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ESTUDIO MICROBIOLÓGICO Y FISICOQUÍMICO DE LOS CÁLCULOS BILIARES BOVINOS MILAGRO DE JESÚS LÓPEZ PUELLO DAYANA JULIETH MONTES NUÑEZ UNIVERSIDAD SANTANDER FACULTADAD CIENCIAS DE LA SALUD BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO VALLEDUPAR- CESAR 2019
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ESTUDIO MICROBIOLÓGICO Y FISICOQUÍMICO DE LOS CÁLCULOS
BILIARES BOVINOS
MILAGRO DE JESÚS LÓPEZ PUELLO
DAYANA JULIETH MONTES NUÑEZ
UNIVERSIDAD SANTANDER FACULTADAD CIENCIAS DE LA SALUD
BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO VALLEDUPAR- CESAR
2019
ESTUDIO MICROBIOLÓGICO Y FISICOQUÍMICO DE LOS CÁLCULOS BILIARES BOVINOS
MILAGRO DE JESÚS LÓPEZ PUELLO
DAYANA JULIETH MONTES NUÑEZ
Director(a)
CARLOS ALBERTO GUTIÉRREZ DE PIÑERES Ingeniero de alimento
Maestría en diseño y gestión en desarrollo en proyecto Especialización en pos-cosecha y post-producción
UNIVERSIDAD SANTANDER FACULTADAD CIENCIAS DE LA SALUD
BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO VALLEDUPAR- CESAR
2019
AGRADECIMIENTOS
Agradecemos a Dios creador del universo por guiarnos, bendecirnos y darnos
fortaleza en momentos de dificultades y debilidades.
Gracias a nuestros padres por ser los pilares de nuestros deseos, por brindarnos
consejos, valores, principios, y amor incondicional.
Agradecemos a nuestros docentes de la universidad de Santander, en el programa
de bacteriología y laboratorio clínico por habernos compartido sus conocimientos y
de manera especial al Doctor Carlos Gutiérrez, nuestro director de proyecto de
investigación quien nos ha guiado con su bondad y paciencia.
DEDICATORIA
El presente trabajo investigativo lo dedicamos principalmente a Dios padre y creador
de todas las cosas, por bendecirnos y darnos fuerza para continuar en este proceso
de obtener el título de bacteriólogas, uno de los anhelos más importantes en
nuestras vidas.
A nuestros padres Flor Puello, y mi ángel de la guarda Francisco López que desde
el cielo me ha regalado la fuerza para seguir cumpliendo mis anhelos, a Neribeth
Nuñez y Jaime Montes, por su gran amor, esfuerzo y sacrificio en todos estos años,
por ustedes hemos logrado llegar hasta la meta para convertirnos en profesionales
de salud, estamos argullosas y tenemos el privilegio de ser sus hijas, gracias por
inculcarnos el ejemplo de esfuerzo y valentía.
TABLA DE CONTENIDO
INTRODUCCIÓN .................................................................................................. 15
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA ............................................................. 16
1.1 Descripción del problema ......................................................................... 16
1.2 Justificación .............................................................................................. 18
2. OBJETIVOS .................................................................................................... 20
2.1 Objetivo general ....................................................................................... 20
2.2 Objetivos específicos ............................................................................... 20
3. MARCO TEÓRICO ......................................................................................... 21
3.1 Antecedentes ........................................................................................... 21
3.2 Bases teóricas .......................................................................................... 24
3.2.1 El colesterol. ............................................................................................. 24
3.2.2 El lanosterol. ...................................................................................... 25
3.2.3 Fisiopatología de los cálculos biliares. ............................................... 25
3.2.4 Cristalización o nucleación del colesterol. ......................................... 26
3.2.5 La sobresaturación de la bilis por colesterol. ..................................... 26
3.2.6 Diferentes tonalidades y formas de los cálculos biliares. ................... 27
3.3 Bases legales ........................................................................................... 29
4. MATERIALES Y MÉTODOS ........................................................................... 30
4.1 Clasificación de la investigación ............................................................... 30
4.2 Población de estudio y muestra ............................................................... 30
4.2.1 Tipo de muestreo. .............................................................................. 30
4.2.2 Criterios de inclusión y exclusión. ...................................................... 30
4.2.2.1 Inclusión ......................................................................................... 30
Cálculos biliares seco ............................................................................... 30
4.3 Sistema de variable. ................................................................................. 31
4.4 DISEÑO METODOLÓGICO ............................................................................ 31
5. RESULTADOS. .............................................................................................. 34
6. DISCUSIÓN .................................................................................................... 41
7. CONCLUSIÓN ................................................................................................ 43
8. RECOMENDACIÓN........................................................................................ 44
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ...................................................................... 45
