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    HEMOTERAPIA LABORATORIAL

    (Hemocomponentes e Hemoderivados)2012.1

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    Prof. Dr. Patrick Menezes

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    EMENTA

    Imunohematologia 7 P. Histrico da hemoterapia.

    Conceitos bsicos de imunohematologia,principais grupos sanguneos,Caractersticas do doador.Importncia clnica, Reaestransfusionais, Prova de Coombs.

    Banco de sangue Aulas prticas abordando as principaistcnicas de imunohematologia. Provacruzada, GSRh, Coombs, PAI, Provareversa, Pesquisa de D fraco.

    Hemoterapia Estudo dos principais testes sorolgicosempregados em hemoterapia

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    Hemoterapia

    Hemoterapia oemprego teraputicodos componentes do

    sangue;

    Hemocomponentes ouHemoderivados).

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    Eritropoese

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    Introduo

    1 unidade de sangue total = 450 ml de sangue+ 50 ml de anticoagulante

    Sangue total aps centrifugao

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    UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESTADO DO RIO DE JANEIROHOSPITAL UNIVERSITRIO GAFFRE E GUINLE

    UNIRIO / HUGG / LPC

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    Revisando conceitos...

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    O que imuno-hematologia

    o estudo da compatibilidade

    imunolgica entre componentessanguneos e seus receptores

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    Imuno-hematologia eritrocitria

    grupo sanguneo: antgenos de superfcie doseritrcitos

    hoje conhecidos mais de 250 antgenosagrupados em 29 sistemas.

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    Antgenos eritrocitrios

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    Aglutinao

    As reaes antgeno-anticorpo so reveladasatravs do fenmeno da aglutinao.

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    Atuao do biomdico nobanco de sangue

    Executar o processamento de sangue e suassorologia;

    Realizar exames pr e ps transfusionais;

    Assumir chefias tcnicas, assessorias e direo

    de unidades;

    Manusear equipamentos;

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    Nivelamento de conceitos

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    O sangue e as diferentes culturas

    Culto ao sangue nasreligies

    Sacrifcios realizados em

    diferentes povos:Astecas,Maias, povos dafrica, Europeus...

    Papa Inocncio VIII (1492)

    Este arquivo est disponvel em:http://www.ccb.ufsc.br/~cristina/sm_2005_1_med7002.htm 15

    http://www.ccb.ufsc.br/~cristina/sm_2005_1_med7002.htmhttp://www.ccb.ufsc.br/~cristina/sm_2005_1_med7002.htmhttp://www.ccb.ufsc.br/~cristina/sm_2005_1_med7002.htm
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    Histria da Hemoterapia

    Na Grcia antiga os nobres bebiam o sangue dosgladiadores mortos na arena.

    1492- O papa Inocncio VIII ingeriu o sangue de trsjovens em busca da cura.

    1667- Jean Baptiste Denis , mdico do rei Luis XIV,infundiu sangue de carneiro em um doente mental .

    1788- Pontick e Landois realizaram transfuses entreanimais da mesma espcie.

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    Histria da Hemoterapia

    1818 - James Blundell transfundiu sangue humano emmulheres com hemorragia ps parto, ( primeira transfuso ).

    1901 - Karl Landstainer descobre os grupos sanguneosABO .

    1936 - Em Barcelona surgiu o primeiro banco de sangue,durante a guerra civil espanhola. Enfrentavam problemasrelacionados a coagulao do sangue.

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    Histria da Hemoterapia

    1940- Levine descobre o fator Rh.

    Aps a II guerra mundial surgem no Brasil os primeirosbancos de sangue privados.

    1970 - Implantao dos HEMOCENTROS, iniciando uma

    poltica do sangue.

