HEMOGLOBIN HEMATOKRIT ERITROCITNE ... -...
Transcript of HEMOGLOBIN HEMATOKRIT ERITROCITNE ... -...
Ciljevi:
� Odrediti koncentraciju hemoglobina u punoj krvi
� Definirati pojam hematorkita
� Opisati postupke i pribor za određivanje
hematokrita pomoću mikrohematokritske metode
� Utvrditi hematokrit u uzorcima krvi
� Definirati pojmove hemodilucije i
hemokoncentracije
Ciljevi:
� Definirati pojam eritrocitne konstante
� Definirati pojmove MCV, MCH i MCHC
� Izračunati samostalno MCV, MCH i MCHC
HEMOGLOBIN
- sinteza hemoglobina počinje u eritroblastima i nastavlja se u normoblastima i retikulocitima
- građen je od:
GLOBINA: 2 αααα i 2 ββββ polipeptidna lanca; 140-150 AK (adult)HEM-a – (na svaki globinski lanac vezan je 1 hem)
� svaki hem veže na sebe 1 molekulu O2
= ukupno 4 molekula O2
- LABAVO i REVERZIBILNO vezanje O2
ODREĐIVANJE KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA U PUNOJ KRVI
KOLORIMETRIJSKA METODA
Princip reakcije:
Hemoglobin se oksidira kalij-fericijanidom u methemoglobin ��nastali methemoglobin s kalij-cijanidom stvara
stabilan obojeni kompleks = cijanmethemoglobin
Kemikalije: cijanid reagens (otrovan - pipetirati samo automatskom pipetom!)
Radna otopina: reagens otopiti u odgovarajućoj količini dH2O
Uzorak za analizu: krv
Dobro se promiješa. Nakon 5 minuta izmjeri se apsorbancija probe (Ap) i standarda (As) prema slijepoj probi.
RAČUN:
Proba Standard
Radni reagens 2,5 ml -
Uzorak 0,01 ml -
Standard - 2,5 ml
150xA
A
s
pHemoglobin g/L=
Uvjeti određivanja:
Valna duljina: 540 nmStaklena kiveta: 1 cmTemperatura: 20-25 oCSlijepa proba: radni reagens ili destilirana voda
Plazma = 55 -70%
Leukociti i trombociti
Eritrociti Hematokrit = 30-45%
Plastični kit
HEMATOKRIT
= volumni udio ERITROCITA u 1 litri krvi (jedinici pune krvi)
Pribor:
1. heparinizirana kapilara
2. kit za zatvaranje kapilara (plastična smola)
3. mikrohematokritska centrifuga (10 000 okr./min.)
4. čitač za mikrohematokrit
Materijal: kapilarna ili venska krv
ODREĐIVANJE HEMATOKRITA MIKROHEMATOKRITSKOM METODOM
Postupak:
� kapilara se uroni u uzorak krvi, zbog kapilariteta krv ulazi u kapilaru (3/4)
� kraj praznog dijela kapilare se zatali na plameniku ili začepi plastičnim kitom
� začepljena kapilara stavi se u centrifugu s zatvorenim krajem okrenutim prema periferiji(tariranje centrifuge!)
� centrifugira se 5 min. pri 10 000 okretaja/min
� kapilara se stavlja u pomično ležište čitača
� donji rub eritrocita namjesti se na donju crtu (0%)
� ležište s kapilarom pomiče se sve dok se gornja granica
plazme ne namjesti na gornju crtu čitača (100%)
OČITAVANJE MIKROHEMATOKRITA
�crta na pokretnom dijelu čitača namjesti se točno na gornji rub eritrocita i na ljestvici sa strane čitača očita se vrijednost hematokrita u L/L prema novim SI jedinicama (stare vrijednosti u %)
OČITAVANJE MIKROHEMATOKRITA
Fiziološke vrijednostihematokrita 0,3 – 0,4 L/L; (30-45%)
HEMODILUCIJA < 0,3 L/L
HEMOKONCENTRACIJA > 0,4 L/L
� Relativna – smanjen volumen plazme
� dehidracija
� Apsolutna – policitemija
� sva kronična plućna oboljenja (hipoksija)
� obitavanje na višim nadmorskim visinama
� tumori
� profesionalni športaši∗∗∗∗– doping test (eritropoetin)
• Hemokoncentracija = zgušnjavanje krvi
� Hemodilucija = razrijeđenje krvi
� gubitak (krvarenje) ili razaranje eritrocita koje koštana srž
ne može nadoknaditi
