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Identificación de hongos en cachama blanca en cultivos semi-intensivos de Norte de Santander, Colombia 247

Identificación de hongos en cachama blanca (Piaractus brachypomus) en cultivos semi-intensivos de Norte de Santander, Colombia

Identification of fungi in white cachama (Piaractus brachypomus) in semi-intensive crops of Norte de Santander, Colombia

Identificação de fungos em pirapitinga (Piaractus brachypomus) em cultivo semi-intensivo de Norte de Santander, na Colômbia

Luis F. Londoño- Franco1; Carlos A. David-Ruales2; Julián A. Villamarín- Muñoz3

1 Mv, Esp, MSc, PhD, Docente Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid, Medellín, Colombia, Facultad Ciencias Agrarias, Grupo Investigación Acuicultura Gia y Gestiagro2 Biólogo, MSc, Docente de la Facultad de Ciencias Administrativas y Agropecuarias, Corporación Universitaria Lasallista, Caldas, Antioquía, Colombia. Director Grupo de Investigación en Producción, Desarrollo y Transformación Agropecuaria GIPDTA3 Ing. Biomédico, MSc, PhD, Docente Programa Ingeniería Biomédica, Universidad Antonio Nariño, Popayán, Coordinador de PosgradosEmail: [email protected]

Recibido: octubre 30 de 2014 Aceptado: noviembre 24 de 2014

Resumen

En el estudio de patología de peces, los hongos son uno de los agentes infecciosos que pueden causar graves problemas de salud e incluso desencadenan procesos de morbi-mortalidad en las estaciones piscícolas. Esto se traduce en grandes pérdidas económicas para el sector. La literatura sobre enfermedades de peces reportan que los hongos prevalecen como un actor de alta incidencia en las piscícolas de Colombia. El objetivo de esta investigación fue establecer la presencia de hongos en cachama blanca mediante aislamiento microbiológico en producciones semi-intensivas de Norte de Santander - Colombia. Se estudiaron once piscícolas semi-intensivas de varios municipios de Norte de Santander. Fueron colectados cuarenta y dos peces con sintomatología clínica compatible con micosis, de los cuales, se tomaron muestras de las lesio-nes y fueron sembradas en agar enriquecido con glucosa peptona, malta y Saboroud. Los cultivos se incubaron entre 25 °C y 37 °C por 24 a 36 horas. Después de este periodo se hicieron las descripciones correspondientes. De las muestras cultivadas, se aislaron 4 géneros de hongos (Fusarium sp., Mucor sp., Penicillium sp. y Aspergillus sp.) y dos levaduras. Los hongos se clasificaron dentro de los grupos Ascomicetes, Zigomicetes y Cándida, lo que determinó una proporción de 50% AscomIcetes, 25% Zigomicetes, y 25% de Levaduras (Cándidas). La mayoría de estos hongos son oportunistas y se localizan en todos los ambientes, tanto en plantas como en animales (peces). De los hongos aislados, Fusarium, Aspergillus, Penici-llium y Mucor pueden ser patógenos para los animales y los humanos. Ésta información permite aportar en la construcción de un banco de datos y mapa epidemiológico sobre las afecciones micóticas en cachama blanca de Norte de Santander, Colombia.

Palabras claves: aislamiento, micosis, peces, sanidad.

ARTÍCULO ORIGINAL/ORIGINAL ARTICLE

248 ORINOQUIA SUPLEMENTO - Universidad de los Llanos - Villavicencio, Meta. Colombia Vol. 18 - No 2 - Año 2014

Introducción

Los peces son la principal fuente proteica en muchas partes del mundo y, particularmente en países desa-rrollados. Según la FAO, la acuicultura sigue creciendo más rápido que cualquier otro sector de producción pecuaria, con un incremento promedio anual del 8%; la disminución de la pesca de captura debido a la so-brepesca, la pérdida de hábitats y la contaminación, explican este crecimiento. Dicho aumento implica la intensificación de los sistemas productivos (FAO, 2012) y los brotes de enfermedades (infecciosas y no infecciosas) con la consiguiente mortalidad, que son más frecuentes cuando los peces se mantienen en condiciones semi-intensivas de confinamiento. El brote de enfermedades es incrementado directamente por una mayor densidad de siembra. Incluso puede apare-cer mortalidad súbita y masiva de peces sanos, aún en buenas condiciones ambientales. Por ejemplo, cuando un agente infeccioso se introduce accidentalmente en el sistema de cultivo (Woo, 2006).