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    Karl Landsteiner (1868-1943)Nobel de Medicina em 1930

    Gentipos Grupo Sanguneo Anticorpos

    AA A Anti-B

    AO A Anti-B

    BB B Anti-A BO B Anti-A

    AB AB -

    OO O Anti-A e B

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    AntgenoA

    Grupo sanguneo ABO

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    Anticorpo anti-B

    Antgeno B

    AntgenoABNenhum anticorpo

    Anticorpo anti-A

    Antgeno H(O)

    Anticorpo anti-A, Anti-B

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    Frequncias de ABO

    grupo O, 45%grupo A, 41%grupo B, 10%grupo AB, 4%

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    Funo dos grupos sanguneos

    Receptores de vrus, bactrias e parasitosSistema de grupo sanguneo MNS, Duffy e outros

    Participao no fenmeno de adeso de molculasSistema de Grupo Sanguneo Duffy e outros

    TransporteSistema de Grupo Sanguneo Kidd e outros

    Ao enzimticaSistema de Grupo Sanguneo Kell e outros

    Funo protica estruturalsistema de grupo sanguneo Gerbich e outros membrana (estomatcitos)

    ***dieta do grupo sanguneo????????????

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    PABO

    LewisGLOB

    HI

    LWXg

    DuffyLutheran

    IndianRaphJMHOka

    Carboidratos

    Glicoproteinas deestrutura ou funo

    desconhecida

    Regulao decomplemento

    Molculas de adeso

    Transporte e canais

    Enzimas

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    Outros sistemas antignicos

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    As transfuses podem ser:

    Isogrupoquando doador e receptor sodo mesmo grupo ABO

    Heterogrupodoador e receptor so degrupo sanguneo diferente

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    Compatibilidade

    Sangue: tipagem ABO / Rh (D)

    PAI: C, D,e E, Kell, Duffy, Kidd, MNS....

    H > de 500 Ags identificados

    Prova Cruzada Soro do receptor + hemceas do doador=

    incubao simular RT in vitro

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    SUBSTITUTOS DO SANGUECARREADORES ARTIFICIAIS DE

    OXIGNIOLIVRE DE CLULAS

    FONTE: Dra.Marcia Cristina Zago Novaretti

    Fundao Pr-Sangue.

    Disciplina de Hematologia FMUSP

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    Linhas de PesquisasTipos de

    substitutosdo sangue Background

    Base para o

    desenvolvimento dossubstitutos de G V

    Biosinttico Imita a naturezautilizando ahemoglobina para

    liberar oxignio aostecidos

    Produo de fluidos injetveisbaseados nas modificaesqumicas da hemoglobina(HBOC)

    Abitico Uso de produtosqumicostotalmentesintticos paraliberar oxignioaos tecidos

    Produzindo compostosinjetveis de emulso deperfluoroqumicos (PFCs)

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    Carreadores artificiais de oxignioem preparados de hemoglobina

    Dissociao da hemoglobina (toxicidade renal)

    Ao vasoconstritora ao se ligar ao xido ntrico

    Afeta a liberao de fatores relaxantes pela clula muscular

    A HEMOGLOBINA LIVRE DE CLULAS

    PRECISA SER MODIFICADA PARA USO TRANSFUSIONAL

    Carreadores de oxignio

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    Carreadores de oxigniolivre de clulas

    Hb Polimerizada Emulso de Perfluorocarbono

    Hb Conjugada

    Hb cross-linked

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    Polyheme (Northfield Lab.)

    Aprovado pela FDA, fase III de testes clnicos

    32 centros de trauma

    >3.000 casos de trauma

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    Carreadores Artificiais de oxignio

    Eficcia e segurana No se conseguiu at o momento obter um substituto de

    hemcias que seja seguro e eficaz

    Possibilidade de uso em situaes extremas (antes doatendimento mdico em casos de acidentes, guerras) com

    manuteno da volemia .

    ****AGUARDANDO NOVOS ESTUDOS

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    MEDICINA LEGAL

    O estudo dos grupos sanguneo tambm tem suaaplicao, atravs da:

    utilizao das tcnicas moleculares,

    nos estudos de paternidadee no reconhecimento de cadveres.

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    SISTEMA Rh

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    SISTEMA RhHISTRICO

    1939 - LEVINE E STETSON

    Uma mulher aps ter dado a luz a uma criana com DHRNapresentou reao transfusional grave aps ter sidotransfundida com o sangue ABO compatvel do marido.

    O soro desta mulher aglutinava 80% das hemcias ABO-

    compatveis.

    1940 - LANDSTEINER and WIENER

    Soro de coelho imunizados com hemcias do MacacoRhesus aglutinavam cerca de 85% das hemcias humanas.

