Estudios sobre Neosporosis bovina en Uruguayºblicos/INIA Tacuarembó...Histopatología, IHQ, IFI,...
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Estudios sobre Neosporosis bovina en Uruguay
Dra. Cristina Easton – Dra. Carolina Briano – Dra. Florencia Pieruccioni
VI Jornadas de actualización en salud animal de bovinos
27-28 de setiembre 2018, Tacuarembó
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Estudio de casos de aborto Período: 1999 – Agosto 2018
Total de fetos estudiados 1651
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Clasificación por etiologías1999 - 2018
DILAVE “Miguel C. Rubino
Aborto infeccioso8%
Brucelosis2%
Campylobacteriosis6%
Leptospirosis17%
Neosporosis26%
S/d36%
Distocia2%
Viral3%
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7177
69
87 8377 72 75 80
8680
7178 74 70 65
8170
5563
29 2331
13 17 23 28 25 20 14 2029 22 26 30 35
1930
4538
0
20
40
60
80
100
120
%
Años
% Neospora
% Otrasetiologías
Porcentaje de casos de Neospora caninum por año
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• Neospora caninum:• 1989 - Protozoario – Apicomplexa (Thilsted y Dubey, 1989)
• Es la mayor causa de abortos (Anderson et al., 1991, Barr et al., 1991a)
• Grandes pérdidas económicas a nivel mundial se estimaron enmás de mil millones de dólares al año (Reichel et al., 2013)
– Abortos– Reducción de producción de leche– Menor ganancia de peso postdestete – Pobre calidad de la media res
NEOSPOROSIS
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NEOSPOROSIS
• 1997 - 1ª referencia caninos• IFI - 20 % de 414 perros de estancias (Barber ,1997)
• 1999 - DILAVE:Caninos:
• Histopatología, IHQ, IFI, ELISA• Reproducción experimental en ratones (ELISA e IHQ)
Bovinos: • Histopatología, IHQ, IFI, ELISA
• 2006:• Prevalencia:
– rodeo de carne: 14% (Bañales et al. Veterinary Parasitology, 2006)
– rodeo de leche: 22% (Piaggio, J. Tesis de Maestría, 2006)
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Materiales y Métodos• Necropsia – Toma de muestras• Histopatología− Hígado, riñón, corazón, SNC, timo, pulmón, piel,
ojo, lengua, bazo
− Fijación en formol bufferado al 10%
− Inclusión en parafina
− Cortes a 4 micras
− Coloración HE
• Inmunohistoquímica
DILAVE Montevideo – DILAVE 33 – DILAVETacuarembó – DILAVE Paysandú
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Materiales y Métodos
• Métodos:– Visualización
– Campo oscuro
– IFD
– Aislamiento
Aerobios
Brucella
Campylobacter
Leptospira
Salmonella
Trichomona foetus Anaerobios (agar sangre en medio anaerobio)
Bacteriología
Dra. Nora Negrín – Dra. Ximena Salaberry – Dra. Alejandra Suanes
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Materiales y Métodos
Serología
• Suero materno:– IFAT- Neospora caninum– ELISA -Neospora caninum– Rosa de Bengala – Brucella sp.– MAT – Leptospira sp.
• Fluidos fetales: – IFAT - Neospora caninum– Rosa de Bengala – Brucella sp.– MAT – Leptospira sp.
