UNIVERSIDAD POLITECNICA DE PUEBLA

Programa académico de Ingeniería en Biotecnología

Ingeniería Genética

“Marcador molecular de Fusarium oxysporum producido en Escherichia coli.

Presenta:

Noé Juárez César

Asesor de proyecto:

Mtra. Verónica Miroslava Martínez Ortiz

Fecha

Características Macroscópicas• 1. Aspecto de la colonia (En agar glucosa de peptona a 30º):

• - Diámetro: 50 mm en una semana. - Topografía: Lisa.- Textura: Al principio algodonosa para terminar como el fieltro.- Color: Desde blanco hasta salmón pálido; generalmente tiene un tinte púrpura.- Reverso: Púrpura.

Características Microscópicas

• - Características predominantes:

• - Conidióforo: Fiálides cortas que se afilan hacia la punta con collaretes poco definidos.

• - Macroconidia: De 1 a 5 tabiques con forma de media luna.

• - Microconidia: Abundantes, pequeñas, ovales o en forma de riñón.

Pruebas confirmatorias

• Sembrar en Agra PDA

Fuente natural.

•  Bananeros 

Importancia Biotecnológica

• Es un hongo patógeno se estudia por los daños que causa tanto a las plantas llevándolas a la muerte como a los seres humanos infectando partes del cuerpo vitales.

Antecedentes.

• Fusarium oxysporum EL HONGO QUE NOS FALTA CONOCER

EMIRA GARCÉS DE GRANADA

MARTHA OROZCO DE AMÉZQUITA

CARACTERIZACIÓN DE GENES DE POLIGALACTURONASAS DE “FUSARIUM OXYSPORUM” f.sp. “RADICIS LYCOPERSICI” Y SU ANÁLISIS EN SISTEMAS HETERÓLOGOS.

AITOR DE LAS HERAS GUTIÉRREZ

Justificación

• Esta presente en el genoma del genero fusarium hasta en un 99 %.

ObjetivoCaracterización de genes en común del genero fusarium oxysporum

Objetivos específicos

• Diseñar oligos para la amplificación de las secuencias codificantes de enzimas útiles.

• - Selección de vectores correctos

• - Selección de clonas

• -Corroboración del experimento

Metodología generalAmplificación de

fragmentos codificantes por

PCR

Diseño de primers y condiciones de

PCR

Generar la inserción de los

genes en el vector(Considerar mapa

de restricción)

Corroboración de la efectividad del

experimento

Selección de las cepas

transfectadas

Seleccionar un hospedero adecuado

Resultados

• Pg1prom 1F 5´- GCAT GGATCC GCT GCA GAA ATG TAT TCG ATT A –3´ Pg1prom 2R 5´- ACTA TCTAGA TCG AAC CAT TGT GAT ATT CGA –3´

• 1538 pb Yeppg1a

Selección de vector

• Se seleccionó debido a sus puc 19 características de sensibilidad y capacidad de replicación

•C. Selección de clonas

• Se seleccionaron las clonas debido al cassete de resistencia que presenta el vector antes mencionado

• Las cepas son resistentes a la presencia de ampicilina

Corroboración

•La corroboración se hace mediante la comparación del rendimiento en la producción de gen pg1 de interés en cepas de Escherichia coli.

Conclusión.

• Se logro realizar el diseño para la síntesis del gen que permitiera su inserción en un vector de clonación para su expresión.

• Se logro encontrar el gen de dicho M.O.

• Se logro la obtención del gen en la célula hospedera

Perspectiva

• Se puede utilizar este proyecto como base para identificación entre genero de fusarium oxysporum en la biotecnología con ayuda de ingeniería genética.

Bibliografia.• Simons, G., Groenendijk, J., Wijbrandi, J., Reijans, M., Groenen, J., Diergaarde, P., Van der Lee, T.,

Bleeker, M., Onstenk, J., de Both, M., Haring, M., Mes, J., Cornelissen, B., Zabeau, M. y Vos, P. (1998). Dissection of the Fusarium I2 gene cluster in tomato reveals six homologs and one active gene copy. Plant Cell 10, 1055-1068.

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• Yun, S. H., Arie, T., Kaneko, I., Yoder, O. C. y Turgeon, B. G. (2000). Molecular organization of mating type loci in heterothallic, homothallic, and asexual Gibberella/Fusarium species. Fungal Genet Biol 31, 7-20.

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• Zaret, K. S. y Sherman, F. (1982). DNA sequence required for efficient transcription termination in yeast. Cell 28, 563-573.

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• Wubben, J. P., Mulder, W., ten Have, A., van Kan, J. A. y Visser, J. (1999).

• Cloning and partial characterization of endopolygalacturonase genes from Botrytis cinerea. Appl Environ Microbiol 65, 1596-1602.

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• ten Have, A., Mulder, W., Visser, J. y van Kan, J. A. (1998). The endopolygalacturonase gene Bcpg1 is required for full virulence of Botrytis cinerea. Mol Plant Microbe Interact 11, 1009-1016.

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