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    Por homenagem a LANDSTEINER e WIENER anomenclatura do Sistema foi mantida como Rh.

    O alo-anticorpo humano foi renomeado anti-D.

    Os antgenos Rh esto presentes nas hemcias desde a6a semana de vida intra-uterina.

    Os receptores Rh (D) positivos podem receberhemciasRh (D) positivo ou Rh (D) negativo;

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    O sistema Rh o maior e mais complexo sistema de gruposangneo.

    At o momento, pelo menos 49 antgenos tm sidodefinidos por anticorpos Rh especficos .

    O antgeno D altamente imunognico (antignico),seguido pelos antgenos c e E.

    IMPORTNCIA EM OBSTETRCIA**

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    O sistema Rh apresenta certa complexidade gentica, almde variaes qualitativas e quantitativas em sua expresso.

    Assim, so usadas as seguintes designaes:

    O termo Rh Fracosubstituiu a designao Du. Este termo representauma variao quantitativa na expresso do antgeno D.

    O termo Rhnulldesigna uma condio rara, em que os antgenos dosistema Rh esto completamente ausentes.

    O termo "CDE" designa a determinao, recomendada para ospacientes Rh negativos, de outros antgenos menos freqentes dosistema

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    Legislao brasileira

    Em 1980, criado o programanacional de sangue e derivados( Pr - sangue )

    Lei de proibio dacomercializao do sangue: Pelosartigos 197 e 198 da constituio

    federal de 1988, o poder pblico responsvel pelas aesreferentes ao uso de derivados;

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    CICLO DO SANGUE

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    SUBSISTEMACOLETA

    SUBSISTEMAHEMOCOMPONENTES

    SUBSISTEMALABORATRIO

    Recepo Registro

    Pr-triagem TriagemHematolgica

    TriagemClnica Coleta

    ColetaExterna

    ServioSocial

    Processamento

    Estoque/Rotulagem Distribuio

    ExpurgoImunohemato-logia

    RecepoLaboratrio

    Sorologia

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    Tipos de Doadores

    Doadores espontneos

    Doadores de reposio

    Doadores autlogos

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    Tipos de Transfuso

    Programada: Para determinado dia e hora.

    No urgente:A se realizar dentro das 24 hs.

    Urgente:A se realizar dentro das 3hs.

    De extrema urgncia: Quando o retardo do incio datransfuso coloque a vida do paciente em risco.

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    descrita em 1921

    Binmio doador/receptor constitudo pelo mesmoindivduo.

    doao autloga pr-operatria requer a autorizao do

    mdico.

    O sangue retirado pode ser mantido preservado de 30 a 42dias em geladeira.

    No existe excluso permanente;

    NO correto por crenas religiosas *

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    Transfuso autloga

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    ProtocoloAUTOTRANSFUSO

    Qualquer indivduo adulto no perodo de at 5 a 45 diasantes de cirurgia eletiva;

    Protocolo de retirada e reinfuso:- 1u - 7 dias antes da cirurgia- 2 u - 14 dias antes da cirurgia- 3 u - 21 dias antes da cirurgia

    - 4 u - 28 dias antes da cirurgia- 5 u - 35 dias antes da cirurgia- 6 u - 42dias antes da cirurgia

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    Rotina de admisso para odoador

    Cadastro

    Pr-triagem

    (triagem hematolgica)

    Triagem clnica

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    Seleo clnica de

    doadores Idade : entre 18 e 65 anos18 anos completos e 65 anos

    completos, 11 meses e 29 dias.

    Peso > 50 kg - mnimo de 400ml de sangue. AC/Bolsa

    Estar bem de sade

    No estar em jejum

    Homens: de 2 em 2 meses, at 4 vezes/ano Mulheres: de 3 em 3 meses, at 3 vezes/ano

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    RDC N 57, DE 16 DE DEZEMBRO DE 2010

    RDC 153 DE 14/06/04 anterior

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    RESOLUO VIGENTE

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    DOAO

    Voluntria

    Annima

    Altrusta

    No remunerado

    Sigilosa

    Consentimento por escrito48

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    INTERVALO 2/2 meses4 doaes/ano

    3/3 meses3 doaes/ano

    Autloga protocolo Acima de 60 anos - a cada 6 meses**A reposio do plasma pelo organismo ocorre em 24 horas e a

    dos glbulos vermelhos em 4 semanas.