Varios investigadores indican que los parásitos, las bacterias, los virus y los hongos están entre los agentes infecciosos más perjudiciales en piscicultura. Según al-gunos estudios en la región y el país, los hongos son un agente de alta prevalencia en las piscícolas (Amaya et al., 1988; Fernández et al., 1999; Verján-García, 2001; Vásquez-Díaz et al., 2001; Rodríguez et al., 2008). Por otra parte, se sabe que las enfermedades de tipo bac-teriano son las más estudiadas, debido a su mayor inci-dencia en peces. Por el contrario, las micosis son uno de los agentes infecciosos de peces más confusos y menos explorado, lo que causa graves pérdidas eco-nómicas en acuicultura (Meyer, 1991). Estas pérdidas no sólo afectan la cantidad del producto, sino también su calidad, inocuidad y presentación final (Kinkelin, et al., 1985).

Se conoce que la cachama blanca, Piaractus brachypo-mus (Cuvier, 1818), es una especie de amplia distribu-ción en la Amazonía y Orinoquía. Tiene características

Abstract

In the study of fish pathology, fungi are one of the infectious agents that can cause serious health problems and even trigge-ring processes of morbidity and mortality in fish stations. This results in large economic losses for the sector. Literature on fish diseases reported that fungi prevalent in Colombia as an actor in high incidence in fish. The objective of this research was establishing the presence of fungi in cachama spp. by microbiological isolation in semi-intensive production of Norte de Santander – Colombia. They were studied in semi-intensive fish belonging to eleven municipalities of Norte de Santan-der. It was collected forty-two fishes with clinical symptoms compatible with mycoses, of which samples were taken and were seeded into agar peptone enriched with glucose, malt and Saboroud, the cultures were incubated at 25° C and 37° C for 24 to 36 hours after this time were made descriptions. Were isolated from the samples observed four genera of fungi (Fusarium sp, Mucor sp, Penicillium sp and Aspergillus sp.) and two yeasts groups classified in Ascomycetes, Zygomycetes and two Cándidas, determining a ratio of Ascomycetes 50% Yeasts and 25% Zygomycetes, 25%. Most of these fungi are opportunistic and are found in all environments in both plants and animals (fish). Fungal isolates of Fusarium, Aspergillus, Penicillium and Mucor can be pathogenic in both animals and humans. This information allows us to build a database and a epidemiological map on white cachama fungal diseases in Norte de Santander, Colombia.

Keywords: fishes, fungi, health, isolation.

Resumo

No estudo da patologia peixe, fungos é um dos agentes infecciosos que podem causar graves problemas de saúde e ainda que desencadeiam processos de morbidade e mortalidade em estações de peixe, que por sua vez resulta em grandes per-das económicas para o sector. A literatura sobre doenças dos peixes informou que fungos comuns na Colômbia como ator em alta incidência em peixes. O objetivo da pesquisa foi estabelecer a presença de fungos em pirapitinga pelo isolamento microbiológico na produção semi-intensiva de Norte de Santander - Colômbia. Foram estudados em onze pisciculturas semi-intensivas pertencentes a vários municípios do Norte de Santander. Foram coletados quarenta e dois peixes com sintomas clínicos compatíveis com micoses, dos quais amostras das lesões foram tomadas e foram semeadas em ágar en-riquecido glicose pectonada, malte e saboroud; as culturas foram incubadas a 25 °C e 37 °C durante 24 a 36 horas. Após este período foram feitos e descrição. Foram isolados a partir de amostras cultivadas quatro géneros de fungos (Fusarium, Mucor, Penicillium e Aspergillus) e duas leveduras. Os fungos são classificados dentro dos Ascomycetes, Zygomycetes e dois grupos de Candida; a determinação de uma proporção de 50% ascomycetes, zigomicetos 25%, e 25% de levedura (Cândi-da). A maioria desses fungos são oportunistas e são encontrados em todos os ambientes, tanto plantas e animais (peixe). Dos fungos isolados de Fusarium, Aspergillus, Penicillium e Mucor pode ser patogénico para animais e seres humanos. Esta informação permite construir um banco de dados e um mapa epidemiológico sobre doenças fungosas em pirapitinga para Norte de Santander, Colômbia.

