Évaluation in vitro de la sensibilité de bactéries
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Évaluation in vitro de la sensibilitéde bactéries aux antibiotiquesCatégories cliniques
Classes thérapeutiques
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INTRODUCTION
Quelle est la nécessité pour un
clinicien d'effectuer nécessairement unantibiogramme de la souche pathogène?
o Spectre d'activité des antibiotiques
o Résistance naturelle des bactéries
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INTRODUCTION
Situation beaucoup plus complexe car
o bactéries peuvent acquérir résistance
aux antibiotiques par modificationcapital génétique
ímutation,
íacquisition de plasmides,íacquisition de transposons
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INTRODUCTION
La seule identification de l'espècebactérienne ne permet plus de prédirel'efficacité d'une antibiothérapie
En pathologie infectieuse :o bactérie résistante à un antibiotique
lorsqu¶elle peut tolérer une concentration
d'antibiotique notablement plus élevée quela concentration qu'il est possibled'obtenir in vivo à la suite d'un traitement.
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INTRODUCTION
Traitement maladie bactérienne :
o sélectionner antibiotique le plus efficace
o
concentrations atteignent un tauxthérapeutique au sein du foyer infectieux.
Rôle laboratoire de bactériologie =
o isoler et d'identifier les bactéries
o déterminer in vitro activité agentsantimicrobiens (méthodes rigoureusementstandardisées)
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L'ANTIBIOGRAMME Principe
o déterminer la Concentration MinimaleInhibitrice (CMI) d'une souchebactérienne vis-à-vis des diversantibiotiques.
Définition (O.M.S.)o CMI = plus faible concentration
d'antibiotique capable de provoquer une inhibition complète de lacroissance d'une bactérie donnée,appréciable à l'il nu, après unepériode d'incubation donnée.
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L'ANTIBIOGRAMME
Définition :
o Détermination sensibilité d'une bactérieaux antibiotiques
o
Examen quotidien de laboratoire, enparticulier hospitalier, pas toujoursnécessaire
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L'ANTIBIOGRAMME
Méthodologies:Techniques classiques
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L'ANTIBIOGRAMME
En milieu liquide
o CMI est indiquée par le tube qui
contient la plus faible concentration
d'antibiotique et où aucunecroissance n'est visible
Méthodes de dilution
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L'ANTIBIOGRAMME
Méthodes de dilution
Détermination de la CMI par dilution en milieu liquide
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L'ANTIBIOGRAMME
Méthodes de dilution
Détermination de la CMI par dilution en milieu liquide
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L'ANTIBIOGRAMME
Méthodes de dilution
Détermination de la CMI par dilution en milieu gélosé
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L'ANTIBIOGRAMME
Disques de papier buvard, imprégnésdes antibiotiques
Milieu gélosé
Culture pure de la souche à étudier
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Application des disques
Antibiotiques diffusent de manièreuniforme
Concentrations inversementproportionnelles à la distance dudisque
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Incubation Disques s'entourent de zones
d'inhibition circulaires correspondant àune absence de culture
Technique parfaitement standardisée,
Ä diamètres des zones d'inhibitiondépendent uniquement de la sensibilitédu germe
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Il existe une relation simple entre lesdiamètres des zones d'inhibition et les log2
des CMI mesurées par les techniques dedilution = Droites de concordance ou droites de
régression
En théorie, les mesures des diamètres deszones d'inhibition et leurs reports sur lescourbes de concordance donnent les valeursdes CMI en µg/mL
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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Courbe de concordance
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L'ANTIBIOGRAMME
Standardisation de l¶antibiogramme
Paramètres rigoureusement contr
ô
lés. Standardisation régie par documents
émanant de l'OMS et des diverscomités nationaux
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Le milieu de culture doit permettre lacroissance de nombreuses bactéries etil ne doit pas contenir d'inhibiteurs des
antibiotiques.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Les teneurs en calcium et enmagnésium doivent être contr ôlées car des concentrations trop élevées
inhibent l'action des aminosides La teneur en thymidine doit être fixe car
elle nuit à l'activité des sulfamides.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Le pH influence l'activité de plusieursantibiotiques
L'épaisseur de la gélose va
conditionner la concentration de lasource d'antibiotique et elle doit être de4 mm.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Les antibiotiques ainsi que les disquesdoivent être standardisés.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
La densité de l'inoculum bactérien estun élément primordial et elle doit êtreajustée à l'aide d'un photomètre ou par
comparaison avec un étalon d'opacité(échelle de McFarland).