ANEXOS ............................................................................................................... 48
LISTA DE TABLAS ESPECIALES
Tabla 1 Resumen de las diferentes tonalidades de cálculos (Gómez, D. 2009) ... 28
Tabla 2 Operacionalización de variables .............................................................. 31
Tabla 3 ANOVA análisis de varianza de microorganismos en cálculos biliares .... 35
Tabla 4 Microorganismos identificados en los cálculos biliares bovinos. .............. 36
Tabla 5 Datos de la cromatografía de capa fina ................................................... 39
Tabla 6 Datos obtenidos de la cromatografía en RF ............................................. 39
LISTA DE GRÁFICAS ESPECIALES
Gráfica 1 Recuento microbiano en UFC/g en cálculos biliares bovinos proveniente
de distintos sitios. .................................................................................................. 34
Gráfica 2 Análisis de varianza de cálculos biliares bovino ................................... 35
Gráfica 3 Análisis fisicoquímico de los cálculos biliares en bovino ....................... 38
Gráfica 4 Cromatografía de capa fina ................................................................... 40
LISTA DE ILUSTRES ESPECIALES
Ilustración 1. Imágenes de cálculos biliares con diferentes tonalidades. .............. 28
Ilustración 2. Técnica de Lieberman- Burchard ..................................................... 37
Ilustración 3. Cromatografía de capa fina. ............................................................. 38
LISTA DE ANEXOS
Anexo 1.Sabana de registro: Análisis microbiológico………………………………..49
Anexo 2. Sabana de registro: Análisis fisicoquímico ………………………………..50
Anexo 3. Sabana de registro: pruebas bioquímicas………………………………....51
Anexo 4. Cromatografía de capa fina …………………………………………………52
GLOSARIO.
Cálculos biliares: Son depósitos endurecidos de líquidos digestivos, que
pueden variar de tamaño y número, y pueden causar síntomas o no.
Estudio microbiológico: Ciencia encargada del estudio de los
microorganismos, seres vivos pequeños, también conocidos como microbios,
se dedica a estudiar los organismos que son sólo visibles a través del
microscopio.
Beta glucuronidasa: La enzima β-glucuronidasa cataliza la conversión de
β-D-glucuronosida y agua en un alcohol y D-glucuronato. Los bioquímicos
que actúan como sustratos para la beta-glucuronidasa tienen muchas
aplicaciones en la investigación bioquímica y fisiológica.
Vesícula biliar: Es un órgano con forma de pera ubicada bajo el hígado.
Almacena bilis, un líquido producido por el hígado para digerir las grasas.
Cuando el estómago y el intestino digieren los alimentos, la vesícula biliar
libera bilis a través de un tubo denominado conducto biliar común. Ese
conducto conecta a la vesícula biliar y el hígado con el intestino delgado.
Cromatografía: Es un tipo de técnica aplicada para la separación de varios
elementos que conjugan a una mezcla, esta división se fundamenta en las
características físicas y químicas que posea cada elemento, haciendo
énfasis en la capacidad de interacción de cada componente de la mezcla o
de la solución con una sustancia.
Colesterol: Es un esteroide orgánico natural que constituye un componente
estructural de membranas celulares de mamíferos.
Bilirrubinas: Son pigmentados, y se forma por la destrucción de glóbulos
rojos.
Mucina: Mucoproteínas de alto peso molecular que protegen la superficie de
las células epiteliales al actuar como barrera a las partículas y
microorganismos. Las mucinas ancladas a la membrana pueden tener
funciones adicionales relacionadas con las interacciones de proteínas en la
superficie celular.
Hipercolesterolemia: Consiste en la presencia de colesterol en sangre por
encima de los niveles considerados normales.
Colecistectomía: Es una intervención quirúrgica que se lleva a cabo con la
finalidad de extraer la vesícula biliar.
RESUMEN
Título: Estudio microbiológico y fisicoquímico de los cálculos biliares bovinos
Autores: Milagro de Jesús López Puello y Dayana Julieth Montes Núñez
Palabras claves: Microorganismos, cálculos biliares, lanosterol, Escherichia coli,
estrategias, beneficiaderos,
Descripción: El objetivo del trabajo de investigación es indagar si hay presencia de
microorganismos patógenos en cálculos biliares bovinos y además su composición
principal mediante el análisis fisicoquímico con el test de Liebermann–Burchard y
cromatografía, se decidió trabajar con los cálculos de bovinos debido a que estos
están teniendo una gran demanda a nivel mundial sobre todo en el sector comercial,
siendo estos manipulados en gran medida por operarios de las plantas de
beneficios sin tener la bioseguridad adecuada, lo cual puede conllevar a un riesgo
de salud pública, en nuestro estudio se obtuvo como resultados microorganismos
compuestos por diversas morfologías, donde prevalece la Escherichia coli, aparte
de ello el compuesto fundamental es el lanosterol el cual es un triterpenoide
tetracíclico precursor del colesterol, refutando a la literatura que nos dice que se
tiene mayor concentración de este último compuesto, como conclusión que las
plantas de beneficios deben proveer estrategias profilácticas y preventivas para
cuidar la salud del personal encargado durante la filtración, extracción y
manipulación de los cálculos bovinos generando mayor productividad, además
seguir indagando sobre la parte microbiológica debido que este fenómeno
biomolecular lo están utilizando para crear fármacos brindando ayuda a algunas
patologías en seres humanos, tales como; ansiedad, enfermedades neurológicas y
cardiovasculares. Por lo cual se requiere mejor calidad en el control del manejo de
la litiasis biliar bovinos.
