Full-term development of mice from enucleated oocytes injected with cumulus cell nuclei

Grupo 8:Fernanda MarfilPaula PizzinoCarina Quiones

T. Wakayama, A. C. F. Perry, M. Zuccotti,K. R. Johnsonk & R. Yanagimachi

Como se obtiene descendencia viable en mamferos?

Objetivo

Investigar cuales son los factores que gobiernan el desarrollo embrionario cuando se transfieren ncleos de clulas somticas como clulas de Sertoli, neuronas o clulas del cumulus a oocitos enucleados

Por qu se eligieron esas lneas celulares? Mejor desarrollo embrionario con ncleos de en fase G0 o G1 de Sertoli y neuronas no se dividen, pero permanecen en G0 90% del cumulus estn en fase G0/G1

Metodologa

Madres adoptivas albinas se reproducen con machos vasectomizados

Tiempo entre inyeccin y activacin afecta a la tasa de desarrollo del oocito

Sertoli y neuronasPorcentaje menor que el obtenido en clulas del cumulus

Desarrollo de embriones a partir de oocitos con ncleo de clula de SertoliEmbrin normal en periodo de 12 somitosteros a los 8.5 d.p.c (das post coito)

Para observar el potencial de los ncleos de cumulus en el desarrollo de embriones in vivo

Experimentos

Cumulina con sus cras (padre: CD-1 albino)

Serie D Los clones podran ser clonados mas eficientemente en rondas sucesivas de re-clonado?

Los clones a partir de clones NO son clonados mas eficientemente

Cmo sabemos que los embriones son realmente clones a partir de clulas del cumulus?

Oocitos no expuestos a spz in vitroMadres adoptivas albinas se reproducen con machos albinos vasectomizados y en el caso de machos frtiles cras albinas Serie B: pelaje negroSerie C: pelaje agouti Todos fueron hembras como su progenitora

DNA typingFue utilizado para demostrar que la descendencia clonada en la serie C son isognicas con los tres ncleos de clulas del cumulus (B6C3F1) y no contienen DNA derivado del oocito donante (B6D2F1) o de la madre adoptiva (CD-1)

Banda extra: heteroduplex Migracin anmala

Southern blot

Oocitos s/ncleo pueden desarrollarse hasta mrula/blastocisto al ser activados

No est claro porque las clulas de Sertoli y las neuronales fallaron en producir embriones a trmino.

Podra ser que los ncleos no soporten el desarrollo embrionario, por lo que se sugiere que no es suficiente el estadio G0 para asegurar el desarrollo embrionarioLa alta tasa de implantacin 57-71% y el bajo desarrollo fetal 5-16% y a trmino 2-3% indican que varios factores morfogenticos y check points estaran involucrados en el desarrollo del feto luego de la implantacin

Los mamferos pueden ser clonados a partir de clulas somticas adultas

El experimento provee un modelo sensible p evaluar los mecanismos moleculares que regulan la reprogramacin del genoma de clulas somticas, imprinting genmico, activacin del genoma embrionario y diferenciacin celular.