Farnesyltransferase inhibitor

4
Peptidomimetic Inhibitors of Protein Farnesyltransferase Show Potent Antimalarial Activity Junko Ohkanda, a Jerey W. Lockman, a Kohei Yokoyama, b Michael H. Gelb, b, * Simon L. Croft, c Howard Kendrick, c Maria Isabel Harrell, d Jean E. Feagin, d,e Michelle A. Blaskovich, f Said M. Sebti f, * and Andrew D. Hamilton a, * a Department of Chemistry, Yale University, PO Box 208107, New Haven, CT 06520, USA b Departments of Chemistry and Biochemistry, University of Washington, Box 351700, Seattle, WA 98195-1700, USA c Department of Infectious and Tropical Diseases, London School of Hygiene and Tropical Medicine, Keppel Street, London WC1E 7HT, UK d Seattle Biomedical Research Institute, 4 Nickerson St., Seattle, WA 98109-1651, USA e Department of Pathobiology, School of Public Health and Community Medicine, University of Washington, Seattle, WA 98195, USA f Drug Discovery Program, H. Lee Mott Cancer Center and Research Institute, Department of Biochemistry and Molecular Biology, University of South Florida, Tampa, FL 33612, USA Received 11 September 2000; accepted 15 January 2001 AbstractÐMalaria continues to represent a very serious health problem in the tropics. The current methods of clinical treatment are showing de®ciencies due to the increased incidence of resistance in the parasite. In the present paper we report the design, synthesis, and evaluation of potential antimalarial agents against a novel target, protein farnesyltransferase. We show that the most potent compounds are active against Plasmodium falciparum in vitro at submicromolar concentrations. # 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. Malaria is one of the most widespread infectious dis- eases in the tropics. Nearly 300 million new cases occur each year, resulting in more than one million deaths annually. The fatal cases are generally caused by the most virulent human malaria parasite, Plasmodium fal- ciparum. Current clinical treatment involves the use of inexpensive antimalarial drugs such as chloroquine. However resistance has rendered many of these drugs ineective. Other malaria control eorts have focused on mosquito eradication programs, the development of a vaccine against the parasites, and new drug targets such as protease inhibitors or isoprenoid biosynthetic pathway inhibitors. 1 However, the slow development of a vaccine and the pressing problem of chloroquine resistance have created an urgent need for identifying new drug targets in Plasmodium falciparum and for the development of eective new antimalarial agents. In this paper we report that a family of inhibitors of the enzyme protein farnesyltransferase (FTase) shows potent antimalarial activity in whole cell assays. Mammalian FTase is a heterodimeric zinc metalloenzyme composed of a 48 kDa a-subunit and a 46 kDa b-sub- unit that catalyzes the transfer of a farnesyl group (C 15 ) from farnesyl pyrophosphate (FPP) to the thiol of a Cys residue near the carboxyl terminus of target proteins. The key C-terminal sequence that is recognized by FTase is CaaX, where C is cysteine, aa is an aliphatic dipeptide, X is often methionine, glutamine or serine. In contrast, the related prenyltransferase, protein ger- anylgeranyltransferase-I (GGTase-I), recognizes and geranylgeranylates (C 20 ) proteins that terminate in CaaX, where X is leucine or phenylalanine. In recent years, FTase has been a major target in the search for novel anticancer agents. This eort was initially based on the observation that the Ras family of G-proteins normally cycle between their GTP (active) and GDP (inactive) bound forms, to regulate intracellular signal transduction. However, in the mutated form of Ras that is found in over 30% of human cancers, the protein is locked in the GTP bound state, and this results in 0960-894X/01/$ - see front matter # 2001 Elsevier Science Ltd. All rights reserved. PII: S0960-894X(01)00055-5 Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 11 (2001) 761±764 *Corresponding authors. Tel.: +1-203-432-5570; fax: +1-203-432- 3221; e-mail: [email protected]. Tel.: +1-813-979-6734; fax: +1-813-979-6748; e-mail: [email protected]. Tel.: +1-206-543- 7142; fax: +1-206-685-8665; e-mail: [email protected].