ABSTRAC
Title: Microbiological and physicochemical study of bovine gallstones
Authors: Milagro de Jesús López Puello and Dayana Julieth Montes Núñez
Keywords: Microorganism, gallstones, lanosterol, Escherichia coli, strategies,
beneficiary
Description: The objective of the research work is to investigate if there is presence
of pathogenic microorganisms in bovine gallstones and also their main composition
by means of physicochemical analysis with the Liebermann–Burchard test and
chromatography, it was decided to work with the calculi of bovines because they are
having a great demand worldwide especially in the commercial sector, these being
largely manipulated by operators of the benefit plants without having adequate
biosecurity, which can lead to a public health risk, in our study it was obtained as
Results microorganisms composed of various morphologies, where Escherichia coli
prevails, apart from that the fundamental compound is lanosterol which is a
tetracyclic triterpenoid precursor to cholesterol, refuting the literature that tells us that
it has a higher concentration of the latter compound, such as conclusion that the
benefit plants deb in providing prophylactic and preventive strategies to take care of
the health of the personnel in charge during the filtration, extraction and manipulation
of bovine calculi generating greater productivity, in addition to continue investigating
the microbiological part because this biomolecular phenomenon is being used to
create drugs providing help to some pathologies in humans, such as; anxiety,
neurological and cardiovascular diseases. Therefore, better quality is required in the
control of the management of bovine biliary lithiasis.
INTRODUCCIÓN
Los cálculos biliares son la acumulación de una o más piedras en la vesícula biliar
(la vesícula es un órgano que forma parte del aparato digestivo de todos los seres
humanos y animales cuadrúpedos, está situada por debajo del hígado. La vesícula
biliar es una visera hueca pequeña, con forma de ovoide o pera, su función es la
acumulación de bilis, que libera al duodeno a través de los conductos arriba
reseñados, entrando en el mismo a través de la papila y ampolla de Váter). La
mayoría de los cálculos biliares están compuestos principalmente por colesterol
(75%), el resto de los cálculos biliares están compuestos de pigmento.
Los cálculos biliares han tenido una gran demanda en los frigoríficos esta son
empresas pública o privada, la cual posee una planta de desposte y una planta de
procesados cárnicos autorizados por el Estado para el sacrificio de bovinos y otros,
hay que tener en cuenta que 4 de cada 100 bovinos sacrificados pueden tener
cálculos biliares.1
1. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA
1.1 Descripción del problema
Existen 553 beneficiaderos oficiales en Colombia vigilados por el INVIMA, en los
cuales laboran 2 operarios en el área de extracción de la bilis y verificación de los
cálculos biliares en bovinos, la prevalencia de estos es 4 de 100 bovinos que se
sacrifiquen.1.
Actualmente existe un interés particular por los cálculos biliares bovinos en el sector
comercial, donde muchas compañías están interesadas por la composición, origen
y estructura de este fenómeno biomolecular. El principal país comprador es China
con cerca de 200 kg por semana, usado principalmente para la medicina tradicional
de este.2
Estos cálculos biliares presentan unas características según su composición, tal es
el caso de color café los cuales se asocian principalmente a colestasis biliar e
infección; los factores bacterianos involucrados en la fisiopatología de estos
cálculos son muy variados como lo es la presencia de la enzima beta glucoronidasa,
las que contienen las bacterias de Escherichia coli y Clostridium spp. Hay des
conjugación al diglucorónido de bilirrubina, y otras bacterias de conjugan y
dehidroxilán los ácidos biliares lo que permite la disminución de los agentes que
hacen soluble el colesterol, igual se puede encontrar parásitos implicados como lo
es el Ascaris spp.3
Sobre las patologías asociadas con cálculos biliares se han hecho importantes
revisiones actualizadas de la prevalencia de enfermedades como
hipercolesterolemia, cálculos biliares, colestasis, trastornos de la bilirrubina, entre
otros.4 Otros autores como Helen Hang y colaboradores han estudiado el estado
normal, fisiológico, la biosíntesis en el colesterol en el cuerpo, la forma de excreción
de los excedentes de colesterol, ciertas condiciones de fisiopatología asociados con
características fisicoquímicas y enzimas de microorganismos, este trabajo presenta
una asociación de la absorción del colesterol en el intestino, la biosíntesis de ácidos
biliares, y la influencia de la microflora anaeróbica en la conformación de los
cálculos biliares.5
Pese a múltiples trabajos realizados sobre cálculos biliares los cuales se han
enfocado más en la determinación del origen y de los factores concomitantes, aún
existen desconocimiento exacto de la génesis a nivel biomolecular. Las hipótesis
recientes indican una gran participación de enzimas y coenzimas generadas
durante el metabolismo de microorganismos y más específicamente de la
Escherichia coli 3 y los ya conocidos cofactores como el calcio, bilis desconjugada
entre otros.
