In vivo fluorescentie van NADH in gist
description
Transcript of In vivo fluorescentie van NADH in gist
![Page 1: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/1.jpg)
In vivo fluorescentie van NADH in gist
• Geef een fysiologische verklaring voor de NADH fluorescentie veranderingen
• Betrek hierin ook de heersende zuurstofconcentraties
![Page 2: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/2.jpg)
Wat gebeurt er in de verschillende fases (1- 8)?
NADH fluorescentieTijd
H2O2
Aceetaldehyde Gehongerde gistcellen worden gesuspendeerd in een aerobe buffer
met glucose
1
2
3
4
5
6
1 min
![Page 3: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/3.jpg)
NADH fluorescentieTijd
H2O2
7
8
Mengen
![Page 4: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/4.jpg)
230 µM O2
Gist toegevoegd
AceetaldehydeH2O2
Tijd (min) 1 min
Recorderuitdraai van de zuurstofelectrode
[O2] switch= (11/74)x 230 µM
![Page 5: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/5.jpg)
Katabolisme van glucose in gist• In aanwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse,
citroenzuurcyclus en ademhalingsketen (fase 1)
• In afwezigheid van zuurstof zijn actief: glycolyse en ethanol productie (samen fermentatie genoemd)
![Page 6: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/6.jpg)
Aerobe afbraak van glycose (pyruvaat)
• De citroenzuurcyclus vindt plaats in de mitochondriën
• Reductie equivalenten worden onttrokken aan intermediairen en overgebracht op NAD+ en FAD.
![Page 7: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/7.jpg)
De mitochondriale ademhalingsketen: electronen transport naar zuurstof is gekoppeld aan het opbouwen
van een proton motive force
![Page 8: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/8.jpg)
Overzicht over de oxidatieve fosforylering
• Een proton pompende ademhalingsketen
• PMF gedreven fosforylering van ADP
• 2.5 ATP(cytoplasma) / NADH
• ATP concentratie in het cytoplasma is hoog, AMP is laag
3.3 H+/ ATP
![Page 9: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/9.jpg)
Regulatie katabolisme via de ‘energy charge’ (EC)
• EC hoog: een afgeremde ademhalingsketen, citroenzuurcyclus en glycolyse.
• 30 ATP per glucose molecuul geoxideerd tot CO2 en H2O
![Page 10: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/10.jpg)
Als de ademhalingsketen stopt, daalt de energy charge sterk
• Ademhalingsketen stopt, citroenzuurcyclus stopt, de energy charge daalt sterk.
• Bij een lage energy charge wordt de glycolyse sterk geactiveerd.
• NADH moet worden geoxideerd, gaat via fermentatie
![Page 11: In vivo fluorescentie van NADH in gist](https://reader035.fdocuments.net/reader035/viewer/2022070420/56815df0550346895dcc1dfc/html5/thumbnails/11.jpg)
Fermentatief katabolisme in gist
• ATP vorming via substraat gebonden fosforylering in de glycolyse.
• Export reductie equivalenten via ethanol