21.09.2010

1

GENUL SALMONELLA.

MICROBIOLOGIA I

DIAGNOSTICUL DE

LABORATOR AL

SALMONELOZELOR

CLASIFICARE

Genul: Salmonella (Daniel Elmer Salmon, veterinar american, care a descoperit bacteria n 1885) Specii: Salmonella enterica, Salmonella bongori (Salmonella subterranea (din 2004))

Subspecii ale speciei S.enterica: enterica, salamae, arizonae, diarizonae, houtenae, indica

Majoritatea tulpinilor izolate din patologii umane (99,5%) aparin ss S.enterica enterica cu peste 2500 de serovariante: S. London, S. Enteritidis, S. Typhi, S. Paratyphi A, S. Paratyphi B, S.Choleraesuis, etc

Salmonella enterica subspecia enterica serovar Typhi

sau Salmonella Typhi

CLASIFICAREA KAUFFMANN-WHITE (conform

structurii antigenice)

Ag O 67 varieti antigenice (O1, O2, O3, ... O65, etc), permite repartizarea salmonelelor n serogrupe (A, B, C, D, E,...Z, O51,...)

Fracii antigenice majore desemneaz grupa:

O2 grupa A; O4 B, O6 C, O9 D, etc

Fracii antigenice minore O1, O12 - sunt comune

Ag H definete serovariante n cadrul grupei. Structura flagelinei este determinat de 2 gene cromozomale diferite, care se exprim simultan sau alternativ (variaie de faz, frecvena 10-4)

Ag H faza 1 (specific) Ha; Hb; Hc; Hd; Hg,m

Ag H faza 2 (nespecific) H1,2; H1,5; H1,7;

Serovar monofazic: O1,2,12:Ha (S.Paratyphi A)

Serovar difazic: O1,4,12:HbH1,2 (S.Paratyphi B)

Ag Vi (K), poliozidic, termolabil, prezent la S.Typhi, S.Paratyphi C, S.Dublin. Este concentrat la polii bacteriei. Mascheaza Ag O.

S. Typhi O9,12:Hd:Vi+ / O9,12:Hd:Vi-

Conform patogenitii pentru gazd se disting:

I. Salmonele monopatogene (umane) (S.Typhi, S.Paratyphi A, S.Paratyphi B)

II. Salmonele bipatogene (patogene pentru om i animale, ubicvitare) - majoritatea

Grupa Serovarul Antigenul O Vi Antigene H

faza 1 faza 2

A Paratyphi A 1,2,12 a -

B Paratyphi B 1,4,5,12 b 1,2

Wien 1,4,12,27 b l,w

Typhimurium 1,4,5,12 i 1,2

Derby 1,4,12 f,g -

C Paratyphi C 6,7 + c 1,5

Virchov 6,7 r 1,2

Infantis 6,7 r 1,5

Bovismorbificans 6,8 r 1,5

D Typhi 9,12 + d -

Enteritidis 1,9,12 g,m -

Panama 1,9,12 l,v 1,5

Dublin 1,9,12 + g,p -

Gallinarum 1,9,12 - -

E London 3,10 l,v 1,6

Anatum 3,10 e,h 1,6

21.09.2010

2

Caractere morfologice

Salmonella bacterii gram-, mobile

peritriche (S.Gallinarum, imobil),

asporogene.

Caractere de cultur 1. Medii de mbogire : Muller, Kauffmann (medii cu

bil, tetrationat), bulion cu selenit de Na

2. Medii DD de izolare a culturii pure: Endo, Levin, Ploskirev (colonii S, lactozo-); mediul cu sulfit de bismut Wilson-Blair (colonii negre)

3. Medii DD de acumulare i difereniere: Olkeniki, Kligler (glucoza AG, lactoza-, H2S+, ureaza-)

Teste primare: utilizeaz citratul de Na, produc H2S, MR+, LDC+, mobilitate+, celelalte teste negative.

Teste secundare: scindeaz glucidele AG, indol-, ornitindecarboxilaza+, etc

EXCEPIE: S.Typhi citrat-, H2S-, scindeaz glucoza pn la acid;

S.Paratyphi A H2S+/-, LDC-

21.09.2010

3

FACTORI DE PATOGENITATE

Fimbrii (adeziune)

Capacitatea de a penetra n celule i de multiplicare intracelular (Macrofage, celule epitel)

Endotoxina

Citotoxine (SLT) inhib sinteza proteic (necroz)

Enterotoxine (LT, ST) activeaz adenilat/guanilatciclazele membranare (diaree)

Siderofori (captarea Fe)

Ag Vi (antifagocitar, inhib activarea C, rezisten la activitatea bactericid a serului)

Majoritatea salmonelelor (98%) sunt

sensibile la bacteriofagul O1. Exist

bacteriofagi cu specificitate de specie i

variant.

Habitat: intestinul omului, animalelor,

psrilor, reptilelor.