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Une phase de pré-diffusion desantibiotiques peut conduire àl'obtention de zones d'inhibition plus
importantes. Selon les pays, une pré-diffusion est ou non préconisée.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
L
a température et la durée d'incubationdoivent être fixes.
o Pour la majorité des bactériesl'incubation est effectuée à 35-37 °Cdurant 18-24 heures dans uneatmosphère normale
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Recherche de la résistance à la méthicillinede S taphylococcus aureus subsp. Aureus
o une gélose de Mueller-Hinton hypersaléeet incubée à 37 °C
o
une gélose de Mueller-Hinton incubée à30 °C. Dans ce dernier cas, la durée del'incubation peut être de 48 heures.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
La technique doit être régulièrementcontr ôlée avec des souches deréférence (souches ATCC ou CIP)
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Principales recommandations
Souches AT
CC ou CI
Po P seudomonas aeruginosa : ATCC
27853 (= CIP 76.110)
o S
taphylococcus aureus subsp.aureus : ATCC 25923 (= CIP 76.25)
o E scherichia coli : ATCC 25922 (= CIP76.24)
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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Résultats de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats Principe de la lecture d'un
antibiogramme Pas des courbes de concordance mais
bandelettes de lecture sur lesquelles
sont reportées les diamètrescorrespondant aux concentrationscritiques.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Concentration critique supérieure = plusgrande quantité d'antibiotique actif que l'onpeut obtenir dans le sérum et les tissus à lasuite d'un traitement effectué à la posologiehabituelle
Concentration critique inférieure = plus faibleconcentration humorale et tissulaired'antibiotique actif
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme
Tableau des concentrations Ä catégorisation
clinique.o CMI inférieure à la concentration critique
inférieure, la souche est qualifiée de sensible.
o CMI supérieure à la concentration critique
supérieure, la souche est qualifiée de résistante.o CMI comprise entre les deux concentrations
critiques, la souche est dite de sensibilitéintermédiaire.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Expression des résultats Résultats quantitatifs (CMI en µg/mL) = le
plus souvent interprétés par les laboratoiresen terme de possibilité thérapeutique.
Cette interprétation consiste à comparer lesvaleurs des CMI avec les concentrationscritiques établies pour chaque antibiotique.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères permettant d'établir les valeurs desconcentrations critiques sont multiples :. Critères bactériologiques. Critères pharmacocinétiques. Critères cliniques. Critères techniques
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères bactériologiqueso basés sur les distributions des CMI des
populations bactériennes des différentesespèces et possédant ou non des
caractères de résistance acquisebiochimiquement et génétiquementidentifiés
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Critères bactériologiques
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères pharmacocinétiqueso posologies normales et maximales et
selon les différentes voiesd'administration
o
études pharmacocinétiques Ä informations sur l'absorption, ladistribution, la biotransformation etl'élimination des antibiotiques
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères cliniqueso permettent de moduler les données
pharmacologiquesíUn individu infecté par une bactérie
dont les CMI sont connues est-il ou nonguéri par un traitement qui semblait bienadapté compte tenu des résultatsobtenus in vitro ?
