Francesca R. Dani C.I.S.M. - UniFIL’applicazione della spettrometria di massa allo studio della...
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L’applicazione della spettrometria di massa allo studio della chemorecezione degli insetti: dai feromoni alle proteine chemosensoriali
Francesca R. Dani C.I.S.M.
C.I.S.M.
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PRIN 2002
PRIN 2006
European Network ENAROMATIC
PRIN 2008
C.I.S.M.
Collaborazione con Prof. P. Pelosi e Dr. A. Felicioli, Univ. Pisa
Dr. A. della Torre, Univ La Sapienza
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sensillarpores
sensillar lymph
Dendrites of the olfactory receptorneuron
1 µm1 µm
longitudinal section of a chemosensillum
OLFACTORY SENSILLAC.I.S.M.
C.I.S.M.
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Proteins involved in the Perireceptor Events
C.I.S.M.OBPs Odorant Binding Protein and CSPs Chemosensory Proteins
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Mapping the expression of soluble olfactory proteins in the honeybee.
Traditional proteomic approach: digestion of 2D gel spots and micro LC-ESI LTQ ORBITRAP analyses
Dani et al. 2010. J. Proteomic Research
WORKER ANTENNAE
12 OBPs and
2 CSPs
LARVAE
3 OBPs and
1 CSP
C.I.S.M.
21 OBP and 6 CSP genes identified in the genome
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Mapping the expression of soluble olfactory proteins in the honeybee: MALDI profiling
Dani et al. 2010. J. Proteomic Research
C.I.S.M.
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Mapping the expression of soluble olfactory proteins in the mandibular gland of honeybee
WORKER MANDIBULAR GLANDS QUEENS MANDIBULAR GLANDS
Is the queen specific OBP a carrier for the queen pheromone?
C.I.S.M.
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Mapping the expression of soluble olfactory proteins in Anopheles gambiae: MALDI profiling
C.I.S.M.
OBP-1
OBP-9 *
Dani et al. 2008. Plos one
PRIN 2006European Network ENAROMATIC
*OBP-9 was identified in a topdown experiment
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Mapping the expression of soluble olfactory proteins in Anopheles gambiae
C.I.S.M.
OBP9
CSP SAP-3
CSP
57 OBP and 7 CSP genes identified in the genome
ANTENNAE FROM 1100 MALES
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1 5 7 6 . 5 1 5 7 7 . 0 1 5 7 7 . 5 1 5 7 8 . 0 1 5 7 8 . 5 1 5 7 9 . 0m / z
0
5
1 0
1 5
2 0
2 5
3 0
3 5
4 0
4 5
5 0
5 5
6 0
6 5
7 0
7 5
8 0
8 5
9 0
9 5
1 0 0
Rel
ativ
e Ab
unda
nce
1 5 7 7 . 4 2 0 6 11 5 7 7 . 3 3 7 1 1
1 5 7 7 . 5 0 4 1 0
1 5 7 7 . 2 5 3 6 11 5 7 7 . 5 8 7 5 9
1 5 7 7 . 6 7 1 0 81 5 7 7 . 1 7 0 1 0
1 5 7 7 . 7 5 4 5 6
1 5 7 7 . 0 8 6 5 9
1 5 7 7 . 8 3 8 0 4
1 5 7 7 . 0 0 3 0 7
1 5 7 7 . 9 2 1 5 1
1 5 7 6 . 9 1 9 5 51 5 7 8 . 0 0 4 9 8
1 5 7 8 . 0 8 8 4 51 5 7 6 . 8 3 6 0 2