Por ello, la problemática que se planteo es la identificación de microorganismos y
análisis fisicoquímico como un aporte más a la comprensión de esta fisiopatología
que afecta la salud pública desde lo endógeno, y desde el punto de vista productivo
es importante que las compañías conozcan los riesgos biológicos a lo que se
exponen sus operadores en la planta de beneficio, más concretamente en el área
de filtrado y extracción de bilis de tal forma que podrán desarrollar protocolos para
la mitigación de una contaminación cruzada dado que el producto principal de
dichas plantas de beneficio es de carne en canal para consumo humano.3
El punto central del problema es que a raíz del precio que se paga por los cálculos
biliares las plantas beneficiadoras nacionales derivaron una operación paralela al
proceso del beneficio animal, reglamentado por el decreto 1500 del año 2007, dicha
operación es el filtrado y extracción de los cálculos, luego dentro de la misma planta
lo colocan en caja de cartón abiertas para su secado, este hecho constituye una
manipulación de un subproducto que en efecto algunos autores lo asocian con
microorganismos como Escherichia coli, Clostridium spp, Ascaris spp, entre otros,
lo que finalmente puede crear una contaminación cruzada con carne en canal. 6
Formulación del problema
¿Cuáles son los microorganismos patógenos presente en los cálculos biliares de
mayor riesgo para la salud humana y que características fisicoquímicas contienen
dichos cálculos biliares bovinos?
1.2 Justificación
Con los resultado del presente trabajo se mejorara la productividad de las plantas
de beneficio oficiales, puesto que podrán diseñar estrategias profilácticas y
preventivas al momento de la filtración, extracción y manipulación en general de los
cálculos biliares, cuanto muchos de estos en el proceso de secado que
aproximadamente dura 2 semanas pueden romperse formándose lo que se le
domina (polvo de cálculos) el cual puede viajar con el flujo del aire y depositarse en
algunas canales que ya se encuentren lista para su comercialización, en síntesis
esto es lo que representa un riesgo de contaminación cruzada. 1
Esto con el fin de salvaguardar la salud de los individuos a raíz de patógenos
presentes en los cálculos biliares de bovinos, visto que al estar presentes los
microorganismos como Escherichia coli, Clostridium spp y Ascaris spp pueden
llegar a afectar tanto a los bovinos como a las personas, considerando que ellos
en su ciclo biológico pueden llegar a localizarse en lugares como el hígado
ocasionando al animal anemia, diarrea, deshidratación, anorexia y desnutrición, que
incrementan los abortos, y la infertilidad, y disminuyen la producción de carne y
leche, además de decomisar el hígado por su parasitosis generando pérdidas
financieras a los beneficiaderos, aparte de ello se colocaría en riego a los individuos
que trabajan ya que si no tienen acceso a la patogenicidad de los microorganismos
no tendrán la precaución necesaria para su cuidado ocasionándoles enfermedades
que pueden ocasionarle la muerte si no son tratadas adecuadamente. 6
2. OBJETIVOS
2.1 Objetivo general
Determinar los microorganismos y características fisicoquímicas de los cálculos
biliares bovinos, mediante técnicas de aislamiento e identificación convencional y
cromatografía, en aras de una generación de conocimiento para la productividad de
los beneficiaderos formales de la Región.
2.2 Objetivos específicos
Aislar e identificar microorganismos patógenos presentes en cálculos biliares
bovinos a través de pruebas bioquímicas y observaciones microscópicas.
Caracterizar fisicoquímicamente los cálculos biliares bovinos empleando
técnicas de cromatografías para la determinación de colesterol.
3. MARCO TEÓRICO
No se han reportado estudios relacionados con identificación microbiológica de
cálculos biliares en bovinos, si no en humanos. Como lo que se vino a presentar
posteriormente.