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères cliniqueso permettent de moduler les données
pharmacologiques
í les données reliant les CMI auxrésultats thérapeutiques ontlargement contribué à la validité del'antibiogramme (Sirot)
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Critères techniques
o
Reproductibilité des résultats
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
Interprétation = classement encatégorie clinique
o Sensible
o Résistant
o Intermédiaire
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
SENSIBLE :o Souches S : probabilité de succès
thérapeutique forte dans le cas d¶untraitement par voie systémique avec la
posologie recommandéeo Effet thérapeutique +++ : traitement à dose
habituelle par voie générale
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
RESISTANT :
o Souches R : forte probabilité d'échecthérapeutique
o Effet thérapeutique (-) : quel que soitle traitement
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
INTERMEDIAIREo Souches I : succès thérapeutique
imprévisible
o
Ensemble hétérogène pour lequel laseule valeur de la CMI n'est pasprédictive
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
SPECTRE CLINIQUE DES ANTIBIOTIQUES
o L'antibiogramme n'est pas nécessaire siprise en compte du spectre clinique des
antibiotiques (SCA). , donc pour deuxclasses thérapeutique: habituellementsensibles et modérément sensibles
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
SCA basé sur :o c, C,o données pharmacocinétiques,o spectre naturel de l'antibiotique (CMI
modales, CMI 50%, CMI 90%)o résultats cliniques
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
4 classes sont proposées au clinicien par espèce bactérienne:
HABITUELLEMENT SENSIBLE
MOD
ER
EMENT
SEN
SIBL
E INCONSTAMMENT SENSIBLE
RESISTANTE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
HABITUELLEMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
HABITUELLEMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
HABITUELLEMENT SENSIBLE
o Spectre naturel de l'antibiotique
o Pourcentage de souches résistantes nedépasse pas 10%
o Le médecin peut choisir cet antibiotiquepour une infection peu sévère et
o L'antibiogramme n'est pas nécessaire
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
MODEREMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
MODEREMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
MODEREMENT SENSIBLEo
naturellement peu sensibles àl'antibiotiqueo mais pas de résistance acquise (CMI 50%
comprises entre c et C)o
Le traitement impose de fortes doseso ou infection de localisation particulière
avec des concentrations très élevées del'antibiotique
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
INCONSTAMMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
INCONSTAMMENT SENSIBLE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
INCONSTAMMENT SENSIBLEo Spectre naturel de l'antibiotique mais
la fréquence de résistance acquisedépasse 10%.
o
Sensibilité imprévisible, doncl'antibiogramme est nécessaire.o Risque d'échec inacceptable
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
RESISTANTE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
RESISTANTE
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'unantibiogramme
RESISTANTE
o Fréquence de résistance > 90%,
o Catégorie hétéroclite
í espèce naturellement résistante
í espèce habituellement sensible mais %R > 90%
í espèce S in vitro mais R cliniquement
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Érythromycine (macrolide) :
o
Espèce habituellement sensible:S.
pyogenes:CMI modale de 0,03 mg/lo Espèce modérément sensibles: H . influenzae: CMI
modale de 4 mg/l)o Espèce inconstamment sensible: S. pneumoniae:
CMI modale de 0,03 mg/l mais 30-40% de souchesrésistantes en 2000o Espèce résistante: E. coli : CMI modale de 32 à 64
mg/l : résistance naturelle incompatible avec untraitement
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Érythromycine (macrolide) :
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Lecture interprétative de l¶antibiogramme
o Fondée sur la connaissance des phénotypes de
résistance.o But : transformer un résultat catégorisé
"sensible" en un résultat "intermédiaire" ou"résistant" en raison d'un risque d'échecthérapeutique.
o
Nécessite :í Une identification correcte de la soucheí Une méthode d'antibiogramme parfaitement
standardisée
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Résultats : Principe de la lecture d'un antibiogramme Généralisation des résultats à des antibiotiques non
testéso Choix des antibiotiques testés repose
í identification du germeí connaissance de sa résistance naturelleí site de l'infection
o Connaissance des familles d'antibiotiques et desmécanismes de résistance croisée permet de nefaire figurer dans l'antibiogramme qu'un nombrerestreint de molécules représentatives.
Méthodes de diffusion : antibiogramme standard
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L'ANTIBIOGRAMME
Techniques en milieu liquide La détermination de la sensibilité peut
se réaliser en milieu liquide en testantla sensibilité de la souche bactériennevis-à-vis des concentrations critiquessupérieures et inférieures desdifférents antibiotiques ou uniquementvis-à-vis des concentrations critiquesinférieures.
Autres techniques de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Technique en milieu gélosé : le Etest® La détermination précise de la CMI par
la méthode de référence estdifficilement utilisable en pratiquequotidienne. La commercialisationd'une technique rapide et simple, leEtest (AB Biodisk), permet à unlaboratoire de diagnostic de mesurer laCMI.
Autres techniques de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Technique en milieu gélosé : le Etest® Autres techniques de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques
Réalisation d'un antibiogramme Ä
respect de conditions techniques qui
sont parfois incomplètement et
insuffisamment respectées.