Palavras chave: isolamento, micose, a saúde dos peixes.


importantes para el desarrollo de la acuicultura, como buen desarrollo en biomasa, alta rusticidad, resisten-cia a enfermedades, acepta fácilmente el manejo en confinamiento y alimentación con raciones artificiales (Vásquez-Torres, 2005). En la actualidad es el pez nati-vo de mayor producción en Colombia con 10.251 TM en el año 2010 (CCI, 2010). También es la especie que más se produce en los departamentos de Santander, con 1272 TM para el mismo año, lo cual representa el 54% de su producción total. Con este panorama, el objetivo de esta investigación pretende caracterizar los principales agentes micóticos asociados a los siste-mas de producción semi-intensivos de cachama blan-ca en el departamento de Norte de Santander.

Materiales y metodos

Localización y ecología de la zona de muestreo.

El estudio se llevó a cabo en el periodo de verano del 2011, en once de un total de catorce piscícolas censadas con sistema de producción semi-intensivo. Lo anterior quiere decir que se introduce alimento concentrado en las dietas, se aumenta la densidad de peces, se hace recambio de agua, se utilizan registros y se maneja el sistema en forma más tecnificada. Las piscícolas están localizadas al nororiente del departa-mento de Norte de Santander, en los municipios de El Zulia, San Cayetano y Puerto Santander, entre las coordenadas longitud oeste 74° 24´ 32´´, latitud nor-te 80° 22´02´´; piso térmico cálido, temperatura pro-medio de 30 °C, en la región, temperatura promedio del agua en los estanques de 28 °C aproximadamente y altura sobre nivel del mar 200 a 500 m, zona ecológi-ca bosque tropical bajo muy seco. El oxígeno disuelto,

pH, sólidos totales y dureza estuvieron dentro del ran-go normal para la cachama blanca.

Material biológico

De cada piscícola ubicada en los municipios mencio-nados se seleccionaron entre 1 y 6 peces con sintoma-tología sospechosa, asociada a lesiones micóticas. En total, se tomaron 42 muestras de peces (adultos) de los estanques de ceba que presentaron lesión compa-tible por hongos, mediante inspección visual.

Procesamiento de las muestras.

Estas se dispusieron en bolsas plásticas estériles, her-méticamente selladas, rotuladas y refrigeradas en nevera a 4 °C. Fueron llevadas de inmediato al labora-torio de microbiología de la Universidad de Pamplona. Una vez en el laboratorio, se sembraron en ágar enri-quecido con glucosa peptona, malta y Saboroud; los cultivos se incubaron a 25 °C y 37 °C, por 24 a 72 ho-ras, después de este tiempo se observó el crecimiento de colonias algodonosas sospechosas del crecimiento de hongos. Figuras (1 y 2).

Las muestras positivas por inspección visual (conside-rando la morfología de las colonias y características microscópicas), se examinaron con una gota de lac-tofenol al microscopio óptico, microscopio invertido y de florescencia, con el fin de identificar y clasificar los hongos presentes. Las muestras positivas fueron replicadas con el fin de purificar el cultivo y contar con un separio (Konemam, et al., 2008). Se elaboró un historial o record de las muestras de los hongos hallados (crecimientos de los micelios, observación de los esporangios) para cuantificar y establecer la infor-

Figura 1. Aislamiento en laboratorio Figura 2. Cultivo del agente micótico


mación: características de los individuos, localización geográfica, altura sobre el nivel del mar, temperatura promedio, precipitación, tiempo de estudio y principa-les enfermedades infecciosas (mapa epidemiológico).

Análisis estadístico

Se hizo un estudio descriptivo para establecer la pre-sencia o ausencia de hongos en todas las muestras examinadas. Los datos registrados se analizaron me-diante una hoja de cálculo (Excel, 2010 y el programa SPS) y se expresan como frecuencias con su respectiva estadística de probabilidades.