3.1 Antecedentes
En el Hospital Johns Hopkins de Florida, se indagó por el papel que desempeñan
las bacterias en la vesícula biliar y formación de cálculos biliares en el conducto,
teniendo en cuenta las características del paciente, por lo tanto, se examinó la
vesícula biliar y cálculos del conducto a 66 pacientes consecutivos sometidos a
colecistectomía y / o exploración del conducto biliar. Para ello se emplearon
métodos como microscopía electrónica de barrido (SEM), Microanálisis sin rayos de
energía con dispersión de energía (EDX) y Análisis estadístico donde se logró llevar
a cabo el respectivo estudio.
Las piedras fueron examinadas por microscopía electrónica de barrido (SEM) para
bacterias. Las sales de calcio individuales fueron clasificadas por microanálisis de
rayos X sin dispersión de energía sin ventana, en 65 pacientes fueron identificados
cálculos en la vesícula biliar en el cual 46 pacientes (71%) estaban formados por
colesterol, en 17 pacientes (26%) por pigmento negro y en 2 pacientes (3%) por
pigmento marrón. Los cálculos del conducto biliar común de diez pacientes fueron
colesterol en 4 pacientes, pigmento negro en 2 pacientes y pigmento marrón en 4
pacientes. Los cinco pacientes con cálculos de pigmento marrón fueron
significativamente (p <0.05) mayor, los hombres tienen mayor probabilidad
padecerlo y presentar bilis obstrucción del conducto. Los cultivos biliares fueron
positivos en el 13% de los pacientes con cálculos de colesterol, en 14% de aquellos
con piedras de pigmento negro y en todos los pacientes con piedras de pigmento
marrón (p<0.001). Por SEM, se observaron bacterias solo dentro del calcio matriz
de bilirrubinato-proteína de piedras de pigmento marrón (p<0.001), en comparación
con piedras de pigmento negro, las piedras marrones tenían más probabilidades de
contener palmitato de calcio (p <0.005) y colesterol (p <0.001). 7
Algunos investigadores piensan que los factores bacterianos involucrados en la
fisiopatología de cálculos café son muy variados. La presencia de la beta
glucoronidasa, al parecer, juega un papel muy importante. Esta enzima está
presente en Escherichia coli, Bacteroides y Clostridium spp. Es una enzima
desconjugan con el diglucurónido de bilirrubina; la bilirrubina libre resultante se une
con el calcio y forma un precipitado insoluble denominado bilirrubinato de calcio.
Otras enzimas bacterianas desconjugan y deshidroxilan los ácidos biliares; esto
conlleva a una disminución de los agentes que hacen soluble el colesterol. La
infestación parasitaria también juega un papel importante; los principales parásitos
implicados son Clinorchus sinensis, Opistochus vivarini y Ascaris spp. 3
Se realizó en la población general y Latinoamérica hallazgos para el entendimiento
de la fisiopatología y la clasificación de los cálculos biliares ya que aporta claves
para su tratamiento. Gómez dice que los principales factores necesarios para la
formación de cálculos de colesterol es la sobresaturación de la bilis por colesterol,
el segundo factor de gran importancia es la cristalización acelerada y el tercer factor
es la alteración en la motilidad de la vesícula biliar y el tránsito intestinal lentificado.
Con el estudio se puede concluir que las características morfológicas externas y la
apariencia al corte de los cálculos brindan una información primordial acerca de su
etiología. Además, el conocimiento y entendimiento de la fisiopatología generan las
herramientas necesarias para enfocar de manera más precisa el tratamiento que,
en muchos casos, va más allá de la colecistectomía.3
Se realizaron un estudio sobre la patogénesis de cálculos biliares que contienen
calcio donde postulan que la precipitación de calcio en la bilis es un evento crítico
en el inicio de los cálculos biliares del colesterol y proponen que para proteínas,
sales biliares no conjugadas y sales biliares conjugadas con glicina, requerirían que
la unión Ca ++ implique un "sitio" de intercambio iónico reversible en el que un ión
Ca ++ se interpone entre grupos carboxilo (COO-) e hidroxilo (OH). Para las sales
biliares conjugadas con taurina, se propone que este "sitio" implica la interposición
de un ion Ca ++ entre los grupos oh de cadena lateral so-3 y el anillo colánico. Estos
estudios son un primer paso hacia la modulación de la actividad de Ca ++ en la
bilis.8
En 1994 Matt, D. propone que los cálculos biliares de colesterol tienen centros
visualmente pigmentados, pero no está claro si representa una precipitación simple
de pigmento con colesterol durante la nidación o anidación con cálculos en un
verdadero centro de pigmento. En este estudio se seleccionaron entre 67 conjuntos
