Fitoplancton Sedgwick Rafter

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V I . A L G A S - A N A L I S I S C U A L I T A T I V O Y C U A N T I T A T I V O

1. INTRODUCCION

A medida que aumenta 1a demanda de 1a poblacion y de la industria y que las

aguas subterraneas se hacen insuficientes, es mayor el numero de ciudades y pobla-

ciones que utilizan los lagos t corrientes, depositos y reutilizan los desechos do-

mesticos.

Las algas son habitantes comunes y normales de aguas poco profundas y se

encuentran en todo suministro de agua expuesto a la luz del sol - aunque algunas

algas se encuentran en el suelo y en superficies expuestas al aire. Conocer e1

nUmero y c1ase de algas presentes en estanques de aguas negras es de gran utilidad

para ver e1 avance del proceso de oxidacion.

La metodo1ogra empleada es 1a que uti1izan 1a gran mayoria de los laborato-

rios; consiste en un analisis cualitativo y cuantitativo; en este ultimo se emplea

la camara de Sedgwick-Rafter.

2. DEFINICION

Las algas difieren de los otros grupos de seres pequenos 0microscopicos por

poseer sus pigmentos internos llamados clorofila, que a veces estan ocultos parcial-

mente 0enmascarados por otros pigmentos. 10 que las capacita en presencia de la luz

a combinar agua con anhidrido carbonico para formar almidon 0s us ta nc ia s a nal og as y

l ib er ar o xi ge no .

Las algas tienen 1a capacidad de modificar elpHt la alcalinidad, el color

y la turbiedad.

En el proceso de purificacion naturalt

las algas oxigenan el agua y utilizan

los subproductos del proceso de depuracion. Las pequenas algas verdes unicelulares

son las mas importantes para mantener el nivel adecuado de oxigeno disue1to en los

es ta nq ues d e e sta bi li za ci on .



- 137 -

La ingenieria sanitaria divide a las algas en cuatro grandes grupos: algas

verdeazules, algas verdes, flagelados pigmentados y diatomeas.

~a clasificacion completa de un organismo ohliga a tener en cuenta numero-

sos elementos (reino, clase, orden, familia, etc.) pero la denominacion cient1fica

convencional coneta de dos partes: el genero y la especie.

3. ANALISIS CUANTITATIVO - METODO DE SEDGWICK-P~FTER (S-R)

De acuerdo al proposito del estudio se selecciona el metodo a seguir. La

camara del Sedgwick-Rafter es el dispositivo mas comunmente usado para el recuento

de plankton, de facil manipulacion y proporciona datos razonables cuando se utiliza

con un microscopio cal~hrado y equipaao con un micrometro ocular de Whipple.

3.1 Resumen del metoda

Un mililitro de 1a muestra alicuota es colocadaen 1a camara de Sedgwick-

Rafter (S-R). La camara S-R mide 50 mm de longitud, 20 mm de ancho y 1 mm de pro-

fundidad, e1 area total es de 1000"mm2 y el volumen es 1000 mm3 6 1 m~. Es necesa-

rio contar con un microscopio y un micrometro ocular de Whipple, el cual es un disco

de vidrio que contiene un reticulo grabado que divide el campo en cien partes 0cua-

draditos iguales.

El valor en micras del area de cada uno de los cuadraditos var1a segun el

ocular y objetivo utilizado. Este valor debe ser medido para cada ohjetivo del

microscopic con un micrometro de objetivo que es una lamina de vidrio que contiene

en el centro una linea de 1 mm de longitud, dividida en 100 partes iguales (10

micras).

Para calibrar el microscopio se coloca el micrometro de objetivo sobre la pla-

tina del microscopio y la cuadricula de Whipple en el ocular, se hace la superposi-cion de ambos y de esta manera se puede medir el lado de uno de los cuadritos.

