuras tubulares tales como vaso deferente, venas, arterias y oviductos deben ser
incluidas en una forma tal que la cuchilla corte a través de la luz tubular. La orientación
debería ser tan vertical como sea posible.
Superficies Epiteliales
Aquellos tejidos que tienen una superficie epitelial, con la piel, el intestino, la vesícula
biliar, la vejiga urinaria y el útero, deben ser colocados de forma tal que el plano de
sección pase a través de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe colocarse
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
en la parte más alta del bloque para que así sea la última en ser cortada. El acto de llegar
al epitelio al final de la moción de corte va a minimizar la presión que es causa de
distorsión de la capa epitelial. El cortar de ultimo la capa de queratina reduce la
compresión, los rasguños y las cortadas de las capas subcutáneas.
Los especímenes, cuando son múltiples deben ser incluidos uno junto al otro con sus
superficies epiteliales orientadas en la misma dirección. Puede ser difícil identificar la
superficie epitelial cuando las biopsias de tejido son muy pequeñas.
Especímenes Grandes y Sólidos
Los especímenes rectangulares grandes o sólidos como el útero, la próstata, la glándula
tiroides y el tejido óseo deben ser incluidos con un ligero ángulo en relación al borde de
la cuchilla. Esta comienza el corte con menos resistencia, reduciendo así la posibilidad
de desplazar el tejido fuera del bloque. La vibración e inestabilidad del borde de la
cuchilla o del bloque también se minimizan notablemente.
Múltiples Especímenes
Múltiples fragmentos de tejido blando y ganglios linfáticos deben ser colocados uno
junto al otro con suficiente espacio entre ellos silos tejidos se colocan uno encima del
otro, existe la posibilidad de que el tejido de abajo distorsione el tejido que está encima.
La organización metódica de los tejidos hace que la lámina sea más fácil de estudiar y
que se vea más profesional que si los fragmentos se incluyen en desorden.
Los tejidos rectangulares pequeños deben ser orientados con su eje longitudinal casi
paralelo al borde de la cuchilla para minimizar los pliegues y la distorsión causados por
presión.
Estructuras Quísticas
Después de la bisección, los quistes pequeños adoptan una forma de cúpula. Por lo
tanto, los quistes deben ser incluidos con la superficie de corte hacia abajo para que así
la cuchilla corte a través de todas las capas de la pared del quiste. Hay que asegurarse de
que la cúpula no atrape burbujas de aire.
Entre los factores que afecta a la inclusión se encuentran.
1) agitación
2) calor
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3) viscosidad
4) ultrasonidos
5) vacío
(Buenas Tareas, 2012)
CONCLUSIONES
Se aprendió el significado de la palabra inclusión y para que nos sirve la misma
dentro del laboratorio de Anatomía Patológica.
Se identificó cual es el medio de inclusión o incrustación usado con más
frecuencia.
Se reconoció cuáles son los puntos de fusión de la parafina tanto en su estado
sólido como en su estado líquido.
Se conoció el equipo y las partes del mismo que se utilizan para realizar la
inclusión de tejidos en parafina.
Se realizó una diferenciación de los moldes a utilizar de acuerdo con el tamaño
de la muestra.
Se conoció la correcta orientación de los tejidos para la realización de los
bloques de parafina y su posterior corte en el micrótomo.
BIBLIOGRAFÍA
Anónimo. (s.f.). Inclusión en parafina. Obtenido de Inclusión en parafina: http://www.euita.upv.es/varios/biologia/tecnicas_de_histologia_vegetal/Documentos/Inclusion_p.htm
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TÉCNICAS HISTOLÓGICAS INCRUSTACIÓN DE TEJIDOS EN PARAFINA
Buenas Tareas. (10 de Julio de 2012). Obtenido de Buenas Tareas: http://www.buenastareas.com/ensayos/Orientacion-e-Inclusion-De-Tejidos/4750487.html#
Martín, V. (5 de Junio de 2012). Técnicas Histológicas. Obtenido de Técnicas Histológicas: http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci%C3%B3n+de+bloques+en+parafina
Servicio de Anatomía Patológica. (14 de Marzo de 2011). Obtenido de Servicio de Anatomía Patológica: http://www.chospab.es/area_medica/anapat/tecnicahistologica.htm
Técnicas Histológicas. (s.f.). Obtenido de http://www.wesapiens.org/es/class/4933003/file/3/T%C3%A9cnicas+Histol%C3%B3gicas%3A+Realizaci%C3%B3n+de+bloques+en+parafina
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