Hidrólisis del almidón por la amilasa salival

UNJFSC INGENIERÍA AMBIENTAL BIOQUÍMICA

HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL

PRACTICA N° 02

INFORME DE LABORATORIO:

“HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN POR LA AMILASA SALIVAL”

DOCENTE : Lic. Héctor H. Toledo Acosta.

INTEGRANTES : Dámazo Gálvez, Lizbeth N.

Martínez Gil, Fiorella

Ogura Esteban, Josselyn

Medina Quiroz, Mishell

Taipe Arone, Fortunato

Bullón Guzmán, Danny

Gonzales Chávez, Frank

Lucas Román, Virna

E.A.P. : INGENIERÍA AMBIENTAL

GRUPO : II.

FECHA : 13 de Mayo del 2014.

HUACHO - PERÚ

2014



1. RESUMEN

En el presente informe se da conocer los resultados de la Segunda Sesión de

laboratorio de Bioquímica, la cual trata acerca de la HIDRÓLISIS DEL ALMIDÓN

POR LA AMILASA SALIVAL.

Para estudiar la hidrólisis del almidón (desdoblamiento), por acción de la amilasa,

se aprovechara el hecho de que el lugol (específicamente el yodo que contiene el

lugol), se incorpore a la fracción helicoidal del almidón dando un color azul y a

medida que la hidrólisis progresa, el color azul va desapareciendo y cambia a rojizo

o café claro. La baja temperatura inhibe el proceso hasta ser capaz de detenerlo.

Un pH muy ácido o muy alcalino, también puede inhibir el proceso.

Es importante que conozcamos la estructura y propiedades químicas de los

compuestos que se van a utilizar, por lo que es recomendable acudir a notas de

clase o a un libro de texto de bioquímica general para un mejor entendimiento y

aprovechamiento de la práctica y para presentar y discutir los resultados

obtenidos en el cuaderno de prácticas.

2. OBJETIVOS

2.1. Objetivo General

Demostrar la acción de la amilasa salival sobre el almidón.

2.2. Objetivos Específicos

Identificar de forma cualitativa las propiedades de la amilasa salival.

Identificar la acción de la amilasa de la saliva sobre el almidón.

Demostrar que el pH y la temperatura influyen en la acción de la amilasa.



3. MARCO TEÓRICO

ENZIMAS

3.1. DEFINICIÓN GENERAL:

Las enzimas son proteínas que efectúan

una acción catalítica, es decir,

favorecen el que se produzca una

reacción determinada.

La presencia de las enzimas dentro del

cuerpo de los animales, permite que

muchas reacciones puedan llevarse a

cabo bajo condiciones de temperatura

constante, y un pH con poca variación.

Existiendo en el cuerpo una gran

cantidad de enzimas y de acorde a la práctica detallaremos de la enzima

amilasa a continuación:

a. LA AMILASA

Es una enzima que actúa en los procesos de digestión de carbohidratos,

específicamente actúa sobre el almidón, es una enzima glucolítica.

i. FUNCIÓN:

Es hidrolizar los enlaces glucosídicos del tipo alfa 1,4 de la fracción

amilosa de la molécula de almidón. La cual actúa desdoblando el almidón

hasta alfa dextrinas, y luego estas hasta maltosa (aunque predominan las

alfa dextrinas), en cierto punto de la hidrólisis, se producen

eritrodextrinas (llamadas así porque se tiñen de rojo si se usa lugol).

ii. PRODUCCIÓN

Principalmente en el páncreas, y en el caso del hombre y del cerdo,

se produce en cantidad mucho menor en las glándulas salivales.

Fuera del cerdo, el resto de los animales domésticos, únicamente

producen amilasa de origen pancreático.

iii. MEDIOS ÓPTIMOS PARA LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA

La acción de la amilasa se efectúa mejor a un pH cercano a neutro.

Además de la diferencia en concentración, esta es otra de las causas por

las que la amilasa pancreática es más activa que la salival, ya que en el

estómago el pH es muy ácido, pero a nivel del intestino delgado es

alcalino ligero.

La temperatura que permitirá la acción de la amilasa es de 37° C.



4. MATERIALES 4.1. INSTRUMENTOS Y REACTIVOS DE LABORATORIO

4.1.1. Instrumentos:

1 Cocina eléctrica.

1 Gradilla

1 Pizeta.

4 Tubos de ensayo.

2 Vasos de precipitado

de 100 ml.

4 Pipetas de 5 y 1 ml (2 de cada uno).



4.1.2. Reactivos: 10 gts. (1 ml) de H2SO4

(diluido al10%).

20 gts. de LUGOL (solución).