1 5 7 8 . 1 7 1 9 2
1 5 7 6 . 7 5 2 4 8 1 5 7 8 . 2 5 5 3 8
1 5 7 8 . 3 3 8 8 41 5 7 6 . 6 6 8 9 4 1 5 7 8 . 4 2 2 3 0
1 5 7 6 . 5 8 5 4 0 1 5 7 8 . 5 8 9 2 1 1 5 7 8 . 9 2 3 0 2
1 5 7 7 . 5 0 4 8 1
1 5 7 7 . 6 7 1 7 41 5 7 7 . 3 3 7 8 6 1 5 7 7 . 7 5 5 2 0
1 5 7 7 . 2 5 4 3 8 1 5 7 7 . 8 3 8 6 6
1 5 7 7 . 9 2 2 1 11 5 7 7 . 1 7 0 9 0
1 5 7 7 . 0 8 7 4 0
1 5 7 7 . 0 0 3 9 0
1 5 7 7 . 3 3 6 8 4
1 5 7 7 . 2 5 3 3 71 5 7 7 . 5 0 3 7 7
1 5 7 7 . 5 8 7 2 3
1 5 7 7 . 0 8 6 4 11 5 7 7 . 6 7 0 6 9
1 5 7 7 . 7 5 4 1 41 5 7 7 . 0 0 2 9 2
1 5 7 6 . 9 1 9 4 3
N L :2 . 2 9 E 4
C 8 2 5 H 1 3 1 1 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2 * 3 . 0 0 + C 8 2 5 H 1 3 0 9 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2 * 7 . 0 0 : p ( g s s , s / p : 4 0 ) C h r g 1 2R : 1 0 0 0 0 0 R e s . P w r . @ F W H MN L :2 . 2 9 E 4
C 8 2 5 H 1 3 1 1 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2 : C 8 2 5 H 1 3 1 1 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2p ( g s s , s / p : 4 0 ) C h r g 1 2R : 1 0 0 0 0 0 R e s . P w r . @ F W H MN L :2 . 2 9 E 4
C 8 2 5 H 1 3 0 9 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2 : C 8 2 5 H 1 3 0 9 N 2 1 5 O 2 4 9 S 2 2p ( g s s , s / p : 4 0 ) C h r g 1 2R : 1 0 0 0 0 0 R e s . P w r . @ F W H M
Analysis of OBP47, a 13 Cys OBPC.I.S.M.
Native
MW: 18922.71
Alkylated
MW: 18981.18
//
//
CH2 CO
NH2MW: 58
O B P 4 7 B a tte r ic a H R # 1 -1 7 R T : 0 .0 0 -0 .9 4 AV: 1 7 N L : 1 .2 7 E 6T : F T M S + p E S I F u l l m s [1 2 0 0 .0 0 -2 0 0 0 .0 0 ]
1 5 7 6 .6 1 5 7 6 .8 1 5 7 7 .0 1 5 7 7 .2 1 5 7 7 .4 1 5 7 7 .6 1 5 7 7 .8 1 5 7 8 .0 1 5 7 8 .2 1 5 7 8 .4m /z
0
5
1 0
1 5
2 0
2 5
3 0
3 5
4 0
4 5
5 0
5 5
6 0
6 5
7 0
7 5
8 0
8 5
9 0
9 5
1 0 0
1 0 5
1 1 0
Rel
ativ
e Ab
unda
nce
1 5 7 7 .4 2 6 1 3z= 1 2
1 5 7 7 .3 4 2 9 8z= 1 2
1 5 7 7 .5 0 9 8 7z= 1 2
1 5 7 7 .5 9 2 9 0z= 1 2
1 5 7 7 .1 7 6 3 3z= 1 2
1 5 7 7 .6 7 6 2 4z= 1 2
1 5 7 7 .0 9 2 8 3z= 1 2
1 5 7 7 .7 5 9 0 3z= 1 2
1 5 7 7 .0 0 9 6 6z= 1 2 1 5 7 7 .8 4 3 7 7
z= 1 2
1 5 7 6 .9 2 5 7 5z= 1 2 1 5 7 7 .9 2 6 8 1
z= 1 2
1 5 7 8 .0 0 9 7 0z= 1 2
1 5 7 6 .8 4 2 2 6z= 1 2
1 5 7 8 .0 9 4 1 0z= 1 21 5 7 6 .7 5 7 8 2
z= 1 2 1 5 7 8 .1 7 6 3 0z= 1 2
1 5 7 8 .4 2 5 2 7z= 1 2
1 5 7 6 .5 0 7 5 0z= ?
High resolution mass spectrum
Simulation of OBP47 spectrum with 6or 5 disulfidebridges (7:3)
Z=12
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Identification of compounds evoking antennogramresponses to plant extracts in A. gambiaeC.I.S.M.
GC-FID
EAGAbundance
6.00 8.00 10.00 12.00 14.00 16.00 18.00 20.00 22.00 24.00 26.00
carv
acro
l
para
-cym
ene
gam
ma-
terp
inen
e
GC-MS
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Proteins involved in the Perireceptor Events
PBPs and OBPs Pheromone and Odorant Binding Protein
CSPs Chemosensory Proteins
C.I.S.M.