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    Gravidez: Inapta at 12 semanas ps parto

    Aborto: Inapta at 12 semanas

    Lactao: Inapta at 12 meses ps parto

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    ANEMIA Hb 12,5 Ht 38

    Hb 13 Ht 39O doador atinge o estoque de ferro que apresentava antes da doao,

    40 a 60 dias para os homens e de 50 a 90 dias para as mulheres.

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    ALERGIAS

    APTOS Assintomticos

    INAPTO TEMPORRIO

    at 72 h ps medicao

    INAPTO DEFINITIVO- atopias severas

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    INAPTOS DEFINITIVOS

    HIV

    Chagas

    Doena de encelopatia espongiforme humana

    Transplante crnea ou material biolgico base de duramter

    Uso drogas injetveis ilcitas

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    INAPTOS

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    INAPTOSTEMPORRIOS 12 M

    Aps cura de DST e sexo por troca e seus parceiros

    Sexo com parceria desconhecida sem preservativo

    Vtimas estupro

    que tiveram relao com outros homens ou as parceiras

    sexuais destes

    Percing ou tatuagem *

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    e que tiveram relao sexual com pessoa c/ examereagente p/ HIV ou Hepatite C ou B ou outra infecosexual ou sangunea

    Detidos por mais de 24 horas

    Exposio sangue ou material biolgico

    Parceiros hemodialisados ou transfundidos

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    CIRURGIAS

    GRANDE PORTE6m a 12 m

    PEQUENO PORTE3 m

    TRATAMENTO DENTRIO

    72 h

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    TRIAGEM CLNICA DE

    DOADORES DE SANGUE

    Mtodo importante capaz de captar overdadeiro doador de sangue.

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    Finalidade da entrevista Avaliar os antecedentes patolgicos e

    os possveis fatores de risco daquele candidato doao.

    So investigados dados que protegem tanto o doador

    quanto o receptor.

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    VOTO DE AUTO EXCLUSO

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    VOTO DE AUTO-EXCLUSO

    Esta informao prestada por voc confidencial e ser mantida

    sob sigilo. No tem qualquer implicao pessoal. Tem a finalidadede proteger a pessoa que ir receber seu sangue.

    RESPONDA COM SINCERIDADE MARCANDO COM XUMA DAS ALTERNATIVAS.

    Meu sanguePODE SER USADO PARA TRANSFUSO.

    Meu sangue NO PODE SER USADO PARA

    TRANSFUSO, pois estou ou passei por situaode risco (homossexual, bissexual, heterossexual commltiplos(as) parceiros(as) e/ou viciado em drogas.

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    Afrese

    Leucafrese

    TrombocitafereseEritrocitaferese

    Plasmafrese

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    A h f d li d 2 bj ti

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    A hemafrese pode ser realizada com 2 objetivos

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    Transfusional:Definido como a obteno de um hemocomponente a partirde um doador nico. Ex.: 8u de plaquetasO principal hemocomponente coletado o concentrado de plaquetas

    Teraputico:Tratamento de um grande nmero de patologias

    Objetivo de remover um elemento patognicoou umasubstncia fisiolgica presente em concentraes

    indesejveisna circulao.

    Alguns doadores de sangue normalmente devido

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    Alguns doadores de sangue, normalmente devido ansiedade, podem apresentar efeitos adversos doao, sendo mais freqente a ocorrncia de:

    A) tetaniaB) vmitos;C) lipotimia.D) parestesiaE) convulso;

    Lipotmia vulgarmente designada por perda dos sentidos, desmaio ou desfalecimento. Tetania / espasmos musculares; Parestesia/ sensaes cutneas subjetivas (ex., frio, calor, formigamento, presso, etc.) Convulso/ contraes involuntrias dos msculos, de inicio sbito.