El area del cuadradito ~e obti~ne mUltiplicando este valor por 100 y por 10

tanto el numero de campos comprendidos en toda la camara de Sedgwick-Rafter. El

recuento se realiza por campos y se cuentan las algas presentes en diez 0mas campos



- 138 -

a1 azar de cada cuadr1cu1a de Whipple. Una concentracion de 10 a 100 organismos

por campo rnicroscopico reduce e1 error del recuento. La expresion de los resul-

tados es nGmero por mt.

3.2 Ap1icacion

Presenta 1a ventaja de ser 1a mas precisa, de facil manipu1acion y propor-

eiona datos razonables cuando se uti1iza con un microscopio calibrado y equip ado

con un micrometro ocular de Whipple.

3.3 Equipos, material y reactivos

3.3.1 Equipos y material

Microscopio

Este debe ser binocular y tener como minima oeulares de lOX, 15X; objetivos

de 4X, lOX, 20X, 40X y de 100X (inmersion). Ademas, debe tener un micrometro de

Whipple, un micrometro de objetiva, un micrometro de ocular y una camara de Sedgwick-

Rafter.

F rascos de muestreo

De preferencia p1asticos con gran capacidad y de boca ancha.

Pipetas

De tamano conveniente para tomar e1 vo1umen requerido rapidamente, permitiendo

un error maximo de 2.5%.

Laminas protaobjeto y cubreobjeta

3.3 .2 Reactivos

Solucion de formalina



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C...... A DE SEDGWICK - RAFTER

I'

J I

MICROMETRO DE WHIPPLE ENFOOUE ~ MICROMETRO DE OCULAR Y

MICROMETRO DE OftJETIVO

Figura N° 19

CAMARA PARA ANALISIS CUANTITAT!VO DE ALGAS



- 140-

Formula

Form al deh id o ( 40 %)

Agua destilada

10 mQ,

90 mQ,

Preparacion

A 90 mQ de agua destilada se agrega 10 mQ, de formol. Neutralizar. agre-

gando tetraborato de sodio hasta llevar a un pH 7.0 07.3.

3.4 Muestreo

Para la toma de muestras bio1ogicas se uti1izan frascos 1impios no necesa-

riamente esteri1es de 200 mQ de capacidad. No se debe llenar cornpletamente e1I

frasco; se debe dejar 1/3 de su volumen sin aire para 1a respiracion de los micro-

organismos.

La reco1eccion se realiza en un punto sena1ado y a una profundidad determinada.

Si 1a muestra tomada no es analizada inmediatamente se debe preservar con forma1-

dehida a1 10% 0 con cualquiera de los preservantes antes mencionados. Si 1a muestra

es examinada entre dos a tres horas despues de la coleccion no se necesita tratamien-

to especial. La muestra puede ser rnantenida par 24 horas entre 3 y 4° C.

3.5 Procedimiento

L1egada la muestra a1 laboratorio, esta es ana1izada cualitativamente para

conocer los diversos generos de algas y otros organismos presentes y su abundancia.

Se procede a 1a identificacion, co10cando una gota de 1a muestra en una lamina porta-

objeto, ponienda encima un cubreobjeto y se examina toda e1 area que cubre 1a lamina

identificando todos los organismos, con 1a ayuda del m1croscopio compuesto.

Esta observacion se rea1iza repetidas veces hasta obtener e1 mayor nGmero de

generos presentes en 1a muestra.

De acuerdo a 1a concentracion de organismos presentes en 1a muestra, esta

debe ser di1uida 0concentrada 0 analizada directamente; esta informacion es

importante para la realizacion del ana1isis cuantitativo.



- 141 -

Si la muestra contiene mucha cantidad de organismos se procede a diluirla.

