Herramientas de la Biología Molecular

Material gráficoSecc.Genética

Fac. de Ciencias

Técnicas de manipulación genéticaTécnicas de manipulación genética

Aislamiento AmplificaciónSecuenciaciónExpresión

DE GENES

Los primeros avances

• 1965 - Arber y col. Enzimas de restricción

• 1969 - Berg. Trabajo con el virus SV40: posibilidad de integrar un fragmento de ADN al genoma de una bacteria (ADN recombinante!)

• 1973 - Cohen y Boyer. Primer plásmido recombinante (un gen de anfibio)

• 1975 - Moratoria. Conferencia de Asilomar

BASES FÍSICAS DE LA HERENCIA: CROMATINA Y CROMOSOMAS

•REPLICARSE•CONTROLAR LA EXPRESIÓN DEL RASGO•DE CAMBIAR (POR MUTACIÓN

ENZIMAS DE RESTRICCION

1965 - Arber y col.1978 - Smith y Nathan . Premio Nobel

Enzima de tipo II.Ej: Eco RI (E.coli cepa RY13)Reconocimiento y corte:

GAATTC CTTAAG

----G ---AATTC-------CTTAA G---

Los vectores

• Llevan un ADN foráneo

• son capaces de ingresar a una célula y replicarse dentro de ella

Plásmidos* ADN circular extracromosómico* Se replican autónomamente, utilizando enzimas de la bacteria* No.copias/bacteria: 1 a 3000* Tamaño pequeño (3 kb)* Inmóviles

Como vectores

* Marcadores* sitio de policlonaje* segmento del operón lac para una región de la beta glactosidasa* Capacidad 15 kb

Obtención de ADN en cantidad

Tipos de ADN a clonar

• ADN complementario

• ADN sintético

• ADN genómico

GENOTECA: clonado de un juego completo del genoma de una especie

SONDA: ácido nucleico marcado cuya complementariedad localiza una secuencia determinada

Biblioteca genómica

Otros vectores en procariotasOtros vectores en procariotas

* Bacteriófagos. Fago lambdaADN doble cadena de 48,5 kb, con extremos quele permiten circularizarsepermiten insertos más grandes

* Cósmidos: plásmidos con regiones cos de fagosinsertos de 40-45 kb

Metafase mitótica humana. Técnica standard, tinción con giemsa

2n = 46 (XX/XY)

Cromosomas de tipo metacéntricossubmetacéntricos y acrocéntricos.

CROMOSOMAS Y CARIOTIPOS

Podemos conocer la secuencia

Electroforesis

Cómo se observa tras la electroforesis

Ensayo de Southern blot

PCR

• Reacción en cadena de la polimerasa

• Emplea cebadores específicos

• Utiliza una polimerasa resistente al calor (Taq)

• Amplifica exponencialmente una secuencia determinada

Los glóbulos rojos

ANEMIA FALCIFORME

El fenotipo a nivel molecularResultado de la electroforesis

AS

La molécula de hemoglobina

La base molecular de la anemia falciforme

CROMOSOMA 11

El gen ocupa un lugar (LOCUS)(LOCUS) en el cromosoma.

GGTCTCCTC

G G T C T C CC C A G A G G CAC

GTG