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Parte 2Centro de Investigacin. Hospital General Universitario de ValenciaComo apuntbamos el Suplementoanterior (Suplemento3, Diciembre 1989)exponemos 2! parte del tema en la "Hematologa BiqumicaClnica de la Rata". y A lo largo de este captulo describiremoslos parmetrosbioqumicos en sangre.linfa. orina yagua corporal (reflejadosenlas tablasque figuranal final del tema),ascomolos mtodos muestreo anliticosutilizadosenla obde y tencinde dichosvalores. CONSTITUYENTES SANGRE BIOQUIMICOS DE LAjvenes, pero para la edad de 8 meses,estasdiferencias desaparecen. concentracin media nonnal de creatinina en La suero en la rata (tabla II) vara de 0.4 a 1.5 mg/dl, segn el mtodo de anlisis empleado. Bilirrubina La concentracin total de bilirrubina en suero constituye un parmetro til en la evaluacin de la disfuncin heptica. La determinacin de las fracciones de bilirrubina conjugada (Van den Bergh directo) y no conjugada (Van den Bergh indirecto) se ha utilizado en el diagnstico diferencial de la ictericia. La bilirrubina total en suero aumenta de forma significativa en la rata tras la lesin heptica por administracin de tetracloruro de carbono, selenato sdico, o cadmio. Tambin se sabe que el incremento de la bilirrubina srica no resulta tan sensible como la prueba del cido hiprico o la excrecin de sulfobromoftalena (BSP) en la demostracin de trastornos crnicos del hgado. La seleccin del mtodo de laboratorio para determinar la bilirrubina conjugada y no conjugada resulta difcil, debido a problemas inherentes de los mtodos en s. La muestra de preferencia en la determinacin de la bilirrubina circulante es el suero, si bien el plasma resulta aceptable. Las muestras son estables durante 8 h a temperatura ambiente, y por 24 h a 4C. El congelamiento puede incrementar las tasas de bilirrubina de forma significativa a nivel del suero. Si el anlisis inmediato no es posible, las muestrasdebern ser protegidas de la luz, ya que la bilirrubina se oxida lentamente en estascondiciones. Las concentraciones medias totales de bilirrubina en la rata varan de 0.12 a 0.40 mg/dl, (tabla III). Actividad enzimtica Introduccin Todos los enzimas sricos tienen su origen en clulas.

Nitrgeno de la urea Las primeras determinaciones de nitrgeno en urea circulante se hicieron en sangre entera, recibiendo el resultado el nombre de "Blood Urea Nitrogen" (BUN), o "Nitrgeno de urea en sangre". Hoy da la mayora de los mtodos determinan el nitrgeno en urea a nivel del suero: "Serum Urea Nitrogen" (SUN) o "nitrgeno de urea en suero". Sin embargo, por convenio y uso, el resultado todava se denomina BUN. La muestra preferida para la determinacin del BUN es el suero, aunque el plasma es aceptable. En la rata, el BUN no cambia con el sexo ni la edad, y las medias normales varan de 15 a 22 mg/dl, (tabla 1). Creatinina La creatinina es el principal producto de desecho del metabolismo de la creatina por parte del msculo; as, aparececreatinina libre en sangre. A nivel del ri'ln, es filtrada por el glomrulo y se excreta activamente a nivel de los tbulos. La mayora de los mtodos modernos de determinacin de la creatinina se basan en la reaccin de laffe, en la que se trata la creatinina con una disolucin de picrato alcalino. El reactivo de Lloyd (un silicato de aluminio) se emplea a menudo para extraer la creatinina de otras sustancias cromognicas previa a la reaccin de laffe. La muestra preferida para la determinacinde creatinina es el suero o plasma heparinizado. En la recogida y anlisis de muestras, se debe tener en cuenta que, las cetonas, el cido ascrbico, los barbitricos, la glucosa, protenas' y sulfobromoftalena pueden interferir con la reaccin de laffe . Hay que resaltarque los niveles de creatinina srica son ms altos en machosjvenes (2-4 meses)que en hembras