de cálculos biliares de colesterol, 12 conjuntos con los centros pigmentados más
llamativos. La composición de los centros y las periferias de estas 12 piedras se
analizaron mediante espectroscopia infrarroja y se comparó con la de 10 cálculos
biliares de pigmento negro. Los centros pigmentados de cálculos de colesterol
contenían 80.1 ± 7.9% (media ± S.E.) colesterol, 6.2 ± 3.4% de bilirrubinato de calcio
(solo 4 de los 12 centros tenían bilirrubinato de calcio mensurable), vestigios de
fosfato de calcio y sin carbonato de calcio o palmitato de calcio. Las áreas periféricas
de los cálculos de colesterol contenían 91,6 ± 2,3% de colesterol y no se detectaron
sales de calcio, la composición química de los centros pigmentados de los cálculos
biliares de colesterol es cuantitativamente diferente de la de las piedras de pigmento
negro, lo que sugiere que los cálculos biliares de colesterol no se forman en un nidus
de piedra de pigmento. No hace referencia a la presencia de microorganismo dentro
de los cálculos biliares.9, 10,11,
12
3.2 Bases teóricas
Los cálculos biliares son glomerulados de colesterol, pigmento biliar o una
combinación entre ellas, que pueden formarse en la vesícula biliar o dentro de los
conductos biliares del hígado. El tipo más común de cálculos biliares es producto
del colesterol. Los cálculos de colesterol se forman debido a un desequilibrio en la
producción de colesterol o en la secreción de bilis.
Los cálculos pigmentarios se componen fundamentalmente de bilirrubina, que es
una sustancia química producida como resultado de la descomposición normal de
los glóbulos rojos.10, 11, 1
3.2.1 El colesterol.
Es un esteroide que modula la fluidez de la membrana de las células eucariotas.
Asimismo, es el precursor de otras moléculas biológicas importantes, tales como
progesterona, testosterona, estradiol y cortisol. Se encuentra distribuido
ampliamente en todo el tejido animal, pero es un constituyente principal de los
cálculos biliares. Esto a su vez es biosintetizado a partir del lanosterol.13, 14
Los componentes lipídicos de las células animales son fosfolípidos, esfingolípidos y
colesterol, encontrándose este último por regla general en forma no esterificada. En
las membranas biológicas de las plantas en lugar de colesterol contienen sitosterol
y estigmasterol, las levaduras y hongos contienen ergosterol y las membranas
bacterianas no contienen esteroles.15 El colesterol se puede obtener en el
laboratorio por extracción de los cálculos biliares.16, 17
El colesterol biliar es transportado por vesículas y micelas. Los microcristales de
colesterol se derivan de vesículas termodinámicamente inestables. En animales
experimentales, la deficiencia de vitamina C conduce a una super-saturación de
colesterol biliar y a la formación de cálculos biliares.18, 19
3.2.2 El lanosterol.
Es un triterpenoide tetracíclico, que es el compuesto del que derivan todos los
esteroides; es un precursor del colesterol mediante un complejo proceso en el
cual se eliminan tres grupos metilo, se reduce un doble enlace y se produce
la isomerización de otro doble enlace.20, 21
3.2.3 Fisiopatología de los cálculos biliares.
En la fisiopatología de los cálculos biliares de colesterol se encuentran varios
desajustes, así como, la alteración en la secreción de lípidos biliares, la
cristalización o nucleación del colesterol, la sobreproducción de proteínas mucinas
que modifican la motilidad de la vesícula biliar y la alteración en el transporte
intestinal de colesterol. 22
Los cálculos de la vía biliar se dividen según su localización, en dos tipos: primarios
y secundarios. Se consideran primarios cuando permanecen en el sitio en que se
forman y, secundarios, cuando se forman en la vesícula biliar y migran a la vía biliar,
de igual forma según su color pueden ser naranjas, marrones (pigmentados) o
mixtos. 23
Se encontró mayor presencia de colesterol en precipitados de bilis bovina y porcina
sometidas a incubación por 72 horas a 40°C, el aspecto turbio y el olor putrefacto
daban cuenta de una fermentación de bacterias coliformes fecales que en
concordancia con otro trabajo de investigación producen enzimas liberadoras de los
ésteres de colesterol.24
Además de lo expuesto múltiples trabajos de investigación concluyen que la
presencia de la proteína denomina mucina es imprescindible en la formación de
cálculos biliares, los genes MUC (Mucina), tiene compromiso de expresar esta
proteína. La mucina es una mucoproteína producida en el epitelio de la vesícula
biliar, quien expresa de manera normal los genes como MUC1, MUC2, MUC3,
MUC4, MUC5B, MUC5AC y MUC6, de los cuales MUC5B y MUC5AC son los que
normalmente se encuentran en la participación del desarrollo de los cálculos.