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    Provas anteriores

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    PROCESSAMENTODO SANGUE

    Fracionamento do sangue

    Obteno de Componentes

    Testagem do sangue coletado

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    FRACIONAMENTO

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    FRACIONAMENTO

    PREPARAO DOS HEMOCOMPONENTESConcentrado de Hemcias

    Plasma

    Concentrado de PlaquetasCrioprecipitado

    ENCAMINHAMENTO PARA ESTOCAGEM( aguardar liberao)

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    Processamento em Sistema

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    Processamento em SistemaFechado

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    SOROLOGIA

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    SOROLOGIA

    TRIAGEM SOROLGICA: Testes de Altasensibilidade

    Hepatite B: HBSAg, Anti-HBcHepatite C : Anti-HCVVDRLElisa ChagasElisa HTLV 1-2Elisa HIV1-2

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    Segurana Transfusional

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    Segurana Transfusional(rastrear)

    Coleta de amostra e administrao dehemocomponentes

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    LIBERAO

    Devem ser mantidos em quarentena, ou seja,separados dos produtos liberados.

    somente liberar aps o trmino de todos ostestes laboratoriais e autorizados pelo controlede qualidade.

    Os produtos devem ser liberados somente porpessoas autorizadas.

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    C di d

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    Condies deArmazenamento

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    PR ESTOQUE:- aguarda resultado sorolgico e tipagem

    DESCARTE:- sorologia positiva

    ESTOQUE:- de acordo com a data de validade

    76

    Separao

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    Separao

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    Armazenamento

    78

    O TRANSFUSO????

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    O que TRANSFUSO????

    a administrao de produtos sangneos(hemoderivados) que podem ter origem

    autloga ou alognica

    Indicao: reposio de clulas ou protenasnecessrias para funes especficas

    H d i d

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    Hemoderivados

    Sangue total: coletado em soluo comcido ctrico + glicose

    Indicaes RESTRITAS

    PrticaFracionamento/ Processamento

    F i

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    Fracionamento

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    Concentrado de Hemcias

    Volume: 280-400ml Massa de Clulas:150-250ml

    Estocagem: 42d (1-6C) Hematcrito da Bolsa: 50% Indicaes

    Sangramento Agudo Anemia Normovolmica

    Cada Unidade de CH: Hbem 1g e o Ht em 3%

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Concentrado de Plaquetas Comuns: derivados do ST em

    que PRP d origem ao CPl35-60ml = 1U Plaquetas

    Por Plaquetafrese: 1U de 1nico doador= 5-8 U PlaquetasIndicaes:TrombocitopeniasTrombocitopatias

    Dose: 1U/ 10Kg

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    Plasma

    PFC: separado do ST econgelado at 8h ps coleta

    1U= 200/225ml

    Dose: 10-15ml/Kg

    Indicaes: Coagulopatia

    C i i it d

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    Crioprecipitado

    Derivado do Plasma descongelado lento 1U: 5-15ml Rico em: FVIII, FXIII, fibrinognio, FvW Indicaes

    Hipofibrinogenemia Deficincia de Fator XIII

    Dose: 1U/ 10kg de peso

    O t H d i d

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Outros Hemoderivados

    Albumina

    Gamaglobulina

    Fatores de Coagulao Especficos

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    HEMODERIVADOS

    FATOR VIII FATOR IX

    ALBUMINA IMUNOGLOBULINA

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    VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

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    VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

    HEMCIASdepende do tipo de anticoagulante:- CPDA 1 35 dias (mais usada) cido ctrico,Citrato de sdio.Fosfato de Sdio,Dextrose e Adenina

    - CPD SAG Manitol 42 dias Aumenta a sobrevida e possibilita o armazenamento das hemcias por at

    42 dias entre 2C a 6C cido ctrico,Citrato de sdio,Fosfato de Sdio,Dextrose,glicose, NaCl..

    88

    VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    VALIDADE DOS HEMOCOMPONENTES

    PLASMA - 1 ANO a -20C

    PLAQUETAS - 3 a 5 DIAS

    CRIOPRECIPITADO - 1 ANO

    89

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    90

    Comit Transfusional

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    LEGISLAES

    MANUAL DA QUALIDADE

    REGULAMENTOSPROCEDIMENTOSOPERACIONAIS PADRO

    DOCUMENTOS

    TREINAMENTO CONTNUO

    REGISTROS

    R t f i i

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Reaes transfusionais

    Aproximadamente 10% dos receptores apresentamreaes transfusionais.