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Los enzimas clnicamente tiles suelen hallarse en el sueroen concentraciones relativamente bajas. Un aumento en dicha concentracin srica para un detenninado enzima suele entrai\ar lesin celular correspondiente a la poblacin que di lugar al enzima en cuestin. Ciertos enzimas se presentanen gran nmero de tejidos, mientras que otros se hallan limitados a slo uno o dos tejidos u rganos. El aumento en la concentracin srica de un enzima ubicuo constituye una herramienta diagnstica menos til que el incremento en los niveles de un enzima con una distribucin mucho ms limitada, ya que tiende a revelar con mucha mayor precisin la localizacin de la lesin en cuestin. Recientemente se ha puesto nfasis en la identificacin de diferentes formas estructurales de los enzimas (isoenzimas), a fin de potenciar la utilidad diagnstica de los enzimas de amplia distribucin. En la rata, la enzimologa srica diagnstica se ha orientado principalmente hacia la identificacin de las lesiones hepticas por txi-

sultado se expresa en unidades internacionales, cada mtodoproporciona un resultado diferente, y no existe manera fiable de inteoconvertir dichosresultados. valor El de la LDH, empleando reactivosGeneralDiagnosticscon el mtodocolorimtrico de Babsony Phillips seha estimadoen 15 VI/l de plasma.G/Ulmicopirvico transaminasa La Glutmico Pirvico Transarninasa (GP1) se da a altas concentraciones en el hgado, y a dosis relativamente bajas en otros tejidos. As, la deteccin de los niveles plasmticos de GPT nos sirve de indicativo de las patologas hepticas. Ya que las ratas se emplean extensamentepara ex~rimentar con la hepatotoxicidad de diversas sustancias, la GPT srica es una de las variables ms comunmenteestudiadas en la rata. La GPT en la rata no vara significativamente con el sexo ni la edad. Las unidades empleadas para expresar la concentracin de GPT difieren todava, por lo que la comparacin de los resultados obtenidos con diferentes mtodos resulta difcil. Sin embargo, la GPT srica normal en la rata suele situarse dentro del lmite superior del rango de valores normales para el hombre, segn el mtodo empleado. Glutmico oxalactico transaminasa La Glutrnico Oxalactico Transaminasa (GOT) se ha encontrado en los .tejidos y en el suero de todos los mamferos estudiados. Suele encontrarse a altas concentraciones en el miocardio, hgado, msculo esqueltico, niln y cerebro. Debida a esta extensa distribucin, la GOT posee menor utilidad como enzima diagnstica en la

cos.Fasfa/asaalcalina La Fosfatasa Alcalina (FA) se halla en grandes cantidades en los osteoblastos, y las elevaciones sricas de este enzima apuntan hacia un incremento en la actividad osteoblstica. Tales elevaciones se observan en nii'los durante el perodo de crecimiento, y tambin en el suero de ratas jvenes. En la rata se han observado depresiones en la actividad srica de la FA tras la administracin crnica de hexaclorofeno, producindose igualmente una depresin significativa en la velocidad de crecimiento. Schwartz observ niveles elevados de fosfatasa alcalina en el suero de ratassometidas a dieta restringida. Las cifras normales para la FA son 16-48 unidades King-Armstrong/dl, (tabla IV). En dicha tabla se observa que las cifras son significativamente mayores en machos que en hembras.

rata.Las cifras normales para la GOT no varan significativamente con la edad ni el sexo, pero suelen ser mayores que en el serhumano.

