Immunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffine en ... - JA.pdf · LM à grandes cellules...
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ImmunohistochimieImmunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffinesur tissu fixé et inclus en paraffine
en pathologie hématologiqueen pathologie hématologique
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Rôle du pathologisteRôle du pathologiste
• Reconnaître un lymphome ou une autre tumeur hématopoïétique
• Classer la tumeur hématopoïétique selon la classification OMS 2008
• Diagnostic possible pour la majorité des cas
• Quelques cas difficiles soulignant l’importance de la gestion adaptée du prélèvement tissulaire +++ (Apposition, congélation,CMF, cytogénétique, biologie moléculaire)
• Problème du tissu prélevébiopsie ganglionnaire à l’aiguilleganglion, moelle osseuse, rate
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CD20
BOM : localisation intrasinusale d’un lymphome B de la zone marginale splénique
DBA44
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Biopsie Biopsie transpédiculairetranspédiculaire : nécrose: nécrose
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ImmunohistochimieImmunohistochimie CD20 et CD3CD20 et CD3
Même grandissementMême grandissement
Dans la nécrose :Dans la nécrose :
grandes cellules CD20+grandes cellules CD20+
CD3
CD20
CD20
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Pour le pathologiste, le diagnostic et la classification des lymPour le pathologiste, le diagnostic et la classification des lymphomes phomes dépendent :dépendent :
1. de la qualité de la technique conventionnelle2. de la rigueur de l’analyse morphologique3. de la qualité de la technique d’immunohistochimie4. de la rigueur de l’interprétation de l’immunohistochimie
► morphologie des cellules positives► topographie des cellules positives
et des cellules négatives► comparaison dans le même territoire des différents anticorps
sur niveaux rapprochés
Dans la majorité des cas, la morphologie et l’immunohistochimie avec un nombre restreint d’anticorps sont suffisants pour un diagnostic précis.
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Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie
1. lymphome vs autre tumeur +++ Dias 8 -19
2. origine B ou T du lymphome +++ Dias 21- 38
3. classification des lymphomes B à petites cellules
4. classification des lymphomes périphériques T/NK
5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques
6. phénotype des néoplasies « blastiques »
7. phénotype des lymphomes de Hodgkin
8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53
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1. Lymphome vs autre tumeur1. Lymphome vs autre tumeur
« Tumeur morphologiquement indifférenciée »•• LymphomeLymphome
- L. à grandes cellules anaplasiques- Maladie de Hodgkin riche en cellules tumorale- L. à grandes cellules B- L. à grandes cellules T
•• Tumeur hématopoïétique autre qu’un lymphomeTumeur hématopoïétique autre qu’un lymphome- Sarcome myéloïde- Mastocytose, etc...
•• Autre tumeurAutre tumeur- Carcinome indifférencié- Tumeur neuro-endocrine- Sarcome indifférencié- Mélanome- Séminome- PNET, Ewing, etc…
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«« Tumeur morphologiquement indifférenciéeTumeur morphologiquement indifférenciée »»
L’immunohistochimie permet dans la quasi totalité des cas de reconnaître une tumeur d’origine hématopoïétique et de classer la tumeur.Les AC seront demandés en plusieurs étapes.
Un large panel d’anticorps est parfois nécessaire
1ère étape cytokératinesCD45 ou CD20 + CD3CD30
2ème étape CD79a, CD5, …EMA, Chromogranine A, HMB45 …
3ème étape CIg, MPO, lysozyme, CD68, PLAP, CD99, etc…
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CD20 CD5
CD30
Tumeur du médiastin
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CD56 PLAP
KL1
Tumeur du médiastin : séminome
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Diagnostic initial de lymphomeDiagnostic initial de lymphome
1ère étape : CD45 1ère étape : CD45 Cytokératines EMACytokératines EMACD45CD45● exprimé par les cellules lymphoïdes normales et tumorales
● exprimé par les cellules d’origine hématopoïétiques normales et tumorales - cellules myéloïdes
- monocytes- cellules interdigitées- mastocytes …
● perte de l’expression dans quelques néoplasies lymphoïdes- myélome plasmocytaire et plasmocytome- lymphome lymphoblastique (20%)- lymphome à grandes cellules anaplasiques (30%)- lymphome immunoblastique à différenciation plasmocytaire
● expression inattendue : rares cas de carcinome indifférencié ouneuro-endocrine (Nandedkai et al. 1998)
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CD45
Sarcome à cellules interdigitées CD45(+)
CD1a pS100
Sarcome myéloïde : CD45+
CD45
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CD79aTdT
CD45
Lymphome lymphoblastique B, CD45(-)
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Diagnostic initial de lymphomeDiagnostic initial de lymphomeCytokératinesCytokératines
Positives dans des lymphomes souvent CD45--- Quelques LM à grandes cellules B -- Néoplasies plasmocytaires -- Quelques LM NK/T
EMAEMAExprimé dans de nombreux lymphomes -- L. de Hodgkin à prédominance lymphocytaire nodulaire-- LM diffus à grandes cellules B riche en cellules T et/ou en histiocytes -- % néoplasies plasmocytaires-- % LM immunoblastique à différenciation plasmocytaire-- LM NK/T à grandes cellules anaplasiques
EMABOM
plasmocyteplasmocyte
erythroblasteserythroblastes
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KL-1
EMACD20
Tumeur à grandes cellules, cytokeratines (+), EMA (+), CD20 (-), CD79a (-) : CARCINOME ?