    Toda a reao transfusional deve serregistrada e

    notificada.

    Classificao:

    Agudas ou imediatas Tardias

    92

    Complicaes transfusionais

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    Complicaes transfusionaisImune No -imune

    Imediatas

    Reao febril no-hemoltica Sobrecarga volmica

    Reao hemoltica aguda Contaminao bacteriana

    Reao alrgica (leve, moderada, grave) Hipotenso por inibidor

    da ECA

    TRALI (Transfusion Related Lung Injury) Hemlise no-imune

    Hipocalcemia

    Embolia area

    Hipotermia

    Tardias Aloimunizao eritrocitria Doenas infecciosas

    R t f i i d

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    Reaes transfusionais agudas

    Hemolticas imunes

    Erro na identificao da amostra colhida.Erro na identificao da bolsa.

    Erro na identificao do paciente.

    Febre, mal estar, agitao, dispnia, nuseas, cefalia,hipotenso, perda da conscincia.

    94

    Febris no hemolticas

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Febris no hemolticas

    Pode ocorrer logo aps o incio da transfuso ouat 4hs aps o trmino.

    Presena de anticorpos citotxicos.

    Tremores, calafrio, cefalia, nusea e vmitos,febre, calafrios, alteraes respiratrias, como

    taquipnia e ou dispnia.

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  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Alrgicas e anafilticas

    Pode ocorrer aps o incio da transfuso ou at 2hs aps otrmino.

    Anticorpos ou desconhecidas.

    Urticria, eritema, tosse, cefalia, dispnia, hipertenso,edema de glote e at o quadro de anafilaxia.

    96

    Hipervolemia

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Hipervolemia

    Quando recebe infuso de grande volume de sangue ou ainfuso muito rpida.

    Pacientes com ICC ou insuficincia renal.

    Hipertenso, dispnia, cianose, tosse, dor precordial e at

    edema pulmonar.

    97

    C t i b t i

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Contaminao bacteriana

    Bactrias que resistem s temperaturas de refrigerao.

    A gravidade depende do microorganismo contaminante e do

    estado geral do paciente.

    Febre, Vmito, hipotenso, dor abdominal, choque sptico.

    98

    Paciente 20 anos, vtima de acidente automobilstico, d entrada nopronto socorro com mltiplos ferimentos perda sangunea

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    pronto socorro com mltiplos ferimentos, perda sanguneaestimada maior que 40% da volemia. Foi solicitada transfuso de

    dois concentrados de hemcias.

    O banco de sangue deve:

    Liberar as bolsas tipo O negativo, se o termo de responsabilidade

    estiver assinado. Dar continuidade s provas de compatibilidade..

    99

    Provas anteriores

    Impresso I

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    100

    Testes laboratoriais tcnicas

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    Testes laboratoriais - tcnicas

    101

    Apresentao das tcnicas

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    102/125

    Imunohematolgicas

    Tcnica em lmina

    Ainda utilizada

    Baixa sensibilidade

    Grande margem de erro

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  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    Tcnica em tubo

    Mais utilizado

    Custo acessvel

    Boa sensibilidade

    103

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    104/125

    TCNICA DE GEL-CENTRIFUGAO EMCOLUNA DE AGAROSE

    Alta sensibilidade; Utiliza pouca quantidade

    de amostra;

    O resultado pode serarmazenado; Custo elevado.

    104

    http://images.google.com.br/imgres?imgurl=http://www.ortho-wire.com/pt/blood-group-serology/learning-library/abo-blood-group-system/images/pic_09.gif&imgrefurl=http://www.ortho-wire.com/pt/blood-group-serology/learning-library/abo-blood-group-system/page4.cfm&
  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    105/125

    Microplaca

    Alta sensibilidade;

    proporciona agilidade emgrandes rotinas;

    Alto custo.

    "leitor fotomtrico demicroplacas"

    105

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    106/125

    As reaes antgeno-anticorpo so reveladas atravs do

    fenmeno da AGLUTINAO ; Amais importante ferramenta de trabalho dos

    imunematologistas.