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques
Culture pure et identifiée. Un antibiogramme réalisé de manière
non standardisée et sur un mélange de
germes non identifiés est dépourvu de
sens
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques
Vérification validité technique au moins1 fois/mois
o sensibilité des souches de référence
ídiamètres des zones d'inhibitionconformes valeurs publiées par Comité Antibiogramme.
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques :
Les bactéries appartenant aux genresH aemophilus, Brucella, P asteurella,Campylobacter , Nocardia... requièrentl'emploi de milieux et de conditions de
culture adaptés à leurs exigences decroissance.
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques :
Les espèces des genres Chlamydia,Chlamydophila, Rickettsia... sont desparasites intracellulaires obligatoires
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques :
L'antibiogramme ne permet pas dedéterminer la sensibilité desmycobactéries à croissance lente
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques :
Les techniques de diffusion appliquéesaux anaérobies ont été critiquées car elles ne peuvent être appliquées ni àtoutes les espèces ni à tous les
antibiotiques. Et elles sont peureproductibles
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites techniques :
La technique des disques s'appliquemal à l'évaluation de la sensibilité à desmolécules qui diffusent peu dans lagélose (toute résistance à confirmer
par mesure CMI) :o Polymyxines ou des Glycopeptides
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Limites dans l'interprétation desrésultats
Incertitude sur l'étiologie de l'infection Évaluation de l'intensité d'action d'un
antibiotique
L'antibiogramme ne renseigne que sur l'activité bactériostatique
Limites de l¶antibiogramme
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L'ANTIBIOGRAMME
Synergies ou antagonismes :o tests complémentaires
o respect des lois de Jawetz
Association d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMME
Utilisation d'une association d'antibiotiquesest justifiée dans quatre cas :
o Élargir le spectre d'activité dans les casd'infections à germes multiples.
o Traiter en urgence une infection grave nondiagnostiquée.
o Prévenir la sélection de mutants résistantslors des traitements de longue durée.
o Obtention d'un effet synergique
Association d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMME
Lois de Jawetz et Gunisson Association de deux antibiotiques
bactéricides peut produire un effetsynergique Association de deux antibiotiques
bactériostatiques donne généralement un
effet additif Association d¶un antibiotique bactéricide etd¶un antibiotique bactériostatique peutdonner un effet antagoniste.
Association d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques
L'ANTIBIOGRAMME
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L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques
L'ANTIBIOGRAMME
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L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques
L'ANTIBIOGRAMME
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L'ANTIBIOGRAMMEAssociation d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMME
Comme toutes lois, celles de Jawetz etGunisson présentent des exceptions :
Les associations triméthoprime-sulfamide sont synergiques alors que
ces deux antibiotiques sontbactériostatiques.
Association d¶antibiotiques
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L'ANTIBIOGRAMME
Comme toutes lois, celles de Jawetz etGunisson présentent des exceptions :
Les associations macrolide-chloramphénicol ou macrolide-
lincosamide ou macrolide-macrolidesont antagonistes alors que tous cesantibiotiques sont bactériostatiques.
Association d¶antibiotiques
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d¶évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des bêta-lactamaseso Méthode acidimétrique
í Acidification : production d'acidepénicilloïque ou céphalosporoïqueíDétection : changement coloration
indicateur de pH (rouge de phénol ou
pourpre de bromocrésol)íBandelettes ou des disques imprégnés
de pénicilline G ou de céphalosporine etd'un indicateur de pH
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d¶évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des bêta-lactamases
o Méthode iodométrique
íAcide pénicilloïque réduit iode
íDétection : décoloration mélangeiode - amidon.
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d¶évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des bêta-lactamaseso Méthode chromogénique
íCéphalosporine change decoloration après hydrolyse
íDétection : nitrocéfine, après action
d'une bêta-lactamase vire du jauneau rouge (disques de papier imprégnés de nitrocéfine)
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie
Effet bactériostatique souvent suffisantpour traiter une infection :
o inhibition multiplication bactérienne
Ä destruction agent infectieux par système immunitaire
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie
Effet bactériostatique souvent suffisantpour traiter une infection :o Infections graves ou touchant des
individus immunodéprimés :
traitement bactéricide.