Rezistena n mediul extern: salmonelele

rezist la 70

C 30 min., rezistente la frig i

concentraii mari de sare. Se nmulesc n

produse alimentare la temperatura

camerei.

ROLUL SALMONELELOR N PATOLOGIA UMAN

SALMONELOZE:

I. Febre tifo-paratifoide

II. Salmoneloze digestive (toxi-infecii alimentare, gastro-enterite)

III. Manifestri extra-digestive:

- bacteriemii nontifoidice

- infecii pleuro-pulmonare

- afeciuni osteo-articulare (osteite, osteomielite, artrite septice, etc)

- infecii nozocomiale

- infecii cardio-vasculare (pericardite, arterite)

- infecii urinare

- infecii abdominale (colecistite, abces al ficatului, splinei)

- infecii ale SNC (meningite, abces al creierului, abces epidural, etc)

FEBRELE TIFO-PARATIFOIDE

Agenii cauzali S.Typhi, S.Paratyphi A, B, (C)

Sursa de infecie omul bolnav, purttorul Contaminarea fecal-oral (ap, alimente), contact

direct

Doza infectant 105 bacterii PATOGENEZA

- Traversarea epiteliului intestinal intact

- Invazia i multiplicarea intracelular la nivelul plcilor Peyer i esutului limfoid al tubului digestiv (perioada de incubaie)

- Ptrunderea n ganglionii limfatici mezenterici cu multiplicarea salmonelelor (perioada prodromal)

I sptmn de boal (bacteriemie). Invadarea fluxului sangvin, via sistemul limfatic (diseminarea germenilor cu eliberarea endotoxinei). Endotoxina pe cale sangvin parvine la centrii neurovegetativi ai ventriculului 3, determinnd febr, stare de tifos, colaps cardio-vascular, leziuni intestinale

II sptmn de boal (difuzie parenchimatoas) Bacteriile sunt fixate n organele SRE i se

multiplic n ficat, splin, mduv osoas, esut limfoid, etc. Din aceast perioad ncepe eliminarea salmonelelor cu saliva, materiile fecale, urina, bila, etc.

III-IV sptmn de boal (faza alergic). Din ficat salmonelele ptrund n cile biliare, apoi iari n intestin. La nivelul plcilor Peyer se dezvolt o reacie de hipersensibilitate tip 4 - necroz, ulceraii

21.09.2010

4

Manifestri clinice

I. Perioada de incubaie - 1-3 sptmni II. Perioada prodromal (de invazie) 1-3 zile III. Perioada de stare. Debut brutal, cu frison, febr

39-41 grade, cefalee, stupoare, somnolen, delir, com. Erupii cutanate (rozeole) apar pe abdomen, torace, spate n ziua a 8-9 de boal (embolii limfatice cu bacterii). Diaree, constipaie, tulburri cardiovasculare. Durata 7-10 zile. Complicaii: hemoragii intestinale, perforarea intestinului, peritonit, miocardit, meningit, psihoz etc.

IV. Perioada de reconvalescen (1-3-6 luni)

Imunitatea celular, umoral

5-10% convalesceni purttori pn la 3

luni (cu depistarea salmonelelor n bil

sau/i urin)

3-5% convalesceni (cu litiaz biliar)

purttori cronici (1-10 ani toat viaa)

Recidive sunt posibile (descrcri

bacteriemice din focare profunde, forme L),

se caracterizeaz prin simptome atenuate i

evoluie de scurt durat

DIAGNOSTICUL DE LABORATOR AL

FEBRELOR TIFO-PARATIFOIDE

PRELEVATE: snge (perioada febril, n

special I sptmn de boal), urin

(ncepnd cu a II sptmn), materii fecale

(II-III sptmn de boal), exsudat din

rozeole, ser sangvin (din ziua a 7-ea), bil,

mduv osoas

METODE DE DIAGNOSTIC

Examenul microscopic RIF, Gram

Examenul bacteriologic

Hemocultura 10-15 ml snge se

insmneaz n 100 ml bulion biliat,

mediul Rappoport, bulion glucozat 1%

pentru mbogirea salmonelelor. Se

incubeaz la 37 grade i n zilele 1, 2, 3, 5,

7 i 10 se repic pe mediile DD (Endo,

Levin, Ploskirev, W-B) pentru izolarea

culturii pure. Coloniile lactozo- se repic pe

mediul Kligler (Olkeniki) pentru

acumularea culturii pure i identificarea

preliminar.

21.09.2010

5

Identificarea final - n baza studiului

caracterelor morfotinctoriale, de

cultur, biochimice, antigenice (RA pe

lam cu seruri imune polivalente

ABCDE, seruri monovalente anti-O de

grup (O2, O4, O6, O9, etc) , seruri

monospecifice anti-H (de variant),

seruri anti-Vi, sensibilitatea la

bacteriofagi).

Rezultatul definitiv negativ-n ziua a 11.