description

anti cancer agent

Transcript of Farnesyltransferase inhibitor

Page 1: Farnesyltransferase inhibitor

������������� ��� ����� �� ������� ������������������� ���������� ������������ �������

����� ������� ��� �� �� �������� ����� ��������� ������� �� ����������� �� � �� � ��!� ��� ���� �� �� "#���� �� ��� ���� $� %��&���

�������� '� (��#��)���� ��� �� ��� ��� �� '� �! *� ����� ��������������� ���� ����� ���� �� ���� ��� �� �� ������� ��� ����� �! �"#��� �$%

������������ ���� ���� ��& � '��� ����� �� ���� �� (��� �)��� �� *#����� $������� (% +��+#,����� �$%����������� -��'� .� ��& !�� '�� � ������� /�&� $'�� �) ��� ��& !�� '�� 0�& ' ��� 1����� $������

/�&� (��2 � !� �1$������ � ��& '�� 3�����'� -��� �.��� 4 � '5���� $�6� $������� (% +���+,�"#�� �$%

����������� ����7 �)�� $'�� �.7� ' ����� ��& ���.� �� 0�& ' ��� �� ���� �� (��� �)���$������� (% +��+#� �$%

���.) � �'���� ��)���� 6 /�� 08�� ���'�� ������ ��& 3�����'� -��� �.��� ���������� � '��� ���� ��&0��'.��� � �)�� �� ���� �� $.�� 9�� &�� !����� 9/ **"��� �$%

+����)� ,, ��- ���� .///0 ����- � ,1 ����� � .//,

� ���������� �� ��� ����# � �- �#�� � )� � #� ���# ���� � - ����� �� �� �-��#� 2�� �� �� �� ��# �� �������� �� ��� � �#��!��& �3�������# �� � �� ��� ��#� �������� �� �#�# ���� �� �� -� �#� �� "� �� - �#�� -�-� !� �-� �� �#�&� #�� ��#�#�� �)���� ��� �� -� �� ��� �� ����� ��� �&�� # �&���# � ��)�� � &� - � ��� �� ��#�� ��#�� �#�� �� #��! �� �� ��# -� �� ���-���# � � �� �)� �&���# �����& .� ��' ���.� �� )� � � #����� ����� ������ � ���#� � .//, $�#�)�� ������� � � '�� �&� # �#� )��

���� �� �# ��� �� �� ��# !��#- �� ����� ���# �#4��#�# �� �� �-��#� 5�� �� 6// ������� ��! ��#�# ���� ���� ��� �#�� ��& �� �� � ��� ��� ������� �� �#��������� 2�� �� �� ��#�# � � &��� ���� ���#� �� ����# )� ���� ����� ���� �� -� �#� � �����& .� ��,' ���.�� �� �� �������� �� ��� ��)��)�# �� �#� �����7-��#�)� �� ����� ��� �&# #��� �# ���� �8�������!�)� �#�# ���� ��# ��� � ���� �� ��#� �&#������ �)�� � �� ���� �� ��� �� ��� # ��)� ����#��� ��#8�� � � ���� ��� - �& ��# �� �)���-��� ��� )������ �&���# �� -� �#� �# �� ��! �& � &� ##��� �# - � ��#� ������ � # � �#�- ���� ���#�� �� ��-� �!�� ������ � #�, ��!�)� �� #��! �)���-��� ��� )������ �� �� - �##��& - ����� �� ���� �8���� �#�# ���� ��)� � �� � �� � &�� ��� �� ��� �����&��! �& � &� # �� �����& .� ��' ���.� �� �� ���)���-��� �� ���� �)� ��! �� ����� ��� �&�� #� "� ��#-�-� !� �-� �� � ������ �� ������ � # �� ��

��9��� - � ��� �� ��#�� ��#�� �#� :%2�#�; #��!#-� �� �� ����� ��� �� �)� � �� !���� ���� �##��#�

��������� %2�#� �# � �� � ���� �� 9��� �� ������9������-�#� �� � <= �*� �4#����� �� � <> �*� �4#��4��� �� �� ���9�# �� ��#�� �� � �� ��#�� & ��- :�,1;� �� �� ��#�� -� �-��#-�� � :%??; � �� ���� �� � ��# �#��� ��� �� �� ��7�� � ����# �� � &� - � ���#�2�� ��� �4 � ����� #�8����� �� �# ���&��9� ��%2�#� �# ���@ !�� � � �# ��# ���� �� �# �� ���-�� ���-�- �� @ �# �� �� �� ������� &�� ����� � #� ���� "���� �# �� ��� � - ���� ��#�� �#� - � ��� &� 4����&� ���� ��#�� �#�4" :��2�#�4"; ���&��9�# ��&� ����&� ����� �# :�./; - � ���# �� � ���� � �����@ !�� � @ �# ������� � -������������� "� ���� ��� # %2�#� ��# ���� � ��A� � &� �� �� #�� �� �� ��)�� �� ������ �&�� #� 2��# ��� !�# ��� ����� ��#��� �� ��#� )� ��� �� �� +�# ������ �� �4- � ���#�� ����� ����� �� !��� ��� �2? :�� �)�; �� �*?:���� �)�; ���� �� �# � �&��� � �� �������� #�&��� ��#�� ���� ��!�)� �� �� �� � � �� � �� +�# �� �# ���� �� �)� 6/B �� ����� ����� # �� - � ��� �#����� �� �� �2? ���� # � � �� ��# �#�� # ��

/C>/4=C<@D/,DE 4 #�� � �� �� � � .//, $�#�)�� ������� � � '�� �&� # �#� )��?" " F �/C>/4=C<@:/, ;///1141

(��� &���� G �������� �����# � �� � # ,, :.//,; H>,IH><

��� �#-����& �� �� #� 2���F J,4./64<6.411H/0 ��7F J,4./64<6.46..,0 �4����F �� �!������ ��K�������� 2���F J,4=,64CHC4>H6<0 ��7FJ,4=,64CHC4>H<=0 �4����F #�� �K��L ��#����� 2���F J,4./>41<64H,<.0 ��7F J,4./>4>=14=>>10 �4����F &���K�����!�#���& ������

Page 2: Farnesyltransferase inhibitor

����� ���� ���� & �! �� 2�� �8�� ���� �� +�# ���� ��#��� � �� ���� � �� �� -��#�� ���� ��� �� ����&���#�# - ��- � ���� ��)�# �&� � # � � &� %2�#�� "� -� ����� !� �� � �� # ��)� �-� � -�-4 ������ ��# �� �� ���@ #�8�����.�H �� � � #��4�������� ������ � # �� %2�#� �� #�-- �## ��� & �! � �� ��� ���� !� ��� �--� �� & �## �7��� ��

? � ��� - ����� ��� ���� # �� - � �9��� -� �#� �#� ����)� #��!� �� - � ��� �� ��#��� ��� ���� # �� �� �-���#��� �# !�������� 7�.'� � !��������'�.: � �� /� ����� � ��� '��� ���:���� � �� ��)�-� �3� ����� �� �7- �##� %2�#� � �� !6 7�.'� �=C

+���� �� �� &���# ����& �� �� #����� # �� �6 ��' ,���.� %2�#� ��)� ���� ��� �3� �� &����� � ���#�#�� ���� ��� � � ��� �-� � �� �� %2�#� ������ � #��!� ������ ��� �� �)� � �&���# �� & �! � �� �6 ��,' ���.� �� ����� � ���� ����# :"�1/M<6 ��;�,/

2��#� 3���&# #�&&�# � �� - � ��� �� ��#��� ��� �� �6��' ���.� ���� �� � ��! � &� �� �� ����� ��� �&�� #�"� ��# -�-� !� �-� �� � ��! #� ��# �� � �-�- �����@ ���� ��# #��! #�&��3��� ������ ��� �&���# �6��' ���.� �� ���� ��� � ��

�� # � �&� �� �� �#�&� �� -� �� %2�#� ������ � #��)��)� �#�&���& �����# �� �� ���@ � �-�- �� ��!���� �� ��� �� ���-�� �� �-�- �� �# �-���� �� ��� �-����� �� �&� #-��� #��� �# � #��# � � � <4��������9��� & ��-� 2��# �� � � ������ �� ��&���-� �� ������ � # �� %2�#� #��� �# %2"4.H> :�; !������# �� "�1/ �&���# �� ��������� ��9��� �� /�1 �������� - � ��� �� ��#��� ��� �� ��������� ����# ��#��!� �� & �! � �� ����� ��� # �� ��� ���#�����#�H 2�� �#��)� � �� %2�#� �� -� �#� �# �� �������� � � ���� ��� �� �� ��#��� � �4- � ���# �� ��-� �#� �� ���� ����� - ��- � �# � ��)�# �&� � �� ���� �� �� -�- ������ ��# �# �� �-� �#� �� �&�� #� �� ���� �� #��!� �� %2"4.H> �# ��#� �� ���� �)� ����4�� � �� !6 7�.'� %2�#� :"�1/M,�H ��; �� �����#-� �#� � & �! � �� �� ,/I1/ �� ��&��= �� �� ��#�# �� ��#� 3���&# !� � �-���#��� �# !� ���� ���)�# �&� � �� -� �� ��� �--���� ��� �� ���@ -�- ��4���� ��# �&���# �6 ��' ���.�� ���3�� ���# � ��# �� � � �� �� -�- ������ ��# !� � ��#� �� �� ���� � �# �� # �� � � �� ��������� %2�#� ���� � ����@ #��# � � �� �� �� ��� �)� �� ��#�� �-��#-�� ������&��� 2��# #��!� �� �� � �-�- �� ���# �� ���7 ��� ����� �� ��� !� � �� ��# ���� ��� ��� ��& � � 9��� �� �� �� �)� #� ��,, "� � � � �)� ���� ��- ����� �� �� ������ ��# ������ � �� �� ���� & ��- �� �-� �#� �� ���� & �! � �7-� ���� !� �-���� ����# ���� �#��� �� %2"4.H> !� � ����9��� �# �� �� � 4�� �)� �� �� �����& ���� ����� & ��-�

%� �� �� � �� ����9��� & ��- ����� ����!# ���� ��� ��� �� )� ���# #��# � ��� # � - ��� �� - �4#���� �� �� �-����� ��D� -��� �����# ��� ���� �)� #� �� 2�� ���-���# ��)�# �&� � �� ��# # �� � ���# � �� ��� ,� 2�� ��#�� #�� �� �� �-- ���� �#� �� �� - �-� � ��� �� �� ���@ -�- ������ ��# �# #��!��� ������ , �� �� #�� ��#�# �� �I��� ��9��� � �����-���& �� .4� ���4<4�� � ������ !� � -������� ������� �����!� �� �7�� ��� �� �� �� ��� & ��- ��� �

�� ��#�� ��-����� #����� .4-�����4<4�� ����9������� %� ���-���# �I� �� #����� !�# ���-��!� � �� ������� �� ��� �# � �� !�# ���� � ��������� � �)� �)�� +��� �)� ����� ��� !� � �� �� �4#-����& ,4#��# � � � <4 � 14�� �������9��� ���4��!� �� �� ���#�# &�)� �� � �� �� ��7���� ���#� %� ���-���# �I�� �� #����� !�# ���)� � � ���4�� �� �# � �� !�# �� �&��� � � �� ������ '� � ��� �)� ����� ��� !� � ,4:<4�����;���9��414�� ���4����9���. ��� �� ��� !� � 2���< �����!� ���- � �� ��� ��� ����� ���� ���# �� �#�� ��& ���49��� ��� � �)� �)� !�# ���-�� !� � �� �����������#��& ,4N64:��� ��������;- �-��O464� ����� ��������� ����� �� :$*�";D,4�� �7����9� ��9��� :��( ; � &�)� �� �� �#-����& ����#�

2�� !���� ���� ������ ��� �##�� �� �6 ��' ���.� & �! ��� ����� � ���� ����# !�# �� �� �� �� )� � �� � <=� N6�O4��-�7�� ���� ���� -� � ��� �##���,. 2�� ����� ��� �� -�- ������ �� %2�#� ������ � # � #��! ��& �! � �� �6 ��' ���.� �� ����� � ���� ����# �# �-� � �� 2���� , �# $*1/ )����# �� B ������ ��� � ./ ��� 2��#� !� �7-� ���� # !� � �� �� �� ���4-���� �� �� �� #��� # ��� :6*H;� ���-� �#�� �# ��#���� �� 2���� , � �� "�1/ )����# �� ������ ��� ����������� %2�#� �� �� �4+�# - ���##��& �� 5"�626 ����#�

���-��� � :%2"4.H>; � �� #��! ��� �--� �� ������ ��� �� -� �#� � & �! � !�� ��# ��� �� �� ����49���4��� �����& � �)� �)�# :!� � �� �7��- ��� �� � ����; ������ � -� �#� � & �! � � ������ � ���# ����! 6/

����� �

H>. ;6 ��5��&� �� ��6 < � �)6 0�&6 ����6 /���6 �� =����> �"�?�"4

Page 3: Farnesyltransferase inhibitor

�&D��� ���-���# ! �� � �� !���� �� 14-�#� ��� �� �� ����9��� ��& �# ����� � �� �� �-����� <4���4�����9�� � #-��� #��!� ���� .4��� ��&�� �� �)� � ��� �� �#-����& <4#��# � � � �#��� # " �� �� '#����� �-������ �� �� #��# � � ��� -�#� ���# �� ������9��� !�# #��� �� �� ������ ��� �� ���������%2�#� �� �P�� # � !���4�� ��� �� � �� ��� �� ������4 � # ! �� � !� � �� ��9��� �� �)� #� �� "� � �# ��&�����-��� ! !�# �� � ��� ./ ���# �� � �� �)� � ������ ��& �� & �! � �� �6 ��' ���.� ��� �� �������&- � ��� �� ��#��� ��� �� ��������� ����# �P�� ��&-�##���� ��� ����# �� %2�#� ������ ��� �� �)� � ������ ��� -� ��� ��� �� !��� �� !� � &���#�#�

2�� #��-�� #� ��# �� ���4�� �������4��� �����& ���4-���# #I�� ��#� #��!� -� ���� �&���# �6 ��' ���.��� �� ��! �&D�� ��&�� 2��#� � � �������� � ������ ���� ��� %2�#� �� ��# - ������ �� �� � �������#�� �� ��� ������ ��� �� - � ��� - ����� ���� ��!�)� ���3 �� ��� �� ��# ������#��� ��# �!�� ������ ���# ���# �� ���� ��� %2�#�� ���-� �#�� ����& ���4-���# #I�$ �� �� #�&&�# # �� �� &� �� �-�����

#��# � ��� # � �� �4 � ����# �� �� -�- ������ ����� ��#� ������ � � �� �)� � :��&� $*1/M6�> �&D�� �� �$0 $*1/MC�C, �&D�� �� ��;� ���-��� �� :%2"4.,<=; ��� �� �� ��# -� �� ��������� %2�#� ����4�� � # :"�1/M/�//, ��; � �� ������ -� �#� �& �! � - �#������ �����#� �� -�� ���� ��� -� ��4����� � � �� �� � �� �� ������� �� ��7��� � � ����#�"� ��� �# �� �� ��� �# � �� � �� �� ���-��� �":%2"4.,16; #��!� ��&� ������ ��� �� �)� � �&���# & �! � �� �6 ��' ���.� :$*1/M. �&D��;�

2�� �#�� # #��!� �� � #�&&�# �� �� �� �)� #� � ���&�� ��� - �-� ��# �� ���� ��� %2�#� #���� �� ��4�� �� � �� ��#� �� �� ��������� ��9��� #� �� #���� �)� ������ ��� �� -� �#� �� & �! � �)� ���������%2�#� ������ ��� #���� �� -�##�����

"� #���� � !� ��)� �)���-� � #� ��# �� ���4 ����%2�#� ������ � # �� � � -� �� ������ � # �� ��& �! � �� �6 ��' ���.�� �� � � ��� �����& � ��)�# �4&� � �6 ��' ���.� %2�#� �# � ��)�� �& � &� �� � ��)���� ��& �� �� �-� �#� �� �� �)� � �� ��#� �� � �� %2�#� ������ � # �� ������ ����# �� ���� ���

�%������&������

2��# !� � !�# #�--� � �� & �� # � �� �� 5� �����"�# � � �# �� ���� � :�'>HHH, � ��� �� '*� ���'16=H< � ���; �� Q5*?D�� � (���D����-����� ? �& ���� �� +�#�� �� �� 2 �����& ��2 �-���� *�#��#�# � ����

'��������

,� :�; ����� � ?� ��0 �� ��)��& �� ������'�6 !���6 �(((�� C,� :�; �� � *� ��0 ?��� � �� *� � '��� ���� �((� *#C.1� :�; % ����# �� $�0 ���9��� "� ��0 ��#��� '�0 (��� A��

����� � :�; ?�(:��;. ?:�'�;. �.��6 =CB0 :��; ����< ,//B0 :���; �����4�� 4��� $*�" ��( 5$ 6 =CB0 :�); ����. '��$ C/B0:); ,4#��# � � � <4 � 14�� �������9��� 5�(�5�6 1<IC,B0 :)�; ���� 2�% H.IC.B0 :)��; ����. (���� H.B0 :)���; �.D,/B ?I� 2�%,//B0 :�7; ,4:<4�����;���9��414�� �������9��� 2���< 5�(�5�6 H6B0 :7; 1/B 2%' �� ��.��. ,//B0 :7�; +.5�. $*�" ��( 5$ 6HHI=>B� :7�� �� �; ���� 2�% C/B�

)� �� � $*1/ )����# �� �6 ��' ���.� 6*H & �! � ������ ��� �� "�1/

)����# �� ������ ��� �� ��������� %2�#� �� �� �4+�# - ���##��&

���-# �6 ��' ���.������ � +(�$*1/ :�&D��;

�6 ��' ���.������ � +(�

:B; ������ ����

��������� �4+�#- ���##��& "�1/ ��:"�1/ �� %2�#� ��;

� :%2"4.H>; R6/ � , :/�///1;� :%2"4..,=; ,/ ,C�< R,// :6;" :%2"4..,H; ,. � R,// :>;� :%2"4..6H; R6/ � � :/�H=;! :%2"4.../; 1 =C�, R,// :/�.>;� :%2"4..6=; ,/ H. � :/�/<,;� :%2"4..=C; ,6 =>�6 1 :/�//H.;# :%2"4..HH; 6 � S,// :/�6=;( :%2"4..H=; 6 � R,// :6�,;�$ :%2"4..HC; < � � :/�><;�� :%2"4..C,; ,/ � ./ :/�..;�� :%2"4.,<=; R6/ / /�. :/�//,;�" :%2"4.,16; . CC /�/. :6<;