Cuando se halla una sobresaturación en la bilis y con cristales de colesterol, si existe
una infección bacteriana esta ocasionará daños al epitelio vesicular causando una
sobreproducción de mucina dentro de la vesícula biliar, es decir que es un efecto
indirecto del metabolismo bacteriano.25
Finalmente, de momento no existen trabajos de investigación que reporten
presencia de microorganismos en cálculos biliares de color naranja, claro que
tampoco eliminan esta probabilidad.26
3.2.4 Cristalización o nucleación del colesterol.
Se conoce que algunos autores consideran que este es un evento importante para
que se logre la formación de cálculos ya que si no hay una alteración de colesterol
sin que este llegue a la fase de nucleación no se encontraría las formaciones de
cálculos biliares.23
En la bilis, el colesterol puede transportarse en micelas mixtas (compuestas de sales
biliares y fosfolípidos) o liposomas/vesículas (compuestos en su mayoría de
fosfolípidos y escasas sales biliares) y en condiciones de cálculos biliares se ha
encontrado que el colesterol se traslada en su mayoría en vesículas, denominadas
unilamelares, ya que están son formadas por una bicapa de fosfolípidos de diámetro
amplio y que incluyen un compartimento acuoso.22, 25, 27
3.2.5 La sobresaturación de la bilis por colesterol.
Esto se asocia a dos factores principales; la gran concentración de la enzima
limitante para la formación de colesterol en el hígado (hidroximetil glutaril-coenzima-
A) y la poca concentración de la enzima limitante para la conversión de colesterol
en ácidos biliares (7-alfa-hidroxilaza). La concentración de colesterol y fosfolípidos,
esta alterada en la bilis litógena, y conlleva a la formación de micelas multilaminares
de mayor tamaño. El proceso de sobresaturación depende de la litogenicidad de la
bilis, pero es promovido en la vesícula por la gran concentración de sales biliares y
colesterol biliar, el segundo factor de gran importancia es la cristalización acelerada;
los factores promotores son las glicoproteínas de mucina producidas en la vesícula
y las glicoproteínas diferentes a la mucina de origen hepático. La hipersecreción de
mucina por parte de las glándulas de la vesícula usualmente precede el primer paso
en la cascada litógenica: La precipitación, el resultado de la unión de este gel
viscoso de mucina con cristales de colesterol se denomina barro biliar. 23, 28
3.2.6 Diferentes tonalidades y formas de los cálculos biliares.
Los cálculos de colesterol puros generalmente son blancos o amarillos, únicos,
ovales, duros, y al corte tienen cristales en el centro y apariencia radiada del centro
a la periferia. Deben tener un contenido mayor de 70% de colesterol para ser
clasificados como puros. Se pueden asociar a la presencia de pigmento en su
centro, pero característicamente corresponde a menos de 1/3 del diámetro del
cálculo.3
Los cálculos de colesterol mixtos son redondos o con facetas, amarillos, café claro,
café oscuro o verdosos. Al corte existen capas concéntricas y radiadas con una
capa externa no definida.3
Los cálculos de colesterol combinados son ovalados o redondos, café claro o café
oscuro y en su apariencia al corte se pueden definir dos capas: una central con
estructura radiada del centro a la periferia con presencia de cristales y una externa
concéntrica definida de más de 1 mm de espesor.
El cálculo café, también conocidos como de bilirrubina, son de forma terrosos o
lodosos, friables, pequeños, mamelonados y su tono puede variar de verdes a café.
Se componen en 40% a 60% de bilirrubinato de calcio y, en menos de 30%, por
colesterol. Los diferentes tonos de café reflejan la dilución del bilirrubinato de calcio
por el colesterol y los ácidos grasos. Su apariencia al corte es concéntrica y
característicamente no presentan estructuras radiadas ni cristalinas.3
Ilustración 1 Imágenes de cálculos biliares con diferentes tonalidades.
Fuente: Autor Gómez, D. 2009.
Los cálculos negros, también denominados de pigmento puro, son pequeños (<5
mm), irregulares, negros y múltiples. Se componen, principalmente, de bilirrubinato
de calcio y su apariencia al corte es amorfa. No se asocian con infección ni estasis;
su principal asociación es con las alteraciones hemolíticas. Son más comunes los
de origen vesicular, aunque representan el 15% de los cálculos intrahepáticos.3
Tabla 1. Resumen de las diferentes tonalidades de cálculos (Gómez, D. 2009)
Tipo de cálculo Color Forma Apariencia al corte
Colesterol puro. Blanco, amarillento Oval, redondo Radiado del centro a
la periferia
Colesterol Mixto. Café oscuro- verdoso. Redondo, facetado. Capas concéntricas y
radiadas
Colesterol combinado. Café claro-oscuro Oval, redondo Capa externa >1 mm y
radiación centrípeta.