    106

    Antgenos dos eritrcitos /

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    107/125

    Anticorpos sricos

    107

    O fenmeno da aglutinao a reao antgeno-anticorpo

    Controle de qualidade dos reagentes p/

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    108/125

    imunohematologia

    108

    Positivo 4+

    Positivo 3+

    Positivo 2+

    Positivo 1+

    Fracamentepositivo

    negativo

    HEMLISE

    LAVAGEM DE HEMCIAS

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    109/125

    Quando uma tcnica prev a utilizao de hemcias lavadas, devemosrealizar esta lavagem da forma correta efetuando-a pelo menos 3vezes.

    1 Centrifugar a amostra a 4000 rpm por 5 min.

    2 Separar o plasma ou soro para outro tubo previamente etiquetado;

    3 Identificar outro tubo e pingar 4 gotas do concentrado de hemciasda amostra a ser preparada

    4 Encher o tubo com salina fisiolgica at 1 cm da borda. Tampar. 5 Homogeneizar e Centrifugar a amostra a 3.400 rpm durante 1 minuto

    e 30 segundos

    6 Retirar completamente o sobrenadante aps a lavagem invertendo-se o o tubo rapidamente

    7 Repetir os itens 4, 5 e 6 por mais 2 vezes 8 Preparar a suspenso de hemcias.

    109

    PREPARO DAS SUSPENSES

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    SUSPENSO DE HEMCIAS A 2%

    0,1 ml de concentrado de hemcias + 4,9 ml de salina

    1 gota de concentrado de hemcias + 49 gotas de salina

    SUSPENSO DE HEMCIAS A 5%***

    0,1 ml de concentrado de hemcias + 1,9 ml de salina

    1 gota de concentrado de hemcias + 19 gotas de salina

    SUSPENSO DE HEMCIAS A 10%

    0,1 ml de concentrado de hemcias + 0,9 ml de salina

    1 gota de concentrado de hemcias + 9 gotas de salina

    SUSPENSO DE HEMCIAS A 50% 0,4 ml de concentrado de hemcias + 0,8 ml de salina

    4 gotas de concentrado de hemcias + 8 gotas de salina

    110

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    111

    INTENSIDADE DAS REAES

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    4 + boto slido com pequenos grumos e fundo claro 3 + grumos grandes e numerosos com fundo claro 2 + grumos pequenos e numerosos com fundo rseo 1 + grumos pequenos e fundo bastante rseo W presena de minsculas aglutinaes em fundo

    bastante rseo 0ausncia de aglutinao, fundo bastante rseo com

    hemcias em suspenso. CM campo misto caracteriza-se pela presena de

    aglutinaes e de hemcias em suspenso, com fundo

    rseo He hemlise total ou parcial das hemcias. indicador de

    positividade

    112

    DETERMINAO DO GRUPOABO

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    113/125

    PROVA DIRETA OU GLOBULAR (BETH VINCENT) Consiste em por em contato soros-teste conhecidos, anti-A, anti-

    B e anti-AB, com glbulos vermelhos (GV) a serem testados, parase identificar a presena ou no dos antgenos A e B.

    PROVA REVERSA, SRICA (SIMONIN) Consiste em colocar em contato o soro a testar com pelo menos

    GV conhecidos A1 e B, permitindo reconhecer a presena ou no

    de anticorpos dirigidos contra estes antgenos.

    113

    ABO

    DETERMINAO DO GRUPO ABO

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

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    DETERMINAO DO GRUPO ABO

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    DETERMINAO DO TIPO Rho (D)

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    1. Identificar dois tubos de ensaio, como D e CTL.

    2. No tubo identificado como D, colocar uma gota de soro anti Rho (D)e no tubo identificado como CTL, uma gota de Controle Rh;

    3. Aos dois tubos adicionar uma gota de suspenso de GV a 5% emsoluo salina. Essa suspenso, pode ser feita no prprio plasmaou soro;

    4. Misturar bem e centrifugar os dois tubos a 3400 rpm por 15segundos ou 1000 rpm por 1 minuto;

    5. Ressuspender o sedimento, agitando delicadamente os tubos e lermacroscopicamente a aglutinao;

    6. Se o teste for negativo (aglutinao ausente), proceder conforme

    indicado no teste para pesquisa de D fraco.