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie
o Bactéricidie : concentration minimale
bactéricide (CMB)o CMB = plus faible concentration
d'antibiotique capable de détruire 99,99%
d'un inoculum bactérien
o 99,99 % = choix arbitraire
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie CMB déterminée après recherche CMI en
milieu liquide (technique de macrodilution oude microdilution) :o Milieu gélosé dépourvu d'antibiotiqueo Quantité définie de tous les tubes ne
présentant pas de croissance visibleo Dénombrement bactéries survivanteso Comparaison avec tube témoin sans
antibiotique
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie Epreuves bactéricidie dépendent de 2
facteurso Facteurs biologiques :
íBactéries persistantes :Les bactéries persistantes, bactéries en
phase stationnaire ou en phase demultiplication lente, échappent à l'actiondes antibiotiques actifs sur labiosynthèse du peptidoglycane.
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie dépendent de 2
facteurso Facteurs biologiques :
í Effet paradoxal :augmentation proportion de bactériessurvivantes lorsque concentration enantibiotique augmente au-delà de laCMB.
í Phénomène, observé principalementavec les bêta-lactamines (mal comprismais complique l'interprétation du test)
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie
dépendent de 2 facteurs :o Facteurs biologiques :
íBactéries tolérantes échappent àaction létale antibiotique alors quela croissance est inhibée et que laCMI n'est pas modifiée.
íLa tolérance : rapport CMB / CMI égal ou supérieur à 32.
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Épreuves de bactéricidie Les épreuves de bactéricidie dépendent de 2
facteurs :
o
Facteurs biologiques :o Facteurs techniques
í standardisation de l'inoculum,í précision des volumes transférésí composition des milieux utilisés,í transfert d'antibiotique particulièrement
important lorsque l'épreuve est faite sur des bactéries ayant une CMI élevée...
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirs bactériostatique etbactéricide du sérum
o Sérum (ou tout autre liquide organique) d'unmalade recevant une antibiothérapie :pouvoir bactériostatique ou bactéricide sur lasouche responsable de l'infection
o Dilution maximale du sérum capable d'inhiber la croissance du germe après 18 heuresd'incubation= activité bactériostatique.
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirsbactériostatique et bactéricide du
sérum Numération survivants dans les tubes
où aucune culture n'est visible permet
de déterminer le pouvoir bactéricide(survivants = 0,01 %).
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirs
bactériostatique et bactéricide du
sérum Détermination pouvoirs
bactériostatique et bactéricide du
sérum = examen de laboratoirepermettant d'affirmer traitement correct
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirs bactériostatique etbactéricide du sérum
Deux prélèvements de sérum
Tenir compte pharmacocinétique de l'antibiotiqueutilisé
o Premier prélèvement : au moment du pic sérique
í soit 45 à 60 minutes après une injection
intramusculaire,í 15 minutes après une injection intraveineuse,
í 90 minutes après une administration orale (cestemps ont été définis pour l'espèce humaine)
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirsbactériostatique et bactéricide du
sérum Deux prélèvements de sérum sont
nécessaires.o Second prélèvement : au plus bas
des concentrations sériques (vallées)= juste avant une nouvelleadministration d'antibiotique.
Autres méthodes d¶évaluation de
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Autres méthodes d évaluation del¶activité des antibiotiques
Recherche des pouvoirs bactériostatique etbactéricide du sérum
Effet bactériostatique suffisant = la plusgrande dilution inhibitrice =o 1/32 pour les pics
o 1/2 pour les vallées.
Effet bactéricide satisfaisant (99,99 %) =o 1/32 pour les pics
o 1/8 pour les vallées
C l i
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Conclusion
Les difficultés techniques et les limitesde validité ne doivent pas faireconclure à l'inutilité de l'antibiogramme
Les laboratoires doivent rendre, le plusrapidement possible, des résultats plusexplicites et plus sélectifs (sélectionner les antibiotiques utilisables sur le
terrain, ne pas rendre des résultats nonadaptés au cas clinique...)
C l i
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Conclusion Les cliniciens doivent interpréter les
résultats Une indication de résistance, doit inciter à ne
pas utiliser l'antibiotique Mais une indication de sensibilité doit
conduire à une réflexion : l'antibiotique actif in vitro a-t-il une chance d'être efficace invivo compte tenu du contexte clinique ?
L'antibiogramme n'est qu'un des élémentspermettant d'instaurer une antibiothérapie
D'autres considérations cliniques,pharmacologiques, toxicologiques,financières... participent au choix dutraitement.
