EVALUACIÓN DE LA EFICACIA CLÍNICA, … · Pruebas de identificación de cocos Gram positivos ......

Título del Proyecto

CAROL LAIDS FLORES ALLENDE

La Serena, Chile

Octubre de 2016

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela de Medicina Veterinaria

EVALUACIÓN DE LA EFICACIA CLÍNICA, ANTIBACTERIANA

Y ANTIFÚNGICA DE CU+OTIC® EN EL TRATAMIENTO DE LA

OTITIS EXTERNA EN CANINOS

Afecciones inflamatorias

del oído Hallazgo común

(Nelson y Couto, 2000)

Otitis externa

+Importancia

(Frecuencia)

Asociada abacterias ylevaduras

Amplio rango de fármacos

óticos

Tx, resistencia bacteriana

(Cole et al., 1998; Taibo, 2003)

(Bonagura y Twedt, 2010)

Cu+otic®

Alternativa + natural

Estudios similares:

Lozina et al, 2010

Oxido de cobre

Oxido de zinc

Matico

Caléndula

Productos similares: Matipet

IntroducciónIntroducción

Phisio

Antiolor

Objetivo General

Evaluar la eficacia del producto Cu+otic® en

el tratamiento de las Otitis externas

(bacteriana, micótica o mixta) en caninos en

un periodo de 14 días.

Objetivos Específicos

Estimar el score clínico de los parámetros (inflamación,

eritema, dolor y secreción).

Determinar la eficacia clínica de Cu+otic® en un periodo de

14 días.

Identificar los microrganismos presentes en las muestras

óticas a través de cultivos.

Estimar el score microbiológico de los microorganismos

presentes en las muestras óticas, mediante citología.

Determinar la acción Antimicrobiana y Antifúngica de

Cu+otic® a través de citología.

Determinar la acción Antimicrobiana de Cu+otic® a través

de antibiograma.

Materiales y métodos

Área y periodo de investigación Selección de pacientes 5 signos Otitis externa

Martin et al., 2001

Criterios de exclusión

• ATB, ATM, GC: SIS o TP/

últimos 30 días.

• Otitis media/ interna (inclinación

de cabeza).

• Otodectes cynotis.

• Ruptura membrana timpánica.

• Cuerpo extraño, neoplasia.

Engelen et al., 2010

Criterios de inclusión

• O.E clínica unilateral o

bilateral.

• 5 S.C (+)

• Infección bacteriana o

micótica confirmada

por citología.

Enero-Mayo 2016


Parámetros

clínicos

Normal Leve Moderado Severo

Inflamación 0 1 2 3

Dolor 0 1 2 3

Eritema 0 1 2 3

Secreción 0 1 2 3

Tabla I. Graduación de la severidad parámetros clínicos

oído (Score clínico). Tomada de Rigaut et al., 2011.

Nombre paciente:

N° de muestra:

Raza (Oreja, pelaje):

Sexo:

Edad:

Otitis

Oído(s) afectado(s):

Grados (1-3):

Tipo de secreción:

Seguimiento D0 D7 D14

Grado de otitis Inflamación:

Eritema:

Dolor:

Secreción:

Inflamación:

Eritema:

Dolor:

Secreción:

Inflamación:

Eritema:

Dolor:

Secreción:

N° de fotografía

Ficha clínica para registro clínico y fotográfico del paciente

Registro de pacientes

• Autorización propietario

• Registro ficha clínica

• Registro fotográfico


Toma de muestras

Grupos experimentales

• Cultivo: Bacteriano y fúngico

• Citologia

• Torulas medio Stuart

• Otitis bilateral: 2 casos

Tratamientos

Grupo

control

Grupo

Tratamiento

Materiales y métodosAnálisis de las muestras

• Laboratorio de microbiología de la Universidad Pedro de Valdivia (UPV)

• Laboratorio Linsan S.A.