Dra. Nora Negrín – Dra. Ximena Salaberry – Dra. Alejandra Suanes – Dra.Mariela Silva - Dr. Pedro Bañales – Dr. Leandro Fernández
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TÉCNICAS DE DIAGNÓSTICONeospora caninum
• Histopatología HE IHQ
• Serología (IFI y ELISA)Animales adultosFetos
• PCR
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Histopatología - SNCFocos de necrosis - H. E
400 x
Quiste
H.E. 1000 X
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Histopatología Miocarditis mononuclear
H.E 400 x
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Inmunohistoquímica - SNC
400 x
1000 x
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NEOSPOROSIS BOVINA
Abortos en forma aislada Esporádicos
ENDÉMICA
URU
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Aborto epidémicoMAYO 2017
Departamento de PatologíaDILAVE “Miguel C. Rubino”
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Motivo de consulta
• Animales estabulados• Alta dotación• Abortos:
– 35%– Entre 4 y 7 meses de
gestación– Todos en el mes de
mayo
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Focos de necrosisSNC - Miocardio
400 x 400 X
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400 x
HígadoPulmón
400 x
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INMUNOHISTOQUÍMICA
SNC 1000 x
Hígado 400 x
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Resultados
• Histopatología– Lesiones de etiología infecciosa
compatibles con Neosporosis– IHQ positiva
• IFI Neospora– Sueros fetales:
• 5/11 Ac contra Neospora – Suero vacas abortadas:
• 17/19 Ac contra Neospora• ELISA Neospora
– 360 sueros de vacas abortadas: • 82% Positivas a Neospora• 11% Dudoso a Neospora• 9% Negativo
• Órganos fetales - Negativos • Brucelosis• Leptospirosis• Listeriosis ( DILAVE PDU)• Campylobacteriosis• IBR (Lab. Virología - DILAVE)
• Sueros maternos- Negativos• Brucelosis• Leptospirosis • BVD (Lab. Biología Molecular Salto)
• Toxicología - Ración• DON Negativo• Zeralenona niveles aceptables
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Investigar
• Por qué?• Cómo se soluciona?• Cómo se previene?
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• Implementar una PCR anidada para ladetección de Neospora caninum
• Estudiar la población genética mediante elestudio de microsatélites
• Análisis de relación genética entre cepasdiagnosticadas y las reportadas a nivelinternacional
• Investigar el patrón geográfico y espaciotemporal y determinar su asociación con lossistemas productivos y tipo de brote.
PCR
Tesis de doctorado de la Dra. Carolina Briano“Caracterización genética de Neospora caninum en fetos
bovinos abortados en Uruguay”
250
MM - + C- C+
300200100
1 2 3 4 5
Producto esperado 250 pb
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• Puesta a punto del PCR diagnóstico de rutina en
DILAVE Treinta y Tres
• Capacitación en la Universidad Complutense de Madrid
(Dr. Luis Ortega Mora – Dr. Javier Regidor Cerrillo)
• Estudio de la variabilidad genética de la Neospora
caninum:
PCR
9 Microsatélites45 Fetos
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ELISA – Neospora caninum
• Entrenamiento de la Dra. Florencia Pieruccioni en la Universidad Complutense
de Madrid
• Puesta a punto en el DILAVE Montevideo
• Procesamiento de muestras del caso epidémico
• ELISA IN HOUSE
•Desarrollado en la Universidad Complutense de Madrid (Dr. Luis Ortega-
Mora – Dra. Gema Álvarez - Dr. Javier Regidor Cerrillo)
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Dinámica de los niveles de anticuerpos anti-Neospora caninum
Proceso dinámico!!
0
10
20
30
40
50
60
70
Mayo Junio Setiembre Enero
N°de
cas
os
Muestreos
PositivosDudososNegativos
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Endógena
ABORTOTERNERO
CRONICAMENTE INFECTADO
Exógena
Formas de transmisiónReinfección
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ELISA de Avidez
• Determina la afinidad de los anticuerpos (IgG) con la Neospora caninum
• Permite diferenciar entre infección aguda y crónica
• La fuerza de unión de los anticuerposfrente a los antígenos varía en funcióndel tiempo transcurrido
• En las fases agudas de la infección lafuerza de unión de los anticuerposgenerados frente al patógeno es baja,mientras que en fases crónicas eselevada
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0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
Mayo Junio Setiembre
Núm
ero
de s
uero
s
Muestreos
AltaBaja
Densidad óptica mayor 0,5
82,5%
17,5%
57,7%
42,3%
67 muestras seropositivas
ELISA de Avidez
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Conclusiones
• Presencia de anticuerpos de baja y alta avidez
• Los anticuerpos de baja avidez disminuyen a
medida que transcurre el tiempo
• La presencia de anticuerpos de baja avidez
confirman infección aguda
• Los de alta avidez en los 3 muestreos indica
infección crónica
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Conclusiones
• La importancia del DIAGNÓSTICO
• Tipo de brote
• Formas de transmisión – Serología
Exógena
Endógena
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• Estudiar casos que se presenten parapoder definir el tipo de brote,considerando que la forma epidémica seda en Uruguay
• El desafío es seguir estudiando cada caso
Conclusiones
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MUCHAS [email protected]