Resultados

El aislamiento microbiológico de las lesiones de los peces corroboró que en once piscícolas de las cator-ce seleccionadas previamente, los peces presentaron sintomatología compatible por infección micótica: for-maciones erosivas, pérdida de continuidad en la piel del cuerpo y base de las aletas con alteración de los tejidos y coloración anormal; incluso con desprendi-miento de piel y escamas en algunos peces.

La distribución de los peces afectados por municipio se presentaron de la siguiente manera: cinco piscícolas ubicadas en el municipio del Zulia, tres en San Caye-tano y tres en el municipio de Puerto Santander. De estas zonas de estudio se colectaron cuarenta y dos peces en total. El número de peces afectados se distri-buyeron de la siguiente forma: en las piscícolas del Zu-lia, en la número 1, 2 peces; en la número 2, 5 peces; número 3, 4 peces; número 4, 2 peces; y en la número 5, 6 peces. En las piscícolas del municipio San Cayeta-no, en la número 1, 3 peces; en la número 2, 5 peces;

y en la número 3, 4 peces. En el municipio de Puerto Santander, en la piscícola número 1; 3 peces; número 2, 5 peces; y número 3, 4 peces. De esta forma se evidencia que en todas las piscícolas estudiadas se ais-laron hongos, de un total de 42 peces muestreados en forma instantánea (tabla 1 y figuras 1 y 2).

En la tabla 1 se observa que, en las once piscícolas estudiadas, se aislaron peces afectados por lesión con hongos. El número de peces lesionados fue entre 1 y 6 peces, ambas frecuencias se presentaron en el munici-pio de El Zulia. La mayor frecuencia de aislamiento de peces enfermos por lesión micótica en las piscícolas de los tres municipios fue de cuatro peces, cantidad que representa el 38,08% de los aislamientos.

En la figura 3 se aprecia, que el municipio donde más piscícolas se encontraron peces afectados fue en el municipio El Zulia con cinco, mientras que en las pis-cícolas ubicadas en los municipios de San Cayetano y Puerto Santander fueron de a tres para cada munici-pio. El menor número de peces aislado con lesiones micóticas fue en el municipio El Zulia, con un pez; al igual que el mayor número, con seis peces. En los de-más municipios, la frecuencia de aislamientos estuvo entre 3, 4 y 5 peces. Cabe la posibilidad de que el fac-tor epidemiológico más incidente para la presentación de la enfermedad por hongos fue la manipulación para clasificación y el traslado de los peces más grandes en los cultivos estudiados.

A continuación en la figura 4 se muestran las frecuen-cias y la estadística respectiva del aislamiento de hon-gos en las piscícolas de El Zulia, San Cayetano y Puerto Santander.

Tabla 1. Número peces afectados por piscícola en cada municipio estudiado.

Piscícola # MunicipioPeces

afectadosTotal peces estanque

F absoluta F relativa %

1234567891011

EL ZuliaEL ZuliaEL ZuliaEL ZuliaEL ZuliaPto SantanderPto SantanderPto SantanderSan CayetanoSan CayetanoSan Cayetano

35416453443

184195210200187165150172185205198

32411423443

0,0710,1190,0950,0230,1420.0950,1190,0710,0950.0950,71

7,1411,909,522,3814,289,5211,907,149,529,527,14

Total 42 2051 31 1 100


En la figura 4 se aprecia que la mayor frecuencia de peces afectados por lesión con hongos fue de 4 peces y las menores frecuencias fueron para piscícolas con 1 y 6 peces. Así se obtiene una probabilidad de 36,36% para 4 peces y de 8,66% para aislamientos de 1 y 6 peces, respectivamente.

El número de peces afectados y la ubicación de las lesiones de mayor presentación en los peces aislados, se observan en la tabla 2.

Se indica que las regiones anatómicas más afectadas por la presencia de hongos fueron en su orden: la aleta caudal, 19 ejemplares con afectación (45,3%); base de la aleta dorsal, 14 peces (33,3%); y flanco o costados, 9 peces (21,4%). De esta manera se determina que las regiones más afectadas por micosis se presentaron a nivel de las aletas caudal y dorsal, que equivalen al 78,6% de los aislamientos (ver figuras 5 y 6). Mientras que no se encontraron lesiones en la cabeza, la región ventral, ni en los opérculos. Por otra parte la mayor incidencia de las micosis se presentó en peces de 6 a 9 meses de edad, con pesos entre 450 a 750 gramos,

es decir peces adultos (cebados), destinados para co-secha y consumo final.