�"����� ��� � ./ �� +(�M � ���� �����

;6 ��5��&� �� ��6 < � �)6 0�&6 ����6 /���6 �� =����> �"�?�"4 H>6

Page 4: Farnesyltransferase inhibitor

*�0 ����� & *� 26 0�6 � '���6 ����� ��6 �((� �* ,=C�:; +�#�� ��� ?� ;6 2���)6 -��'�6 � ������ �((# 4 <C� :�;����� ��0 ���#�� ��0 ���� � �� ��0 '� ������� (�0 ���4������ ��0 ��� 9 ��0 2�T �����)� "�0 $�� � ��0 U���� ��0 ���� �� ���� �� ��0 ���� � ��0 (��� $� $' ��'� �$$$��# ,1H6�.� �������# 2� ��0 (� &��� �� ��0 ( �#��� ��0 ( �#����� ��0 *��#�� � �� ��0 �� ����#�� �� ��0 ���2��&� �� ��0� ��- �� '�0 ��� *� *�0 U� ��� (�0 (�&�#�� �� ��0 ���4�� #�� �� ��0 (�#� 4*��-�� ��0 *�)�� ��0 � ����� & "� (�0����� �� �� '�0 ������ �� ��0 ���� 5� $�0 ��� *�0 ������+� (�0 ��##� �� *�0 �V5���� 2� ��0 +��# $�0 ������ �� *�0���#�� %�0 ���� �� $�0 �� 9�� �� ��0 ����# �� (�0 � ������ ��0 ����� ��� *� ��0 �� ��� �� *�0 ���� '� "�0 ����� +� ;6 0�&6 ����6 �((( 4� 6HHC�6� �������# 2� ��0 ����� ��� 2� ��0 ���2��&� �� ��0 (���+� ��0 ����� �� ��0 *�)�� �� ?�0 ����� �� ��0 �������� ��0 ���� 5� $�0 � �� '� ��0 ��##� �� *�0 ��� �� '�0?��-����� *� ��0 +��# $�0 ������ �� *�0 ���� *�0 ���4#�� %� +�0 ����# �� (�0 � ���� �� ��0 �� ��� �� *�0 ����'� "�0 ��� � +� �� ;6 0�&6 ����6 �((� *+ ,6<1�<� 2�)� �# '� ��0 *�#��# ��0 ���� ��0 W���� � �� ��0 5A� 4�&� %� ��0 W�������� (�0 ?�� � ?�0 +���#9�!#�� ��0 ��

+�#� �� ��0 *��� +� ��0 '�)� �9 ��0 ���!��� 2�0 ������#'� ��0 +�##��� +� +�0 '���#� '�0 �� �A�)�������� W� ��0���&��� '� ��0 ? ������ (�0 ����� � ��0 (�#��- �� +�0���& ��0 �� #������ ?�0 ����# ��0 �� *�0 ?� �� +�0 ( �4�� �� ��0 5���� '�0 ��� �� ;6 0�&6 ����6 �((( 4� .>1,�1� X��� ��0 �� �&�� �� ��0 %�##�� +� *�0 W�& '�0 ��� ��� ��0 ����� �� '� *� � �)6 0�&6 ����6 �((( � 6/,,�>� X��� ��0 W�& '�0 ��� � �� ��0 ����� �� '� *� ;6 0�&6����6 �((� *+ .,H�H� ��� � �� ��0 ����� �� '� *� ������'�6 !���6 �((� �� ,�=� �������� ��0 2 �� �&� ?�0 (����� %� ��0 W�� W�� 4��# �� ��0 � �� �� *�0 ���� �� �� ;6 � �6 ����6 �((#��* .><CH�C� (����� %�0 �������� ��0 5&���� ��0 � �!�� '�0 $ 4A����4( ���&� ��0 2��-# ?�0 � ������ �� ��0 @��� ��0W�� W�� ��# �� ��0 ���� �� �� ;6 � �6 ����6 �$$$ �� - �##�,/� ����� ��� � *�0 '9�� 2�0 *��W������ ��0 X�� ��0?� � ��0 '���� �� ��0�6 � '���6 ����� �6 �((# �++� ,H1�,,� � ������ �� ��0 ���#� �� 2�0 �� � +�0 ���& ��0(�� +�0 �� U�0 ���!� 9 ��0 �� �� W�0 (��#� ��0 ���� ?� �� � '��� ���� �((# *� ,>>/,�,.� *�#A� ��# +� $�0 ���3�� �� ��0 �����# �� *� %�� ,� '�76 %)���� ��������6 �(�( �" H,/�

H>< ;6 ��5��&� �� ��6 < � �)6 0�&6 ����6 /���6 �� =����> �"�?�"4