    115

    Controle Rh um reagente que contm o meio macromolecular utilizado

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    116/125

    um reagente que contm o meio macromolecular utilizadona fabricao de soro anti-Rho (D), mas que

    imunologicamente inerte (isto , no contm anticorpos).

    Em virtude do meio com alto peso molecular (AC IgG e

    potencializadores) q o anti-D apresenta - podem ocorrerreaes falso positivas.

    um testemunho negativo, e deve ser do mesmo fabricantedo anti-D utilizado.

    116

    Pesquisa de D fraco

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    117/125

    1. Incubar ambos os tubos (D e CTL) por 15 minutos embanho-Maria a 370C;

    2. Lavar os GV de cada tubo por trs vezes, em soluosalina fisiolgica. Decantar completamente por inversorpida dos tubos, aps a ltima lavagem;

    3. A cada tubo, acrescentar duas gotas de soro anti-globulinahumana de amplo espectro ou soro de Coombs;

    4. Centrifugar 3400 rpm por 15 segundos ou 1000 rpm por 1minuto;

    5. Ressuspender o "boto" de GV, por agitao delicada eexaminar para aglutinao macroscpica;

    6. Anotar os resultados

    117

    A reao das hemcias com o controle de Rh0deve ser:

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    118/125

    deve ser:

    A) positiva

    B) Negativa.C) positiva se o Rh0 for negativo

    D) negativa se o Rh0 for negativo

    E) positiva se o Rh0 for positivo

    Se a reao com o soro-controle de Rh for positiva, a tipagem Rh considerada invlida.

    118

    Provas anteriores

    TCNICA DO COOMBS DIRETO (CD)

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    119/125

    1. Coletar a amostra de sangue

    2. Preparar uma suspenso de hemcias a 5%. 3. Colocar uma gota desta suspenso em um tubo de

    hemlise.

    4. Lavar trs vezes com salina fisiolgica.

    5. Adicionar 2 gotas da antiglobulina humana poli-especfica (anti-IgG e anti-C3d)

    6. Centrifugar 3400 rpm 15 segundos

    7. Ressuspender suavemente o boto de hemcias

    8. Observar a presena ou no de aglutinados 9. Anotar os resultados

    119

    As principais indicaes para a prova de Coombs diretaincluem:

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    120/125

    incluem:

    a) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas;

    b) diagnstico de anemia hemoltica em adultosc) demonstrao de anticorpos anti-B;

    d) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas;

    e) deteco de anticorpos incompletos, no soro, para

    triagem pr-transfusional.

    120

    Provas anteriores

    As hemcias do sangue devem ser lavadas em sorofi i l i l t t d di d

  • 7/16/2019 HEMOTERAPIA UCB

    121/125

    fisiolgico pelo menos trs vezes antes da adio doreagente AGH para:

    A) Eliminar as clulas hemolisadasB) remover traos de globulinas sricas livres

    C) neutralizar o excesso de reagente

    D) aumentar a ligao do antgeno ao anticorpo

    121

    Provas anteriores

    As principais indicaes para a prova de Coombs indiretaincluem:

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    122/125

    incluem:

    a) deteco de anticorpos desconhecidos no soro, para

    triagem pr-transfusional;b) deteco de anticorpos no soro, para finalidades de

    titulao;

    c) deteco de certos antgenos fracos nas plaquetas;

    d) demonstrao de auto-anticorpos do tipocrioaglutinina;

    122

    Provas anteriores

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    Refernc ias b ib l iog rficas

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    125/125

    BAIN, Barbara J. Clulas Sanguneas: Um guia Prtico. Artmed, 3a ed.,

    Porto Alegre, 2004.

    BLOODLINE - Site de Hematologia (www.bloodline.net)

    CARVALHO, William de Freitas. Tcnicas mdicas de hematologia eimunohematologia. 7a ed. Coopmed: Belo Horizonte, 1999

    FAILACE, R. Hemograma. Manual e interpretao. 3a ed. Editora ArtesMdicas Porta Alegre, 1995

    HENRY, John Bernard. Diagnsticos clnicos e conduta teraputica porexames laboratoriais.

    Manual Sistema Vacutainer

    Pequeno guia para coleta de sangue.Becton-Dickinson

    http://www.bloodline.net/http://www.bloodline.net/