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IgM
NONNON : Lymphome Immunoblastique B IgM-Kappa
CD79a
Lambda
Kappa
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Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie
1. lymphome vs autre tumeur +++ Dias 8 -19
2. origine B ou T du lymphome +++ Dias 21- 38
3. classification des lymphomes B à petites cellules
4. classification des lymphomes périphériques T/NK
5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques
6. phénotype des néoplasies « blastiques »
7. phénotype des lymphomes de Hodgkin
8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53
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2. Origine B ou T du lymphome2. Origine B ou T du lymphome
• L’immunohistochimie sur tissu fixé et inclus en paraffine est obligatoire, • en particulier pour les lymphomes à grandes cellules
• Un nombre restreint d ’anticorps est nécessaire dans la majorité des cas
Cellules B : CD20 CD79aCellules T : CD3 CD5
CD20 CD3
Lymphome à grandes cellules B Lymphome T
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Lymphomes B : particularitésLymphomes B : particularitésExpression faible deExpression faible de CD20 : LLCCD20 : LLC--BB
Perte dePerte de CD20CD20-- néoplasies plasmocytaires-- LM immunoblastique-- rares cas de rechute de LM B CD20(+) après traitement
par Rituximab-- [lymphome/leucémie lymphoblastique B : acquisition tardive au cours
de la maturation]
utilitutilitéé de CD79ade CD79a
Perte dePerte de CD20CD20 etet CD79aCD79a-- % LM immunoblastique avec différenciation plasmocytaire-- LM diffus à grandes cellules B avec expression de la protéine
ALK (Delsol et al, 1999)-- LM B primitif des séreuses
Dans ces cas Dans ces cas : utilité de la détection des Ig cytoplasmiques
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CD79a
CD20
LLC-B
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CD20CD79a
CD20
Lymphome à grandes cellules B, CD20(+) : rechute après Rituximab, CD20(-)
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κ λ
CD79a CD20
Plasmocytome extra-osseux CD20(-) CD79a(+)
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Lymphome NK/T périphérique : Lymphome NK/T périphérique : particularitésparticularités
●● Perte d’un ou plusieurs antigènes panPerte d’un ou plusieurs antigènes pan--TT
-- fréquent, bon argument pour le diagnostic de lymphome T/NK
-- maismais quelques lymphocytes T normaux peuvent perdre un antigène au cours de leur maturation(ex. perte de CD7 par les lymphocytes T cutanés)
●● Réactivités inhabituellesRéactivités inhabituelles
-- CD20(+)ou CD79a(+) : % lymphome T/NK périphérique
-- CD79a(+) : lymphome lymphoblastique T (40 %)
-- CD10(+), bcl-6(+) : lymphome T angio-immunoblastique
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CD3 CD5
TIA-1
Lymphome NK/T de type nasal, CD3(+), CD5(-)
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CD20 CD5
CD3
Lymphome exprimant CD3 and CD20 mais CD5(-) : lymphome B ? Lymphome T ?
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CD10
CD3
Diagnostic: Lymphome T angioimmunoblastic CD20(+)
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CD20 EMA
CD30
Lymphome à grandes cellules CD30(+) CD20(+) EMA(+) : LYMPHOME B ?
