GeneCloning strategier för kloning - Linköping … f ör Kloning Hur hitta klonen för en specifik...
41
Strategier för Kloning Hur hitta klonen för en specifik gen? Begrepp: • Direkt selektion • Olika typer av DNA bibliotek • Identifiering från genbibliotek • Hur identifiera en klon
-
Upload
doannguyet -
Category
Documents
-
view
216 -
download
0
Transcript of GeneCloning strategier för kloning - Linköping … f ör Kloning Hur hitta klonen för en specifik...
Strategier för KloningHur hitta klonen för en specifik
gen?
Begrepp:• Direkt selektion• Olika typer av DNA bibliotek• Identifiering från genbibliotek• Hur identifiera en klon
Selektionsproblem!!
Sid 127
Olika strategier för selektion
Sid 128
Direkt selektion
Sid 129
Direkt selektion för TrpA genen
Sid 130
Genbibliotek i en cosmid
Sid 132
Expression av gener
Sid 132
Sid 134
Nukleinsyra hybridisering
Sid 135
Sid 135
32P-dATP
Sid 136
Labeling olika tekniker
Sid 136
Sid 138
Identifiering av vanligt förekommande gener
Sid 139
Sid 139
Sid 140
Sid 141
Heterologous prbing
Sid 142
Sid 143
Southern hybridisering
Sid 143
Sid 144
Immunoscreening
Sid 145
PCR
• Hur designar man primer• Skillnader mellan olika DNA polymeraser• Felfrekvensen på Taq Polymeras• Kvantifiering av DNA och RNA
Sid 148
Sid 149
Sid 150
Agarosgelelektrofores
Sid 150
Amplifiering av α1-globin genen
Sid 151
Korta primer ger ospecifik bindning
Sid 151
Typisk PCR cykel
Sid 152
Annealingtemperaturens betydelse
Sid 153
Beräkning av Tm värde för primer
Sid 154
Sid 155
Kombinatorisk screening
Sid 155
Taq Polymeras adderar extra A
Sid 156
Sid 157
Felfrekvens på Taq polymeras
Sid 158
Kvantifiering av PCR produkt
Sid 159
Realtids PCR
Sid 160
Kvantifiering med realtids PCR
Sid 160
Kvantifiering av RNA
Sid 161