Rozeolocultura (exsudatul din rozeole se ntroduce n 3-5 ml bulion biliat)

Mielocultura (0,5 ml mduva osoas din stern n 3-5 ml bulion biliat)

Bilicultura (dup 3-6 luni de la vindecare,

5-10 ml bil se ntroduc n BP)

Se examineaz ca i hemocultura

Coprocultura (din spt. 2) 3-5 g materii fecale se nsmneaz direct pe medii DD i pe medii de mbogire.

Urocultura (10 ml urin se centrifugheaz, sedimentul se examineaz ulterior ca i coprocultura)

Serodiagnostic (din II sptmn)

1. RA Widal - la diluii ale serului bolnavului se adaug diagnosticuri OH din S.Typhi, Paratyphi A

i B. Titrul diagnostic 1/200 sau creterea n dinamic a titrului

2. RA modificarea Felix (utilizarea separat a

diagnosticurilor O i H).

Anticorpii anti-O (Ig M) apar primii (ncepnd cu ziua

7-8) i dispar dup 2-3 luni (maximum spt. II-III).

Anticorpii anti-H (Ig M, apoi Ig G) apar mai trziu (10-12 zi) i persist o durat mai lung. n debut

de reconvalescen (sptmna a IV) titrul Ac anti-O i anti-H se egaleaz.

3. RHAI (cu diagnosticuri eritrocitare O)

INVESTIGAREA PURTTORILOR

Coproculturi repetate

Urocultura

Bilicultura

Serodiagnostic

1. Reacia de Vi-aglutinare (eritrocite sensibilizate cu Ag Vi). Titrul diagnostic - 1/40

2. Reacia de latex-aglutinare

3. Determinarea claselor de imunoglobuline Ig M sau

Ig G

TRATAMENTUL I PROFILAXIA

Tratament:

- Fluorochinolone

- Cefalosporine de generaia III

- Cloramfenicol

- Ampicilin

- Cotrimoxazol

Profilaxia specific: vaccinarea selectiv (zone endemice, militari, personal medical, etc)

- Vaccinul chimic TABTe

- Vaccinul atenuat Ty2 (administrare oral, imunitate local sIg A), contraindicat gravidelor, copiilor, imunodeprimailor

- Vaccinul subunitar din Ag Vi (areactogen, imunitate 3-5 ani)

SALMONELOZE DIGESTIVE

(gastro-enterite, toxi-infecii alimentare)

Consecutive consumului de alimente contaminate

cu salmonele (ou, maionez, patiserie cu crem, carne, lactate, etc).

Agenii cauzali: salmonele bipatogene

Gr. B (S. Typhimurium, S. Paratyphi B, S. Heidelberg,

S. Derbi)

Gr. C (S. Choleraesuis, S. Newport, S. Paratyphi C)

Gr. D (S. Enteritidis, S. Dublin)

Gr. E (S. Anatum)

21.09.2010

6

PATOGENEZA GASTROENTERITELOR

Sursa de infecie: animalele domestice i psrile (bolnave sau purttori cronici)

Transmiterea pe cale alimentar (alimente contaminate direct de la surs sau pe parcursul procesului tehnologic), prin ap sau contact direct.

Doza infectant 105-1010 microorganisme (n funcie de receptivitatea gazdei, vrst, utilizarea AB, inocul, etc)

Salmonelele colonizeaz mucoasa intestinului subire, penetrnd si multiplicandu-se n enterocite, celulele M i macrofage. Urmeaz o reacie inflamatoare intens (gastroenterit, gastroenterocolit acut). Enterotoxina provoac diaree (activeaz adenilatciclaza sau guanilatciclaza enterocitelor), endotoxina absorbit acioneaz asupra SNC semne de intoxicaie.

Gastroenteritele pot fi urmate de bacteriemii.

Manifestri clinice:

Perioada de incubaie 8 - 48 ore

Debut brusc i evoluie acut (1-3 zile) cu

diaree, vom, febr, cefalee, stare de

ru.

Evoluie sever la sugari, btrni,

imunodeprimai (n special bolnavi cu

SIDA).

TOXIINFECII ALIMENTARE

Survin ca urmare a ingestiei unui aliment n care

s-au acumulat cantiti mari de mi/o (105

107). Nimerind n intestin, bacteriile se distrug,

iar endotoxina eliberat provoac semnele

clinice de intoxicare.

Alte forme de salmoneloze (septicemii,

meningite, infecii urinare, infectii

nosocomiale, etc) se dezvolt la persoane cu

rezistena sczut

Diagnosticul de laborator al salmonelozelor

Prelevate: mase fecale, mase vomitive,

snge, splturi gastrice, urin, puroi,

resturi de alimente suspecte.

Metode de diagnostic:

1. Examenul bacteriologic de baz

(coprocultur, hemocultur, urocultur...)

2. RIF pentru diagnostic rapid

3. Serodiagnostic - RHAI

21.09.2010

7

Profilaxia salmonelozelor nespecific

Tratamentul simptomatic,

antibioterapie la necesitate, n forme

grave de infecie