� smanjena proizvodnja eritrocita
� kronično zatajenje bubrega (nema sinteze eritropoetina)
ODREĐIVANJE ERITROCITNIH KONSTANTI= MCV, MCH i MCHC
- izračunavaju se kod svakog uzorka krvi nakon određivanja vrijednosti hemoglobina, broja eritrocita i vrijednosti hematokrita
MCV (mean corpuscular volume)
= prosječan volumen (zapremina) eritrocita
u krvi
�izračunava se tako da se volumen eritrocita (hematokrit) kojega čine eritrociti u litri krvi, podijeli s brojem eritrocita u litri krvi
LE
hematokritfLMCV
/10
10)(
12×
×=
http://web2.airmail.net/uthman/blood_cells.html
L/L
MCH (mean corpuscular hemoglobin)
= prosječna količina hemoglobina
po eritrocitu
�izračunava se tako da se količina hemoglobina iskazana u
g/L podijeli s brojem eritrocita u litri krvi
LE
LghemoglobinpgMCH
/10)(
12×=
MCHC
(mean corpuscular hemoglobin concentration)
= prosječna koncentracija hemoglobina u eritrocitima
� izračunava se tako da se hemoglobin iskazan u gramima na litru, podijeli s hematokritom u litri krvi
)/(
)()/(
LLhematokrit
LghemoglobinLgMCHC =
Predmeci za decimalne jedinice
� Deci d (10-1)
� Centi c (10-2)
� Mili m (10-3)
� Mikro µ (10-6)
� Nano n (10-9)
� Piko p (10-12)
� Femto f (10-15)
� Ato a (10-18)
� Eksa E (1018)
� Peta P (1015)
� Tera T (1012)
� Giga G (109)
� Mega M (106)
� Kilo k (103)
� Hekto h (102)
� Deka da (101)
MCV - mean corpuscular volume
� 1 femtolitar (fL) = 10-15L
� 1 pikogram (pg) = 10-12g
MCH - mean corpuscular hemoglobin
REFERENTNE VRIJEDNOSTI KONCENTRACIJE HEMOGLOBINA (Hb),
HEMATOKRITA (Htk) I ERITROCITNIH KONSTANTI
VRSTA ŽIVOTINJE
Hb(g/L)
Htk(%)
MCV(fL)
MCH(pg)
MCHC(%)
GOVEDO 80-150 24-46 40-60 11-17 30-36
OVCA 90-150 27-45 28-40 8-12 31-34
KOZA 80-120 22-38 16-25 5,2-8,0 30-36
SVINJA 100-160 32-50 50-68 17,0-21 30,0-34,0
KONJ 110-190 32-53 37,0-58,5 12,3-19,9 31,0-38,6
PAS 120-180 37-55 60-77 22-26,2 32-36
MAČKA 80-150 24-45 39-55 13-17 31,0-35,0
KOKOŠ 70-130 22-35 90-140 33-47 26-35
TEICHMANOVI KRISTALI
- mikroskopski dokaz krvi na nekom predmetu
- dokaz kristala klor-hemina (spojevi porfirina sa Fe3+, klor je
vezan na treću valenciju željaza)
Pribor: predmetno i pokrovno staklo, plamenik, stakleni štapić, skalpel
Materijal: osušena mrlja krvi
Kemikalije: NaCl u kristalu, ledena octena kiselina
TEICHMANOVI KRISTALI
� Postupak:
� na predmetnicu se sastruže malo osušene krvi doda se kristala NaCl, usitni,
pomiješa staklenim štapićem i stavi pokrovnicu
� uz rub pokrovnice kapne se ledenu octenu kiselinu (zbog kapilariteta se
podvuče pod pokrovnicu)
� preparat se zagrije na plameniku pazeći da
octena kiselina ne provrije
� pod srednjim povećanjem objektiva mikroskopa
uočavaju se sitni smeđecrni kristali
klorhemina
Literatura
� Feldman, B. V., J. G. Zinkl, N. C. Jain (eds.) (2000): Schalm’s Veterinary Hematology, 5th ed. Lippincott Williams & Wilkins, Philadelphia, Baltimore, New York, London, Buenos Aires, Hong Kong, Sydney, Tokyo; USA, UK, Argentina, China, Australia, Japan.
� Harvey, J. W. (2001): Atlas of veterinary hematology: blood and bone marrow of domestic animals. W.B. Saunders Company, Philadelphia, Pennsylvania, USA.
� Kaneko, J. J., J. W. Harvey, M. L. Bruss (eds.) (1997): Clinical biochemistry of domestic animals, 5th ed. Academic Press, San Diego, CA, USA.
� Rebar, A. H. (1998): Hemogram Interpretation of Dogs and Cats. Ralston Purina Company, Saint Louis, Missouri, USA.