Los cultivos microbiológicos mediante los medios enri-quecidos mencionados anteriormente, que se hicieron de estas lesiones, se muestran en la tabla 3 y figura 2. Fueron identificados cuatro géneros de hongos (Fu-sarium sp, Mucor sp, Penicillium sp y Aspergillus sp), (ver figuras 10 al 13) clasificados dentro de los grupos Ascomicetes, Zigomicetes y dos Cándidas (tabla 3 y fi-guras 5 y 6). Dicha identificación determinó una pro-porción de 50% de AscomIcetes, 25% de Zigomicetes y 25% de Levaduras. Se sabe que la mayoría de estos hongos son oportunistas y se localizan en todos los ambientes, tanto en plantas como animales (peces), la tabla 3 resume los resultados expresados como por-centajes del hallazgo del agente infeccioso.

En la tabla 3, se observa que el grupo de hongos As-comicetes representó el 50% de los hongos aislados, lo que corresponde a un 57,15% de los peces afecta-dos. Por su parte, las levaduras (Cándidas) equivalen al 7,14%, el menor porcentaje de peces enfermos por hongos en las piscícolas estudiadas.

Figura 3. Número peces afectados por municipio.

Tabla 2. Número de peces por hongos y región anatómica comprometida

Número peces afectados Región anatómica Porcentaje de peces afectados

19149

Aleta y pedúnculo caudalBase aleta caudalCostados (flanco)

45,333,321,4

Total 42 100


En la figura 7 se aprecia que la mayor proporción de géneros de hongos aislados en cachama blanca en los municipios de Norte de Santander fueron: Fusarium sp., Aspergillus sp. y Pencillium sp. con el 57, 15%, res-pectivamente y las menores proporciones con el 25% para los hongos Mucor sp y Cándidas sp.

Discusión

Es posible que la microbiota fúngica en los peces muestreados propicie la presencia de otros agentes patógenos como las bacterias, favorecido por factores predisponentes como las lesiones superficiales halla-das en los peces de este estudio, además de causar procesos inflamatorios como respuesta natural de los tejidos. Es importante considerar que, de los hongos aislados Fusarium, Aspergillus y Penicillium pueden ser patógenos tanto a los animales y al humano debido a las toxinas que producen. Asimismo en esta inves-tigación no se encontró la presencia del hongo Sa-prolegnia en ninguna de las muestras analizadas. Por lo tanto este estudio difiere de los hongos aislados en peces por otros investigadores como Rodríguez et al.,

Figura 4. Frecuencias de los peces afectados por hongos.

Figura 5. Daño en pedúnculo caudal y sepsis bacteriana se-cundaria a la lesión micótica.

Figura 6. Lesiones en los costados (flancos)

Tabla 3. Proporción y porcentaje de hongos aislados en las piscícolas de estudio.