C l i
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Conclusion
A l'occasion de l'analysebactériologique, un dialogue doits'instaurer entre le praticien et le
responsable du laboratoire Trop souvent, l'un ou l'autre des deux
participants attribue à son interlocuteur
des connaissances qu'il n'a pasobligatoirement
Lecture interprétative de
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Lecture interprétative del¶antibiogramme
Aminosides (Entérobactéries)o Phénotypes
í gentamicine résistant, tobramycine sensible,nétilmicine résistant et amikacine sensible
í gentamicine sensible, tobramycine résistant,nétilmicine résistant et amikacine sensible
í gentamicine sensible, tobramycine sensible,nétilmicine résistant et amikacine résistant
í
gentamicine sensible, tobramycine résistant,nétilmicine sensible et amikacine résistanto doivent conduire à vérifier l'identification et
l'antibiogramme car de tels phénotypes sontimprobables.
Lecture interprétative de
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Lecture interprétative del¶antibiogramme
Aminosides (entérocoques, S treptococcus sp. àl'exception de S treptococcus pneumoniae )o Seuls des disques fortement chargés en
streptomycine, kanamycine et gentamicine
doivent être utilisés pour les entérocoques etpour les streptocoques car ces bactéries sontnaturellement résistantes à bas niveau vis-à-visdes aminosides.
o Ils permettent de détecter une résistance acquise
de haut niveau qui abolit l'effet synergiquebactéricide de l'association des aminosidesconcernés avec les pénicillines. Les autresaminosides restent utilisables en association.
Lecture interprétative de
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Lecture interprétative del¶antibiogramme
Aminosides (entérocoques, S treptococcussp. à l'exception de S treptococcus
pneumoniae )o Diamètre supérieur ou égal à 14 mm pour
la streptomycine ou la kanamycine,diamètre supérieur ou égal à 17 mm pour la gentamicine : synergie possible avec lespénicillines en cas de sensibilité à cesantibiotiques.
o Diamètre inférieur à 12 mm pour lastreptomycine : la streptomycine ne peutêtre utilisée.
Lecture interprétative de
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ecture interprétative del¶antibiogramme
Aminosides (entérocoques, S treptococcussp. à l'exception de S treptococcus
pneumoniae )
o Diamètre inférieur à 10 mm pour lakanamycine : la kanamycine, l'amikacineet l'isépamicine ne peuvent être utilisés.
o Diamètre inférieur à 11 mm pour la
gentamicine : gentamicine, kanamycine,tobramycine, dibékacine, amikacine,sisomicine, nétilmicine et isépamicine nepeuvent être utilisés.
Lecture interprétative de
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pl¶antibiogramme
Aminosides (P rovidencia sp.)
o Les résultats gentamicine sensible,
tobramycine sensible et nétilmicine
sensible doivent être interprétés
comme intermédiaires (résistancenaturelle).
Lecture interprétative de
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pl¶antibiogramme
Ampicilline (Entérobactéries)o Interprétation valable pour laBacampicilline, la Métampicilline et laPivampicilline.
Amoxycilline + acide clavulaniqueo L'observation d'un phénotype
amoxicilline sensible et amoxycilline
+ acide clavulanique résistant révèleune mauvaise conservation desdisques d'antibiotique.
Lecture interprétative de
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pl¶antibiogramme
Ampicilline (Entérocoques)o La sensibilité des entérocoques aux
pénicillines est appréciée à l'aide d'undisque d'ampicilline chargé à 10 µg.
o Pour E nterococcus faecalis,l'interprétation est valable pour lapénicilline G, l'amoxicilline, la pipéracillineet l'imipénème.
o Le traitement des infections sévères dues
à des souches deE
nterococcus sp.ampicilline S/I nécessite des dosesélevées d'une pénicilline associée à unaminoglycoside pour obtenir une activitébactéricide.
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pl¶antibiogramme
Céfalotine (Entérobactéries)
o Réponse valable pour toutes lescéphalosporines de première génération.
Chloramphénicol ( Acinetobacter sp.,entérobactéries, entérocoques, P seudomonas
aeruginosa, staphylocoques , streptocoques
S tenotrophomonas maltophilia)o Réponse valable pour le thiamphénicol
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pl¶antibiogramme
Clindamycine (anaérobies)
o La lecture doit être effectuée après 48heures d'incubation car après 24heures d'incubation les souchespeuvent apparaître faussementsensibles.