Lpidos Creatininfosfokinasa Los principales lpidos sanguneosmedidos en rata La creatinin fosfokinasa (CPK) se encuentraa dosis Wistarpueden observarse la tablaVII. en elevadasen el msculo esqueltico, miocardioy cerebro. La CPK pIasmtica elevacon el desarrollo degenerase de Sustancias Nitrogenadas no proticas ciones a nivel del msculo esquelticotras la adminisVer tablaV. tracin de vincristina. La CPK plasmtica tambin se eleva con el ejercicio en humanos, perrosy ratas.La conProtenas sricas centracinnormalmediade CPK en la ratase cifra en 50 La protena total puede medirse bien en suero o en UI/l de plasma. plasma, aunque pueden esperarsevalores ligeramente mayoresen el casodel plasma,debidoa questecontiene Lactato deshirogenasa fibringeno(equivalenteal 5% de las protenas plasmtiLa lactato deshidrogenasa (LDH) se encuentra a altas castotales). concentraciones en el miocardio, niln, hgado y msculo El mtodo "biurette simple" suele emplearsepara esqueltico. Mediantetcnicas de electroforesis apropiadas, determinar protenatotal, si bien existentambinvarias la la LDH es separable en 5 isoenzimas en diferentes proportcnicas ms de uso comn. Dichos mtodos tambin ciones. As, la actividad LDH de cada tejido posee una pueden emplearse para cuantificar la albmina tras composicin isoenzimtica particular. En la rata, se ha precipitacin la fraccinglobulina. La diferenciaentre de demostrado que el isoenzima LDH cardaco aumenta en la protena total medida y la albmina se considera suero con la hipertrofia cardaca. En la rata, la LDH tam- generalmente consisteen la parteglobulnica. bin aumenta tras la infeccin bacteriana, la adminisLa albminaes la protenasricaprincipal,tanto en el tracin de frmocos adrenrgico-estimulantesy el ejercicio. hombre como en la rata. Sin embargo, existen imporLas cifras normales de LDH en la rata varan mucho segn tantes diferencias entre especies en las fracciones el mtodo empleado para su determinacin. Aunque el reglobulnicas.En el hombre,las fraccionesglobulnicasen

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Hematologa y Bioqumica Clnica de la Rata. Parte 2

orden decreciente de conce.ntracin son a" ~, a2, Yy. En contraste, la globulina principal en la rata es o bien la fraccin a, o la 13, segn la cepa, seguida de las globuJinas a2 Y y. Se ha demostrado que en las ratas la fraccin y globulina experimenta un incremento durante la infeccin por la tenia enana,Hymenolepis nana. Keraan y cols. encontraron que la y-globulina srica tambin aumenta en la rata tras efectuar de un "shunt" portocava. Sugirieron que dichas tasas elevadas representan una respuesta inmune frente a los lipopolisacridos bacterianos que se liberan a la circulacin sistmica como resultado de la realizacin del "shunt" portocava. A la inversa. el traumatismo debido a la inyeccin subcutnea de trementina provoca un descenso en los niveles de albmina y de y globulina, con un aumento de las fracciones alfa y beta. Los valores medios de protenas sricas totales en ratas van de 6.0 a 7.8

md/dl,(tablaVII). Electrolitos Con excepcin del fsforo inorgnico. los valores normalesparalos electrolitossanguneos la rata seenen cuentrana nivel de las cifras mximasnormalesen el ser humano. Mtodos de laboratorio que seanfiables en ~I casode sueroshumanostambinlo son en el casode la rata. Pareceserque la interpretacin clinicopatolgica de resultados electrolticosanormales la rataesmuy simien lar a la delhombre. La tabla IX proporciona valores normales para electrolitos en el plasmade la rata. Las referencias se que dan en dicha tabla proporcionan informacin adicional sobre mtodos de muestreo. manejo de muestras y anlisis. Parmetros cido-base El estatmcido-base sangredebetomarseen cuenta en en la interpretacin resultados de experimentales ratas en anestesiadas. Variosestudioshandemostrado la anesque tesia puedeafectarlas presionesde gasesen sangrey el estatuscido-base. pero la mayorade los investigadores sostienen la anestesia produceprofundoscambios que no en el equilibrio cido-base, no serque existaunadeprea sinrespiratoria clnicamente manifiesta. La tabla X ofrece un resumen los parmetros de cidobaseen sangrearterial en ratasanestesiadas no anestey siadas. Hidratos de carbono Glucosa Los mtOs recogidade sangreen la rata pueden de ejercerun efectosignificativo sobrelos nivelesde glucosa en plasma.La concentracin glucosavara significatide vamentesegnla duracinde la manipulacin animal del previo a la extraccin la muestra.el mtodode anestede sia empleado, procedimiento, la duracinde la inmoel y vilizacin. ayunode 24 h. Y el mtodode extraccinde sangre. Tras la extraccin.el manejode la muestra par- , es ticularmenteimportante.ya que la glucosaen sangrey a temperatura ambiente sufreglucolisis (5% por h). y puede incluso desaparecer ms deprisa en presenciade le ucocitosiso contaminacin bacterias. conservacin por La

de glucosa en una muestra de sangre por ms de media hora puede lograrse ai!adiendo 10 mg de tluoruro S