Para esto se mezclan 50 mt de muestra con 50 m~ de agua destilada (1:1). 8i a1

observar a1 microscopio revela una concentracion de organismos todavia numerosa

se debe diluir mezc1ando 50 mt de 1a aoLucf.Sn (1: 1) con 50 mt de agua destilada

( di1ucion 1: 4) •

5i la muestra tiene poca cantidad de microorganismos p1ankt15nicos, esta

puede ser concentrada por e1 metodo de fi1tro de membrana, por sedimentacion 0 cen-

trifugacion.

Para el analisis cuantitativo se procede a homogenizar la muestra y a colocar,

un mililitro en la camara de Sedgwick-Rafter.

- Colocar el cubreobjeto diagonalmente a traves dela celda, la cual rotarasuavemente; esta cubierta no debe flotar sobre la camara.

- Se espera 15 a 20 minutos hasta proceder a realizar el recuento, de esta

manera 10,sorganismos permanecarfin fij os.

5e pro cede a realizar el recuento con la ayuda de un microscopio previamente

calibrado y con aumento de 100X 6 150X.

- 5e cuenta el nGmero total de algas encerradas en el micrometro ocular de

Whipple.

- Puede informarse por separado el nGmero de cada genera asr como de los tota-

les correspondientes a los grupos mayores de algas.

- Se cuenta como minime de 10 a 20 campos al azar, teniendo en cuenta quela

concentracion de organismos por campo debe estar entre 10 a 100.

Ejemplo:

Una muestra es diluida (1:1). Se toma 10 mt y se diluye a 20 mt.

Factor de enumeracion =Area disco Whipple .150X

Para muestra diluida:

Celulas fitoplacton!m/. Total decelulaa contadas x vol.final de dilucion x factor deNede campos al azar x vol. original de muestra x 1mt enumer ac Ldn

Al utilizar un ocular de 10 y objetivo de 15X tenemos que el area de la cua-

dricula de Whipples es 1 mm2•



- 142-

Reemplazando:

Factor de enumeracion ~. 3

1,000 ro m = 1 0001 m m 2 ,

Esto representael nGmero de campos comprendidos en toda 1a camara de Sedgwick-

Rafter (S-R). Si tenemos un total 900 generosde Chlore11a en 10 campos.

Reemp1azando:

P ara muestras di1uidas:

900 x 20Cel. fitoplankton/m2= 10 x 10 x 1

Cel. fitop1ankton/m2= 180,000

La exp res i.Sn de los resultados es N° I m.L

3.6 Resultado

Para una mejor expresion de los resultados es necesario tener en cuenta~

En el campo

- Profundidad de 1a que se tomf la muestra

- Volumen de 1a muestra

- P reservante utilizado

- Crecimiento de algas visibles

- Temperatura del agua

- T urbiedad

En el laboratorio

- Metodo de concentracion- Cantidad de agua concentrada

- Volumen final del concentrado

- Tipo de celda contadora

- Aumento del microscopio utilizado



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Area del campo microscopico

- Factor de enumeracion encontrado de acuerdo a1 ocular y objetivo empleado

' Los calcu10s son los siguientes;

- La ca~ra de Sedgwick~Rafter tiene una longitud de 50 m m ; 20 r o m de ancho y

1 m m de profundidad.

- E1 area total de la camara sera 1,000 m m 2 y e1 volumen es de 1,000 m m 3 0 sea

1mt.

.~ 1,000 m m 3Factor de enumerac10n = ~--~~~~-~~~~~--~~~

Area del disco Whipple x 150X

Para muestras no diluidas y no concentradas:

~1 1 f' 1 k / Total de celulas contadas x factor de enumeracionCe u aS1top an ton m1= campos a1 azar x 1 m1

P ara muestras diluidas:

T 1 d ~1 1 d 1 f·' 1 d d'l .~ factor deota e ce u as conta as x vo • ana e 1UC10n ." .~Celu1as fitoplankton/lIlR.=N 0 1 .1 "l d 1 lIlR.'-numerac10n

campos a azar· x vo • or t.gana e muestra x

P ara muestras concentradas:

Totalde dUu1as contadas x vo!. final de concentradoCel. de fitoplankton/m1- x enumeracion

N° campos al azar x vol. original de muestra x 1 m1

factor de

3.7 Registro de datos

CU<;ldro° 32

En e1 se registra e1 total de organismcs encontrados en e1 analisis cua1ita-

tivo.