10 gts. (1 ml) de NaOH (diluido al 5 %).

8 ml. de SOL. ALMIDÓN (diluido al 2 %).

4.2. INSUMOS Y MATERIALES ADQUIRIDOS POR LOS ESTUDIANTES 4.2.1. Insumos: 15 cubitos de hielo.

1 cojín de agua destilada.

10 ml de saliva.

Gasa médica.

4.2.2. Materiales: 1 lápiz marcador.

1 cinta masketein.

Toallas de papel.

Cámara fotográfica.

H2SO4



5. PROCEDIMIENTO

5.1. Preparar la solución de almidón:

5.2. Obtención de muestra de saliva

1° PASO

En una vaso de precipitado de 10 ml añadiir 25 gr de

maizena.

2° PASO

Añadir 40 ml de agua .

3° PASO

Homogenizar la muestra.

4° PASO

una vezz homeginazada esta lista para utilizar.

PASO 1: Colocar la pieza de gasa sobre el vaso de precipitado.

PASO 2: Adicionar la muestra de saliva. La cual pasara a tráves de la gasa y será recepcionada en el vaso de precipitdo.

PASO 3: Complete los 10 ml de saliva. Siemprre teniendo en cuenta que no se forne espuma.



5.3. Preparar un baño María a una temperatura de 40 °C.

5.4. Rotule los cuatro tubos y proceda según el siguiente esquema:

TUBO

SOLUCIÓN

1 2 3 4

Sol. Almidón 2 ml. 2 ml. 2 ml. 2 ml.

Lugol 3 gts. 7 gts. 3 gts. 3 gts.

Sol. H2SO4 1 ml. ---- ---- ----

Sol. NaOH ---- 3 gts. ---- ----

Saliva 1ml 1ml 1ml 1ml

1 PASO

Coger un vaso de

precipitado de 50 ml.

2 PASO

Adicionar agua de grifo.

3 PASO

Poner a hervir.

4 PASO

Entibiar a temperatura

de 40° C.

ROTULE 4 TUBOS DE ENSAYO

PROCEDA SEGÚN EL ESQUEMA



5.4.1. Tubo 1

5.4.2. Tubo 2

OBSERVACIONES: Se tornó color azul con mayor intensidad, esto se debe a que el lugol en presencia del almidón cambia de color. Por lo tanto la amilasa fue desnaturalizada.

OBSERVACIONES: A este tubo se adiciono: 4 gts. de lugol y 2 ml. de sol. NaOH (más de lo indicado). Si se decoloro a causa de que la sol. NaOH no estaba concentrada. Por lo tanto si hubo reacción enzimática.

PASO 1

Añadir 2 ml de sol. de almidón.

PASO 2

Adicionar 4 gts. de lugol.

PASO 3

Adicionar 1 ml de H2SO4.

PASO 4

Por ultimo adicionar 1 ml. de saliva.

PASO 5

Llevar a baño María a 40 ° C.

OBSERVAR Y ANOTAR

PASO 1


PASO 2


PASO 3

Adicionar 1 ml de NaOH.

PASO 4


PASO 5

Llevar a baño María a 40 ° C.

OBSERVAR Y ANOTAR



5.4.3. Tubo 3

5.4.4. Tubo 4

PASO 1


PASO 2


PASO 3


PASO 4

Llevar a baño María a 40 °C.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: Se decoloro rápido y la intensidad del color fue media. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática óptima y rápida.

PASO 1


PASO 2


PASO 3

Por ultimo adicionar 1 ml. de

saliva.

PASO 4

Colocar en una vaso con precipitado de

hielo picado.

OBSERVAR Y ANOTAR

OBSERVACIONES: Si decoloro pero la intensidad fue ínfima, pero al añadir la saliva. Por lo tanto se realizó la actividad enzimática, pero lentamente por la baja temperatura.



6. RESULTADOS

7. CUESTIONARIO GENEROSO

¿Cómo actúa la amilasa sobre el almidón?

RPTA:

La enzima amilasa degrada el almidón

¿Cómo está formado el almidón químicamente?

RPTA:

El producto formado por la polimerización de miles de monómeros de

glucosa es el almidón.

¿Qué es la amilasa desde el punto de vista químico?

RPTA:

Una enzima encargada de degradar el almidón.

¿Cuál es el papel que desempeña el almidón en los animales?