Cultivo de las muestras

Identificación de las colonias bacterianas y levaduras

Pruebas de identificación de cocos Gram positivos

Pruebas de identificación de bacilos Gram negativos

• Colonia bacteriana: Observación morfológica agar,

• tinción de Gram (Observación microscópica)

• Levadura: Observación macro y microscópica

(Morfología)

Materiales y métodosAnálisis de las muestras

Pruebas de identificación de cocos Gram positivos

Pruebas de identificación de bacilos Gram negativos

(+)

(-)

Pseudomas aeuruginosa

G. Escherichia

G. Proteus

E.coli

P. mirabilis

S. intermedius

Materiales y métodosCitología

Organismo Número por campo de aceite Score microbiológico

de inmersión (x1,000)

0 0

Levaduras (Malassezia) 1-2 1

3-8 2

>8 3

0-2 0

Cocos 3-8 1

9-40 2

>40 3

0-2 0

Bacilos 3-8 1

9-40 2

>40 3100x (x1,000) con aceite de inmersión

Tabla II. Escala semicuantitativa para conteo bacterial y fúngico registrado

en la citología de muestras de oído. Tomada de Rigaut et al., 2011.

Materiales y métodosAntibiograma Cu+otic®

Método de Kirby-Bauer modificado

Método adaptado de (Baydar et al, 2004)


Análisis estadísticoGrahPad 7 Prism Inc y Valor p (significancia

estadística) : p<0.05.

Comparabilidad entre los grupos día 0

Variables cuantitativas: Prueba

T de Student (Media ± D.S)

Variables cualitativas: Test

exacto de Fisher

Parámetros clínicos Score clínico y Score clínico total: Prueba T de Student

Disminución de 1 grado o

más entre pre y post Tx

Disminución 4 grados o

más entre pre y post Tx

Eficacia clínica Engelen, 2010

Conteo citológico

Score microbiológico: Prueba T de Student

Rigaut et al., 2011

El score microbiológico debe ser 1 o menos

al termino del estudio

Eficacia

microbiológica

Resultados y Discusión

Muestra del estudio

Sexo: 50 % Macho, 50 % Hembra

Edad: <1 año (12,5%), 1-7 años (62,5%) y > 7 años (25%)

45,8 %

20,8 %

12,5 %

8,3 %

4,2 % 4,2 % 4,2 %

Razas

Mestizo Poodle YorkshireLabrador Retrivers Cocker Spaniel SchanauzerPastor Alemán

33,3

66,7

79,2

20,8

76

24 25

75

0

10

20

30

40

50

60

70

80

90

Localización

otitis

Pabellón

auricular

Tipo de otitis Historia de

otitis

Po

rcen

taje

%

Unilateral Bilateral

Pendulosa Erecta

Eritematosa-ceruminosa Purulenta

Aguda Crónica

• 58 % Hembra ( Fernandes junior et al., 2006), Predisposición inexistente (August, 1988; Carlotti, 1991).

• 5-8 años mayor predisposición (August 1988; Carlotti, 1991).

• Cocker Spaniel (Sotomayor, 2005).

• Factores predisponentes son bilaterales (Carlotti, 1997; Huang y Huang, 1999).

• Secreción ceruminosa asociada a Malassezia pachydermatis (Martin et al., 2001).

• Control inadecuado causa 1°, daño permanente C.A.E (Mendelsohn, 2010).

Resultados y DiscusiónComparabilidad de los grupos al día 0

Parámetro Control (n: 20) Tratamiento (n: 20) Valor P

Edad (Años): Media ± D.S 5.85 ± 4.58 4.75 ± 2.22 0.3399

Sexo

Macho 9 11

0.7524

Hembra 11 9

Pabellón auricular

Pendulosa 14 17

0.4506

Erecta 6 3

Historia otitis

Aguda 4 5

1.0000

Crónica 16 15

Localización otitis

Unilateral 6 2

0.2351

Bilateral 14 18

Tipo de otitis

Eritematosa/ceruminosa 15 16

1.0000

Purulenta 5 4

Score clínico total: Media ± D.S 8.25 ± 1.16 8.9 ± 1.83 0.1885

Tabla III. Características basales de los perros (Día 0)

Resultados y DiscusiónParámetro de inflamación

2,2

1,95 1,85

2,35

1,35

0,85

0

0,5

1

1,5

2

2,5

Día 0 Día 7 Día 14

Sco

re C

lín

ico

Score clínico: Inflamación

Grupo control Grupro tratamiento

2,052 1,9

2,25

1,35

0,7

0

0,5

1

1,5

2

2,5


Sco

re C

lín

ico

Score clínico: Eritema


Parámetro de eritema

Pesibut (Moreno et al., 2014).