Se indica laabundancia de los organismos encontrados.



- 144 -

Cuadro N° 3 3

- Para el reporte de los datos cuantitativos y se tiene en cuenta s~ 1a muestra

fue diluida para su respectivo analisis.

Cuadro ~~o 34

- Para el reporte cuantitativo y para muestras no diluidas y no concentradas.



- 145 -

D ETERM IN ACIO N D E PLA NCTO N M ETO DO CU ALITA TlV O

PROYECTO - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -PU NTO D E M UESTREO

FECHA D E M UESTREO

VOLUMEN UT IL IZADO- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

HOJA N ° DE------- -----------

ANALISTA __

N °D E M UESTRA

- - - - - - - - - - - - - - -FECH A DE AN ALlS IS _c _

VO LUMEN F IN A L c

ORGAN I SMOS FRECUENCIA OBSERVAC IONES

.

!

-,

.

"

1 --

i· --

Lab-MB2



- 146 -

D ET ER Ml,N AC IO N D E tU .G AS

PROYECTO ~ ...; ._ _

METODO CUANTITATIVO ROJA N° DE _

AN ALISTA -....:..__

P ara mues tra di lu! da

Factor de ~p':~r_!c" io~ Area del disco ~~p:: 100 x aumentos (mmZ)

"~lulas Total celulas conLadas x vol. final de dilucion x factor ~,,~ fito/m9 ,. de .enWPeracion_N ° campos contados al azar x vol. orig. de muestra x Im2.

Fecha de muestreo _

Volumen colectado

V olumen final de dilucion - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -F ec ha a na li si s

------N°muestra - - - - - - - - - - - - - - - -

____________________ Volumen analizado ___

Laguna N° ITotal de c am po s c on ta do s al azar Total

cel/m~I

Organismos I

contado1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

I

lI

j .

i!-

.;

Total de organismos

Lab-MBI



- 147 -

Cuadro N° 34

D E T E R M I N A C I O N D E A L G A S

PROYECTO _

M E T O D O C U A N T I T A T I V O ROJA N D . . . . : D E ' - - - _

AN ALISTA _

Para muestra no diluida y no concentrada:1000 m m 2

Factor de enumeraci6n~ Area del disco Whipple x 100 aumentos (mm2)

Total dec€ lulas contadasC€ lulas py topla,nkton/ m1= N0 de Campos contados a1 azar x lmR.x factor de anumeracijin

Fecha de muestreo __

Vo1~n co1ectado Voll1men analizado- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Fecha anlilisis-----

N° mtiestra

-,

Laguna N°

Organismos Total de campos contados TotalIcellml

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10,-

Total de organismos



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4. REFERENCIAS BIBLIO.GRAFICAS

,AMERICAN PUBLIC HEALTH ASSOCIATION et al. Methods for the examination of

water and wastewater. 15 ed. New York,APHA, 1981

2 . CETESB. Determina~oes bio16gieas. Normaliza~ao tecnica saneamento

1.

ambiental, NT-06. Sao Paulo, 1978

3. BRANCO, S.M. Hidrologia aplieada a Engenharia Sanitaria. 2 ed. CETESB,

Sao Paulo t 1978

4 . PALMER, C.M. Algas en abasteeimiento de asua. Mexico, Centro Regional de

Ayuda Teeniea, 1962

5. WEBER, Cornelius I. Biological field and laboratory methods for measuringthe quality of surface waters and effluents. Cincinnati, EPA, 1973

EPA-670/4-73.001

6. WHIPPLE, G.C. Microsco2Y of drinking water. 4 ed. New York, John Wiley,

1954

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