Grupo Hongo Género Proporción % Peces afectados%

AscomicetesZigomicetesCándidas

Fusarium sp., Aspergillus sp. y Penicillium sp.Mucor sp.Levaduras

502525

57,1535,717,14


(2001), quienes hallaron en estaciones piscícolas de México los hongos Ichtyophonus hoferi, Saprolegnia sp. y Branchyomices sanguinis. De igual forma contro-vierte los resultados conseguidos por Bunkley-Wiliams et al., (1995) en aguas dulces de Puerto Rico en tila-pia sp. quienes reportaron afección sólo por el hon-go Saprolegnia. También, Ortega et al., (2005) en el Norte de España mencionaron que las enfermedades más frecuentes en salmónidos por hongos se debie-ron a Saprolegnia sp. Además Verján y Eslava (2001) en algunas regiones piscícolas de Colombia señalan al hongo Saprolegnia como el más frecuente conta-minante de peces. Consideramos importante indicar que en nuestra investigación no hemos podido aislar el hongo Saprolegnia y una posible explicación podría deberse a las altas temperaturas del agua en los es-tanques estudiados (mayores a 28 °C), lo que coinci-de con los resultados de otros investigadores (El-Feki, 1987; Diéguez-Uribeondo et al., 1997) para quienes las altas temperaturas del agua pueden impedir el cre-cimiento y desarrollo de Saprolegnia sp. Con relación a las micosis de peces reportadas en Colombia nuestra investigación coincide en parte con los hallazgos ob-tenidos por Díaz et al., (2000) en peces reproducto-res de cachama (Colossoma macroporum), cultivados en el centro piscícola de la Universidad de Córdoba, Colombia quienes reportaron la presencia de 18 di-ferentes géneros de hongos, de los cuales, cinco de ellos son los mismos que hemos identificado en el pre-sente estudio: Fusarium, Mucor, Penicillium, Aspergillus y Cándidas, de igual forma estos investigadores sos-tienen que no aislaron el hongo Saprolegnia. Por otra parte las investigaciones de Aranzazu et al., (2008) y Rodríguez et al., (2008), en estanques piscícolas de Antioquia, Colombia se evaluó la presencia de enfer-medades en diferentes peces de agua dulce. Allí se reporta la presencia de diferentes agentes infecciosos como bacterias, parásitos, pero presentan pocos ha-

llazgos en lo concerniente al aislamiento de hongos. También en los Llanos Orientales y diferentes regiones de Colombia Eslava e Iregui, 2004 han aislado en ca-chama el hongo Saprolegnia sp.

Para explicar en parte la cantidad y variedad de hon-gos aislados en los especímenes de cachama blanca del presente estudio, posiblemente se deban a los cambios drásticos de temperatura del agua en las po-blaciones estudiadas en la transición verano e invier-no. Aquello provoca estrés en los peces y favorece la presencia de diversos agentes microbianos, hongos y levaduras entre otros (Eslava et al., 2001). Y con mayor importancia por los diferentes manejos técnicos en las piscícolas estudiadas (manipulación excesiva e inapro-piada de los peces por parte de los productores, prác-ticas inapropiadas en la alimentación, eutroficación de los estanques por excesiva materia orgánica) (Iregui et al., 2008). En el mismo sentido Willoughby (1994) sostiene que con relación a la proliferación de los hon-gos éstos presentan diferentes armas y mecanismos para diseminarse fácilmente, entre ellas, las esporas e hifas que le permiten la multiplicación sobre los peces muertos, además de los restos del alimento no consu-mido o por la materia orgánica en descomposición.

En su mayor parte, las lesiones presentadas en las diferentes regiones anatómicas de los ejemplares muestreados, coinciden con los trabajos de otros in-vestigadores como Aller y Fregeneda (1987) en peces salmónidos de España, contaminados por micosis. No obstante, los investigadores Eslava e Iregui (2008), al igual que Conroy (2005), encontraron lesiones ubica-das principalmente en aletas, boca y piel afectados por el hongo Saprolegnia; debidas, la mayoría de los casos, con mala higiene en las piscícolas y al traslado (mani-pulación) de las tilapias de un estanque al otro.

Conclusiones

La información obtenida del aislamiento de varios géneros de hongos y levaduras permite aportar en la construcción de un banco de datos y mapa epide-miológico sobre las afecciones micóticas más repre-sentativas en cachama blanca de Norte de Santander. Además es importante indicar que no se aisló el hongo Saprolegnia, que comúnmente afecta a los peces en aguas dulces y saladas, según la literatura sobre lesio-nes fúngicas.

Agradecimientos

Agradecemos la asesoría recibida durante el trabajo de cultivo e identificación de los hongos a los Doc-tores microbiólogos Félix Ortiz y Janethe Vera, de la

Figura 7. Proporción y porcentaje de cahama blanca afecta-das (hongos).


Figura 9. Cándida sp. aisladas

Figura 11. Hongo Aspergillus sp.

Figura 13. Hongo Fusarium sp.

Figura 8. Cándida sp. aisladas

Figura 10. Hongo Penicillium sp.

Figura 12. Hongo Mucor sp


Universidad de Pamplona. Igualmente, a la microbió-loga MSc. Estella Vásquez del Politécnico Colombiano Jaime Isaza Cadavid, por su colaboración.

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