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pl¶antibiogramme
Colistine
o Réponse valable pour les autrespolymyxines.
Colistine (P roteus sp., P rovidencia sp.,S erratia sp.)
o Phénotype colistine sensible
improbable : vérifier identification etantibiogramme
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pl¶antibiogramme
Érythromycine (Entérocoques,Staphylocoques, Streptocoques)
o Réponse valable pour azithromycine,clarithromycine
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pl¶antibiogramme
Gentamicine (Staphylocoques)
o Interprétation valable pour lanétilmicine.
o Souches résistantes à la gentamicine= résistantes à l'ensemble desaminoglycosides sauf streptomycine
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pl¶antibiogramme
Kanamycine (Entérobactéries)
o Réponse valable pour la néomycine,la framycétine et la paromomycine.
Kanamycine (Staphylocoques)
o Interprétation valable pour lanéomycine, la framycétine, la
paromomycine, l'amikacine etl'isépamicine.
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l¶antibiogramme
Métronidazole (anaérobies)
o Réponse valable pour l'ornidazole.Certaines souches apparaissentfaussement résistantes sil'anaérobiose n'est pas correcte.
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l¶antibiogramme
Oxacilline (Staphylocoques)o Les souches résistantes à l'oxacilline
(résistance homogène ou résistancehétérogène) = résistantesí toutes les pénicillines (associées ou
non à un inhibiteur des bêta-lactamases),
í céphalosporinesí carbapénèmes, même s'il existe une
sensibilité apparente in vitro.
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l¶antibiogramme
Oxacilline (Staphylocoques)
o Les souches pénicillines résistantes -oxacilline sensibles sont sensibles
aux associations pénicilline -inhibiteur de bêta-lactamase, auxcéphalosporines et aux
carbapénèmes.o Il n'est pas utile de tester ces
molécules en routine.
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l¶antibiogramme
Oxacilline (Staphylocoques)o Le test doit être effectué dans des
conditions permettant la détection de
la résistance hétérogène : milieu deMueller-Hinton hypersalé incubé à37 °C ou milieu de Mueller-Hintonincubé à 30 °C.
o La résistance hétérogène se traduitpar la présence de microcoloniesdans la zone d'inhibition.
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l¶antibiogramme
PénicillineG (Staphylocoques)
o Résistance à la pénicilline G par production de pénicillinase : grosses
colonies en bordure de la zoned'inhibition et éventuelle présence decolonies "squatters" dans la zone
d'inhibition
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l¶antibiogramme
PénicillineG (Staphylocoques)
o Réponse "résistant" est valable pour la pénicilline G et pour les autres
pénicillines sensibles auxpénicillinases
ípénicilline V,
íaminopénicillines,ícarboxypénicillines,
íuréidopénicillines
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PénicillineG (Staphylocoques)
o Seule la pénicilline G doit être testée
íSi diamètre correspond à unesouche sensible, absence deproduction de pénicillinase devrait
être recherchée.
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PénicillineG (Streptocoques sauf S treptococcus pneumoniae)
o Sensibilité des streptocoques à la
pénicillineG
est appréciée avec undisque d'oxacilline chargé à 5 µg.
o Si diamètre à 21 mm, souche =sensible à la pénicilline G
o Interprétation valable pour les autresbêta-lactamines incluant lesStreptocoques dans leur spectre.
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PénicillineG (Streptocoques sauf S treptococcus pneumoniae)
o Si le diamètre < à 21 mm souche =
résistante ou de sensibilitéintermédiaire à la pénicilline G.
o Diamètre < 21 mm, déterminer CMI
í
ampicilline,íamoxicilline
íou céfotaxime.
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Quinolone de première génération(Entérobactéries)
o Réponse valable pour toutes les
quinolones de première génération. Spiramycine (Staphylocoques)
o Interprétation valable pour la
josamycine et la midécamycine.
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Tétracycline (Entérobactéries,Entérocoques, P seudomonas
aeruginosa, Staphylocoques,
Streptocoques)o Réponse valable pour oxytétracycline
et doxycycline.
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Tétracyclines (Coques à Gram positif)
o Phénotype tétracycline sensible et
minocycline résistant = improbable
donc vérifier identification et
antibiogramme
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