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INSTITUTO EVANDRO CHAGASFundação Nacional de Saúde - FUNASA

Ministério da Saúde - Brasil

FEBRE AMARELA

Diagnóstico Laboratorial

Sueli Guerreiro Rodrigues

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DIAGNÓSTICO LABORATORIAL DIAGNÓSTICO LABORATORIAL ESPECÍFICO DA FEBRE AMARELAESPECÍFICO DA FEBRE AMARELA� Pesquisa de Vírus

Isolamento: Camundongos swiss recém-nascidos

Cultura de células C6/36

Detecção de ácido nucléico: RT-PCR

� Detecção de AnticorposEnsaio imunoenzimático: MAC-ELISA, ELISA IgGInibição da hemaglutinação

� Exame Histopatológico e Detecção de Antígeno por Imunohistoquímica

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Coleta, Conservação e Transporte de Amostras para Pesquisa de Vírus

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Sangue* (soro)/0-5 dias após o

início dos sintomas

Conservação/ Transporte

Isolamento do vírusPCR

Tecidos (óbito)/

Ideal: 8 hsMáximo: 24 hs

-70 °C/Gelo seco

-70 °C/Gelo seco

Isolamento do vírusPCR

* Retração do coagulo: 2 - 6 horas a 4° C.

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ISOLAMENTO VIRAL EM CAMUNDONGOS RECÉM-NASCIDOS

Detecção de antígeno no cérebro dos camundongos recém-nascidos, pelo teste de fixação do complemento.

Camundongos Swiss

A - Sangue (fase aguda)B – suspensão de tecido (óbito)

A B

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A – Sangue, soro (fase aguda)B – suspensão de tecido (óbito)

A B

Imunofluorescência direta(A) células não inoculadas(B) células infectadas - VFA

ISOLAMENTO VIRAL EM CULTURA DE CÉLULAS C6/36

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DETECÇÃO DE GENOMA VIRAL

Faixas 1 a 3 (fígado) - cDNA com 1000, 848 e 1024 pb, respectivamente (região estrutural). Faixas 6 (fígado) e 10 (baço) - cDNA com 695 pb (NCR 3’).Faixa 8 (C6/36 infectadas) - cDNA com 695 pb (NCR 3’). Faixas 5 (baço), 7 (coração) e 9 (fígado) - controles negativos.Faixas 4 e 11: peso molecular.

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Coleta, Conservação e Transporte de Amostras para Pesquisa de Anticorpos

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Sangue* (soro)/> 5 dias após o

início dos sintomas

Conservação/ Transporte

Detecção de anticorpos IgM(MAC-ELISA)

-20° C/Gelo seco ou comum

* Retração do coagulo: 2 - 24 horas à temperatura ambiente.

Sangue* (soro)/1ª amostra: até 7 dias

2ª amostra: 14° - 30° dias(após o início dos sintomas)

Detecção de anticorpos IgG (IH, ELISA)

-20° C/Gelo seco ou comum

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MACMAC--ELISAELISA

Anti-IgM humanaIgM humana (soro do paciente)AntígenoConjugado ( peroxidase)Substrato (Sistema ABTS)

Microplaca para teste de ELISA

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INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃOINIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃO

INIBIÇÃO DA HEMAGLUTINAÇÃOHEMAGLUTINAÇÃO

Anticorpos anti-VFA

Anticorpo não específico

Antígeno do VFA

Hemácias de Ganso

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EXAME HISTOPATOLÓGICOEXAME HISTOPATOLÓGICO

IMUNOHISTOQUÍMICAIMUNOHISTOQUÍMICA

Espécime/Coleta

Tipo de Análise

Conservação/ Transporte

Tecidos (óbito)/

Ideal: 8 hsMáximo: 24 hs

Histopatologia

Imunohistoquímica

Temperatura ambiente/

Formalina tamponada

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IMUNOHISTOQUÍMICAIMUNOHISTOQUÍMICA

Seta indicando áreas com antígenos específicos. A - Fígado, B - Baço.

LegendaLegenda

Fase sólida (LÂMINA)AntígenoAnticorpoConjugado (peroxidase)

Substrato

Antígenos detectado

A

B

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FEBRE AMARELARede de Laboratórios

FLUXO DE AMOSTRAS:�Isolamento Viral�Exames Histopatológico�Imunohistoquímica�Controle de Qualidade

Instituto Adolfo Lutz - IAL/SPLaboratório Colaborador.

Instituto Oswaldo Cruz - FIOCRUZ-RJLaboratório Colaborador.

Instituto Evandro Chagas - IEC/PALaboratório de Referência Nacional

Centro Colaborador da OMSRN

AM

RR

AC

PA

AP

RO

MT

TO

GO

DF

MA

PI

CE

PE

ALSE

BA

ES

RJ

MG

MSSP

PR

SC

RS

PB

Sorologia (17)Sorologia a implantar (1)

RN