Degranulación de los mastocitos (reducc.

secreción de histamina) (Marone et al.,

1986).

Salicilato de cobre (Auer et al., 1990).

C. officinalis: Act. citoquinas

proinflamatorias, inhibición de la expresión

de Cox- 2, actividad antioxidante (radicales

libres) (Preethi y Kuttan ,2009).

B. globosa: Actividad antioxidante y

proliferación de fibroblastos in vitro

(Letelier et al., 2012).


Parámetro de dolor

1,91,65 1,8

2,05

1,45

0,95

0

0,5

1

1,5

2

2,5


Sco

re C

lín

ico

Score clínico: Dolor


Actividad antinociceptiva y antiinflamatoria de extractos de Calendula officinalis, por gran contenido de flavonoides

y glucósidos de flavonoides, causan sedación, miorelajación, analgesia y efectos antinociceptivos (sistémico)

(Farahpour, 2014).

Actividad antinociceptiva dosis-dependiente de extractos de Buddleja globosa, metabolitos asociados flavonoide y

verbascoside (Backhouse et al., 2008).


Parámetro de secreción

2,151,8

1,95

2,25

1,7

1,3

0

0,5

1

1,5

2

2,5

Día 0 Día 7 Día 14S

core

Clí

nic

o

Score clínico: Secreción


Score clínico total

Tabla V. Score clínicos totales determinados en el periodo de estudio

8,25 7,4 7,5

8,9

5,85

3,8

0

2

4

6

8

10


Sco

re C

lín

ico

Score clínico total


Resultados y DiscusiónAislamiento bacteriológico y fúngico

44,7 % (38)

43,5 % (37)

5,9 % (5)4,7 % (4) 1,2 % (1)

Microorganismos aislados: 85 (100%)

Staphylococcus intermedius Malassezia pachydermatis

Proteus mirabilis Escherichia coli

Pseudomonas aeuruginosa

79,2% (38)

10,4% (5)

8,3% (4) 2,1% (1)

Aislamientos Bacterianos: 48 (100%)

Staphylococcus intermedius Proteus mirabilis

Escherichia coli Pseudomonas aeuruginosa

Microbiota normal del oído canino (Oliveira et

al, 2008).

Alta aislación S. Intermedius (Engelen et al.,

2010; Oliveira et al., 2008; Rigaut et al.,

2011).

S. pseudointermedius más comúnmente aislada

de animales domésticos y no S. intermedius

(Wesse, 2013).

Staphylococcus coagulasa negativa (Lilenbaum

et al., 2000)

Candida albicans (Nobre et al., 2001; Oliveira

et al., 2008)


Aislamiento bacteriológico y fúngico

75 % (30)

20 % (8)

5 % (2)

Tipos de aislamientos

Malassezia pachydermatis + Staphylococcus intermedius

Malassezia pachydermatis + 2 o más bacterias

Proteus mirabilis

• La asociación Staphylococcus intermedius y Malassezia pachydermatis , se describe de igual

manera en los estudios realizados por Lozina et al. (2010) y Oliveira et al. (2008).

• Relación de simbiosis entre ambos microorganismos.


Eficacia microbiológica sobre Cocos Gram positivos

2,65 2,5 2,75

2,61

1,83

0,94

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

Día 0 Día 7 Día 14Sco

re m

icro

bio

logic

o

Score microbiológico: Cocos


Eficacia microbiológica sobre Bacilos Gram negativos

22

2,62,62,2

2,6

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

Día 0 Día 7 Día 14Sco

re m

icro

bio

log

ico

Score microbiológico: Bacilos


Cobre: Mec. homeostasis cobre,

propiedades resistencia metal (Kappes et al.,

2012) y C. albicans.

Nanopartículas oxido de cobre: in vitro S.

aureus (Kumar y Rani, 2014).

Nanopartículas óxido de zinc: in vitro S.

aureus, P. aeruginosa y E. coli (Yousef y

Danial, 2012).