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CD79a TIA-1
CD7ALK-1
NON NON : Lymphome à grandes cellules anaplasiques ALK-1(+), de phénotype NK/T
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Cellules réactionnelles dans les lymphomes Cellules réactionnelles dans les lymphomes
Le nombre des cellules réactionnelles peut constituer un piège pLe nombre des cellules réactionnelles peut constituer un piège pour le our le diagnostic et la classification des lymphomesdiagnostic et la classification des lymphomes
LM BLM B
1 1 -- • LM à grandes cellules B riche en lymphocytes T et en histiocytes• quelques LM diffus à grandes cellules B
Le nombre élevé de cellules T réactionnelles et/ou d’histiocytes peut masquer des cellules néoplasiques peu nombreuses
2 2 -- LM folliculaire :
les lymphocytes T peuvent représenter plus de 50% de la population centrofolliculaire : illusoire d’interpréter bcl-2 …
3 3 -- LM de la zone marginale et lymphome lymphoplasmocytique :
les lymphocytes T réactionnels peuvent être très nombreux, en particulier dans les localisations médullaires osseuses
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Lymphome à gandes cellules B riche en T/histiocytes
CD68 CD3
CD20
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Bcl-2
CD3
Bcl-2
CD3
Lymphome folliculaire contenant de nombreux lymphocytes TLymphome folliculaire contenant de nombreux lymphocytes T
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Cellules réactionnelles dans les lymphomesCellules réactionnelles dans les lymphomes
lymphomes T/NKlymphomes T/NK
1.1. LM T périphérique angio-immunoblastique : présence de : - nombreux immunoblastes B souvent EBV(+)- et/ou parfois plasmocytose > 30%
2.2. LM à grandes cellules anaplasiques NK/T, variante lymphohistiocytique
présence de nombreux histiocytes masquantles cellules tumorales
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CD20
CD3
Lymphome T angioimmunoblastique : immunoblates B CD20(+)
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Identification des problèmes en Identification des problèmes en hématopathologiehématopathologie
1. lymphome vs autre tumeur +++
2. origine B ou T du lymphome +++
3. classification des lymphomes B à petites cellules
4. classification des lymphomes périphériques T/NK
5. identification du lymphome à grandes cellules anaplasiques
6. phénotype des néoplasies « blastiques »
7. phénotype des lymphomes de Hodgkin
8. lésion lymphoïde bénigne vs lymphome +++ Dias 40-53
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8. Lésion lymphoïde bénigne vs lymphome8. Lésion lymphoïde bénigne vs lymphome
Amélioration de l’efficacité de l’IHC sur tissu fixé et inclus eAmélioration de l’efficacité de l’IHC sur tissu fixé et inclus en paraffine.n paraffine.
Prolifération à cellules BProlifération à cellules B
- hyperplasie folliculaire vs lymphome folliculaire• cellules B centrofolliculaire : bcl-2+• cellules B interfolliculaires : CD10+
- plasmocytose réactionnelle vs LM lymphoplasmocytique ou myélome. • CIg polytypique vs CIg monotypique +++
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Bcl-2
Hyperplasie folliculaire
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IgD
CD10Bcl-2
Lymphome folliculaire de type floral
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Biopsie ostéomédullaire : myélome ?
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IgM IgMIgA
κ λCD79
Biopsie ostéomédullaire myélome ? NON NON plasmocytose réactionnelle (M. de Castleman)
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Prolifération à cellules TProlifération à cellules T
- Infiltrat réactionnel à cellules T vs lymphome T
• perte d’un antigène associé aux lymphocytes T
- réaction d ’hypersensibilité vs LMT angio-immunoblastique
• hyperplasie extrafolliculaire des CFD
• morphologie des cellules CD3+
Prolifération Prolifération immunoblastiqueimmunoblastique
- MNI, Kikuchi, etc... vs lymphome à grandes cellules
• Immunoblastes B polytypiques
• grandes cellules T activées souvent CD8 +
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Ganglion : Lymphome ? Lésion réactionnelle ?
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CD2
CD20
CD7
CD21
Lymphome T angio-immunoblastique
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Ganglion : Nécrose et grandes cellules : lymphome ?
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CD3CD20
CD68
NON NON : maladie de Kikuchi avec hyperplasie immunoblastic pseudo- lymphomateuse
CD68
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CONCLUSIONCONCLUSION
L’immunohistochimie est aujourd’hui un outil indispensable pour le diagnostic et la classification de la plupart des LM.
Les résultats seront interprétés avec prudence en tenant compte des réactivités inhabituelles des cellules tumorales.
Dans les cas difficiles, les pièges seront contournés par une étude morphologique précise et par l’interprétation précise de l’ensemble de l’étude immunohistochimique.
En fait, devant une réactivité inhabituelle, le diagnostic finalreposera avant tout sur le diagnostic morphologique et sur la corrélation avec les données cliniques et biologiques.
Dans quelques cas, le recours à d’autres techniques (cytogénétique, biologie moléculaire) sera utile.