Diagnóstico Laboratorial de Hantavirose

Andréa Finotti

Divisão de Virologia

Laboratório Central de Saúde Pública Dr. Giovanni Cysneiros

O Vírus

• Família Bunyaviridae:

– Bunyavirus– Hantavírus– Nairovirus– Phlebovirus– Tospovirus

Infectam vertebradosInfectam vertebrados

Infectam plantasInfectam plantas

O Vírus

• Genótipos de Hantavírus associados àsíndrome no Brasil: – Juquitiba– Araraquara (ARAV)– Castelo dos Sonhos– Laguna Negra– Anajatuba

*(Iverson et al., 1994; Johnson et al., 1999; Mendes et al., 2004; Rosa et al., 2005).

O Vírus

• RNA esféricos, fita simples, polaridade negativa, trissegmentado, envelopados.

• 3 segmentos de RNA:– Grande (L): codifica a proteína RNA polimerase RNA

dependente– Médio (M): glicoprotéinas G1 e G2 do envelope viral– Pequeno (S): proteína N do nucleocapsídeo

Figueiredo, L.T.M et al. Síndrome pulmonar e cardiovascular por Hantavirus: aspectos epidemiológicos, clínicos, do diagnóstico laboratorial e do tratamento. Rev Soc Bras Med Trop 34(1):13-23, jan-fev, 2001.

O Vírus

LigaLigaçção a ão a integrinasintegrinas

presentes nas presentes nas ccéélulas lulas

endoteliais, endoteliais, linflinfóócitos e citos e plaquetasplaquetas

IgM

IgG

Cinética de Anticorpos na Infecção por Hantavírus

0 7 60 Dias2

IgAIgA

Diagnóstico Laboratorial da Hantavirose

Testes Sorológicos

Anticorpos específicos (IgM, IgG)

Isolamento viral em cultura celular

Detecção e identificação viral (condições especiais de

segurança)

Métodos moleculares

Detecção de ácido nucléico viral (RT-PCR)

Imunohistoquímica

Técnicas Sorológicas

Ensaio Imunoenzimático

• Amostra: soro ( 5 ml), armazenado a -20ºC, transporte em gelo reciclável.

• Desde o início dos sintomas da infecção por hantavírus, anticorpos IgM e IgG estão presentes na maioria dos pacientes.

• Relatos de casos que demonstram uma soroconversão mais tardia: suspeita clínica com sorologia negativa, repetir com nova coleta.

Figueiredo, L.T.M. et al.Contribuição ao Conhecimento sobre a Hantavirose no Brasil. Informe Epidemiológico do SUS 2000; 9(3) : 167-178.

IFI-Isolamento Viral

Isolamento Viral

• Laboratório NB3.

• Inoculação em VERO-E6 (células de rim de macaco verde africano).

• Identificação: imunofluorescência ou RT-PCR

PCR

• Extração de RNA viral em sangue total, soro e materiais de necrópsia (pulmão, rim, baço e fígado).

• Armazenamento e transporte em botijão de nitrogênio líquido.

• Sequenciamento do genoma e análise filogenética.

Figueiredo, L.T.M. et al.Contribuição ao Conhecimento sobre a Hantavirose no Brasil. Informe Epidemiológico do SUS 2000; 9(3) : 167-178.

Imunohistoquímica

• Detecção de antígenos virais em fragmentos de tecidos (pulmão, baço, rim, fígado, linfonodo, coração, pâncreas pituitária e cérebro).

• Ideal: até 8 hs após óbito (máximo: 24 h).

• Acondicionar em formalina tamponada 10% (volume 10 vezes maior do que o volume dos fragmentos), em temperatura ambiente.

Figueiredo, L.T.M. et al.Contribuição ao Conhecimento sobre a Hantavirose no Brasil. Informe Epidemiológico do SUS 2000; 9(3) : 167-178.

Exames Inespecíficos

TrTrííadeade

Diagnóstico Diferencial• Lepstospirose• Influenza (Infiltrado intersticial

bilateral difuso)• Dengue (Hemoconcentração e a

plaquetopenia)• Febre Amarela• Febre do Vale Rift• Malária• Pneumonias atípicas por

Micoplasma e Legionelose.• Histoplasmose

• Imunocomprometidos: pneumonia por Pneumocystis carinii e infecções por Citomegalovírus, Cryptococcus e Aspergillus.

• Abdômen agudo de etiologia variada

• Síndrome da angústia respiratória (SARA)

• Edema agudo de pulmão (cardiogênico)

• Pneumonia intersticial por colagenopatias (lúpus eritematososistêmico, artrite reumatóide)

• DPOC

Diagnóstico Laboratorial da Hantavirose

• Limitações:

– Diagnóstico restrito a poucos laboratórios.

– Passado: dependente de antígenos de hantavírus fornecidos principalmente pelo CDC dos USA e laboratórios da Argentina (Ags não produzidos no Brasil).

– Hoje: antígenos Araraquara.

– Importante fator limitante ao conhecimento da doença no Brasil: subnotificação.

Perspectivas• Estímulo à pesquisa: produção de antígenos para diagnóstico

laboratorial com amostras brasileiras de Hantavírus.

• Implementar o diagnóstico da infecção em maior número de laboratórios distribuídos no território do país.

• Regionalizar o acesso diagnóstico, equipando laboratórios para facilitar esse processo.

• Criar um banco de antígenos a ser produzido com amostras brasileiras de Hantavírus, bem como de soros-controles (positivo e negativo) para serem distribuídos.

Laboratórios - SISLAB

• LRN– Instituto Adolfo Lutz– Instituto Evandro Chagas– FIOCRUZ

• LACEN’s:– Paraná– Mato Grosso– Minas Gerais– Goiás

Fluxo de Resultados

• Prazo de entrega de resultados: 7 dias.SPAIS/VEMSPAIS/VEM

ConsolidadosConsolidados

RegionaisRegionaisIndividuaisIndividuais

LACEN/GOLACEN/GO

MunicMunicíípiospios

DiagnDiagnóóstico em fase de implantastico em fase de implantaçção no LACEN/GO.ão no LACEN/GO.

• SEÇÃO DE VIROLOGIA

• E-MAIL: lacen.viro@saúde.go.gov.br• Fone (62) 3201 3888/ 3201 9683

• Fax (62) 3201 3884