Calendula officinalis : inhibo S. intermedius,

no Streptococcus spp., P. aeuruginosa ni P.

mirabilis (Granados, 2015).

Matico (Buddleja globosa): angarósido A es

un producto activo contra S. aureus (ISP,

2007).


Eficacia microbiológica sobre Malassezia

2,11

1,84

2,11

1,89

1,22

0,72

0

0,5

1

1,5

2

2,5


Sco

re m

icro

bio

logic

oScore microbiológico: Malassezia


• Nanopartículas de óxido de zinc como de óxido de cobre tienen propiedades antimicóticas sobre

Candida albicans in vitro (Karimiyan et al., 2015).

• Zn4.5 otic ( Miller et al., 2011).

• Calendula officinalis: Gel de aceite esenciales, gran acción antimicótica contra C. albicans y M.

pachydermatis (Ketzis et al., 2006).

Resultados y DiscusiónRegistros fotográficos

Paciente 22, oreja derecha, día 14Paciente 22, oreja derecha, día 0

Paciente 20, oreja izquierda, día 14Paciente 20, oreja izquierda, día 0

Grupo

control

Grupo

tratamiento

Staphylococcus intermedius

+Malassezia pachydermatis

Resultados y DiscusiónRegistros fotográficos

Paciente 23, oreja derecha, día 14Paciente 23, oreja derecha, día 0

Paciente 2, oreja izquierda, día 14Paciente 2, oreja izquierda, día 0

Grupo

control

Grupo

tratamiento

Bacilos Gram negativos

(Escherichia coli y Proteus mirabilis)

Resultados y DiscusiónEficacia antibacteriana in vitro de Cu+otic® en el periodo de estudio

Antibiograma

Proteus mirabilis

Antibiograma

Escherichia coli

Antibiograma

Pseudomonas aeruginosa

Antibiograma

Staphylococcus

intermedius

No hay halo

de inhibición

No hay halo

de inhibición

No hay halo

de inhibición

Si hay halo de

inhibición 35 mm

Conclusiones

• El score clínico de los parámetros de inflamación, eritema, dolor y secreción

son estimables y están directamente relacionados con la eficacia clínica.

• Cu+otic® presenta eficacia clínica contra los parámetros clínicos de

inflamación, eritema, dolor y cantidad de secreción presentes en las otitis

externas de caninos en un periodo de 14 días.

• Los microorganismos aislados en este estudio fueron Staphylococcus

intermedius, Malassezia pachydermatis, Proteus mirabilis, Escherichia coli y

Pseudomonas aeruginosa.

• El score microbiológico de Malassezia, Cocos y Bacilos son estimables y están

directamente relacionados con la eficacia antibacteriana y antimicótica.

Conclusiones

• Cu+otic® es un tratamiento eficaz contra las otitis externas de tipo bacteriana,

micótica o mixta en caninos, en los cuales se encuentren actuando Staphylococcus

intermedius y Malassezia pachydermatis en un periodo de 14 días.

• Cu+otic® no es un tratamiento eficaz contra otitis externas bacterianas en

caninos, en las cuales se encuentren actuando bacterias Gram negativas como

Proteus mirabilis, Pseudomonas aeuruginosa y Escherichia coli en un periodo de 14

días.

• Cu+otic® tiene un efecto antibacteriano in vitro sobre Staphylococcus intermedius.

Recomendaciones

• Se deben realizar estudios in vivo e in vitro sobre la eficacia antibacteriana

de Cu+otic® sobre otras bacterias Gram positivas.

• Se deben realizar estudios in vivo sobre la eficacia antimicótica de

Cu+otic® sobre otros agentes fúngicos, como es Candida albicans.

• Se debe realizar un estudio para comprobar la eficacia residual de

Cu+otic®.

Título del Proyecto

CAROL LAIDS FLORES ALLENDE

La Serena, Chile

Octubre de 2016

Facultad de Ciencias Agropecuarias

Escuela de Medicina Veterinaria

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Y ANTIFÚNGICA DE CU+OTIC® EN EL TRATAMIENTO DE

LA OTITIS EXTERNA EN CANINOS

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