RPTA:

Los polisacáridos que ingerimos son de dos tipos principales: almidón

amilosa y amilo pectina, de vegetales y granos, y glucógeno del tejido

animal. Los polisacáridos de la dieta menos la celulosa se hidroliza en la

boca mediante una reacción catalizada por la enzima amilasa salival. La

velocidad de la hidrólisis catalizada por esta enzima, disminuye en el

estómago por los iones H+1. La glucosa es el principal producto de la

hidrólisis del almidón y glucógeno. Alrededor de un tercio de la glucosa de

la dieta a va los músculos esquelético y cardiaco para la producción y

almacenamiento de energía; cerca de otro tercio va al cerebro; el tercio

restante va al hígado para almacenarse en forma de glucógeno. La glucosa

de la dieta que se distribuye en los tejidos se utiliza en la biosíntesis de

otros carbohidratos.

¿Por qué es necesario para los animales que la amilasa actúe sobre el almidón?

RPTA:

Porque si la amilasa no actuara sobre el almidón, el almidón no podría ser

degradado en moléculas simples, la glucosa, y no podría ser absorbida por

las células.

TUBO INTENSIDAD DEL

COLOR AZUL ACTIVIDAD

ENZIMÁTICA HIDRÓLISIS

1 Mayor No Inicial.

2 Ínfima Si Lenta

3 Pequeña Si Rápida

4 Ínfima Si Lenta



8. RECOMENDACIÓN

Sustituir el HCl por el H2SO4. Ser muy cuidadosos al momento de utilizar el H2SO4. Por no haber obtenido Al realizar el experimento con el TUBO 4, colocarlo en un vaso de precipitado con

hielo picado, retirar del vaso a la hora de observar y dar las conclusiones. Sería conveniente realizar otra prueba con el procedimiento del TUBO 2, para

saber con certeza la coloración que toma la muestra, la actividad y velocidad enzimática.

Se debería realizar una prueba tomando en cuenta la velocidad de la reacción de las enzimas con el sustrato.

9. CONCLUSIÓN

La amilasa degrada el almidón, según los factores y medios en donde se da la actividad enzimática. A continuación detallamos su acción en diferentes medios y factores que intervienen en la amilasa salival:

TUBO N° 1

El color de la muestra se torna de color azul intenso,

se debe a que el almidón en presencia del lugol se

torna de color azul violeta. Entonces la pregunta es:

¿Por qué la amilasa salival no degrado al almidón?

RPTA: Porque la misma fue desnaturalizada por el

H2SO4, por lo tanto no se produjo la degradación del

almidón.

Concluimos que el pH óptimo para que la amilasa

realice su actividad enzimática, está dentro del rango

5-7, siendo de 6,5 para el alfa-amilasa bacteriana y

pancreática. La explicación es concreta: La amilasa

fue desnaturalizada por el medio ácido donde se

encontraba.

TUBO N° 2

El color de la muestra se decoloro en segundo como

en el Tubo 3.

La pregunta es: ¿Porque no permaneció el color azul en

la muestra, si el medio es básico (por la adición de la

solución de NaOH)? RPTA: Porque, la solución del NaOH

no se encontraba concentrada como del H2SO4, ya que

el NaOH se encontraba bien diluido. Por lo tanto la

amilasa sobrevivió al medio y degrado al almidón.

Concluimos que el NaOH bien diluido, no influye en un

100% en la actividad enzimática. La explicación es

concreta: Se requiere de una mayor cantidad de NaOH

concentrada, para poder desnaturalizar a la amilasa

presente en las muestras.



TUBO N° 3

En pocos segundos la muestra se decoloro. La

pregunta es:

¿Por qué se decoloro rápido la muestra?

RPTA: Porque la amilasa se encontraba en las

condiciones adecuadas para degradar el

almidón.

Concluimos que la amilasa en un medio con

temperatura cálida (37°C) y con pH casi neutro

(5 - 7 aprox.), realiza adecuadamente su

actividad enzimática. La explicación es concreta:

Las enzimas dependen de dos factores

importantes para su actividad enzimática,

siendo estas la temperatura y el pH del medio

en que reaccionan.

TUBO N° 4

Cambio de color la muestra por la existencia del

almidón y al adicionar la saliva el color azul de la

muestra se tornó claro.

Las preguntas son:

¿Por qué hubo tal cambio de coloración? RPTA:

Porque la amilasa que se está presente en la saliva,

degrado al almidón existente en la muestra. Sin

embargo la actividad enzimática que realizo la

amilasa fue lenta.

¿Por qué la actividad enzimática de la amilasa fue

lenta? RPTA: Simple y llanamente por la baja

temperatura del medio donde se desarrolló la

actividad enzimática.

Concluimos que la temperatura baja disminuye o

influye en la actividad de la amilasa. La explicación es

concreta: La amilasa requiere de una temperatura

cálida (37 °C) para realizar una óptima actividad

enzimática.

Hidrólisis del almidón por la amilasa salival

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