Pigmento café Café oscuro. Facetados. Capas concéntricas.
Pigmento negro Negro Irregulares. Ausencia de radiación,
amorfos
Fuente: Gómez, D. 2009
3.3 Bases legales
El congreso de Colombia expide la Ley 1562 2012.
´´Conjunto de entidades, normas y procedimientos a seguir para lograr la prevención
y protección de todos los trabajadores ante las enfermedades y accidentes a los
que se enfrentan en su ámbito laboral’’
El gerente general de Instituto Colombiano Agropecuario ICA expide
resolución no. 002341 (23 de agosto de 2007).
´´Por la cual se reglamentan las condiciones sanitarias y de inocuidad en la
producción primaria de ganado bovino y bufalino destinado al sacrificio para
consumo humano. ´´
Decreto 1500 de 2007. Reglamento técnico a través del cual se crea el Sistema
Oficial de Inspección, Vigilancia y Control de Carne, Productos Cárnicos
Comestibles y derivados Cárnicos destinados para el consumo humano.
4. MATERIALES Y MÉTODOS
4.1 Clasificación de la investigación
Estudio descriptivo.
4.2 Población de estudio y muestra
Producción oficial de cálculos biliares en la ciudad de Valledupar, siendo Coolesar
el único beneficiadero licenciado por el INVIMA para realizar beneficio de ganado,
se toma el número de reses promedio sacrificadas en un mes dando unos 3000
animales mensuales y considerando una incidencia del 4% se tiene un estimativo
de unos 48 cálculos al mes, de esto se tomará el 20% que representa con 10 g de
cálculos de diferentes colores y tamaños.1 Este es una muestra por conveniencia
aleatoria considerando el costo del gramo el cual es de 100.000 pesos en la
actualidad (en las áreas de las ingenierías se estiman muestras mayores al 10% no
se emplean fórmulas de muestreo).
4.2.1 Tipo de muestreo.
Muestreo no probabilístico por conveniencia
4.2.2 Criterios de inclusión y exclusión.
4.2.2.1 Inclusión.
Cálculos biliares seco
Tonalidad de colores como: Café, mixto, ocre y naranja
Proveniente de beneficiaderos oficiales
Cálculos biliares enteros
15 g cálculos bovinos
4.2.2.2 Exclusión.
Cálculos biliares húmedos
Color negro y blanco.
Proveniente de beneficiaderos clandestinos
Cálculos biliares fragmentados o polvo de cálculo
Menos de 15 g
4.3 Sistema de variable. Tabla 2. Operacionalización de variables.
VARIABLE DEFINICIÓN NIVEL DE MEDICIÓN
CRITERIOS DE CLASIFICACIÓN
COLOR Diferencia de pigmentación de los cálculos biliares bovinos.
Cualitativo nominal.
Café Ocre Mixto Naranja
COLESTEROL En colesterol es un esteroide orgánico natural que constituye un componente estructural de membranas celulares de mamíferos.
Cuantitativo Continuo.
21,18
MICROORGANISMOS Hongos, bacterias y parásitos en cálculos biliares.
Cualitativo nominal.
Presente. Ausente.
Fuente: Tabla realizada por los investigadores.
4.4 DISEÑO METODOLÓGICO Teniendo en cuenta los objetivos planteados dentro del proyecto de investigación el
desarrollo del trabajo se realizó en tres fases con el fin de brindarle una mejor
perspectiva de la metodología que se estableció en esta investigación.
Fase I: Gestión y adquisición de la muestra.
Se adquirieron los cálculos biliares en tres (3) beneficiaderos oficiales; las muestras
de estos se trasladarán al laboratorio de agroindustria de la universidad de
Santander UDES, sede Valledupar en bolsas de Stomacher y para el transporte se
almacenaron en cajas para evitar que se quiebren, además se requirió en el área
de estudio, equipos como estufas, desecadoras, incubadoras, microscópico, entre
otros y materiales de vidriería para realizar los análisis microbiológicos y análisis
fisicoquímicos.
Fase II: Análisis microbiológico y fisicoquímico de los cálculos biliares.
Inicialmente se procesó 1g de la muestra en 9 mL de agua peptonada al 0,1%, se
realizó una buena homogenización y posterior a esto se llevó a cabo las diferentes
diluciones seriada en 8 tubos de ensayo, manteniendo el mismo volumen; se tomó
de cada dilución 0,1 mL y se efectuó siembras por superficie en los diferentes
medios de cultivos como lo son agar sangre y agar MacConkey; al transcurrir las
24 h se hizo su respectivo conteo indirecto en placa UFC/g, según el contexto de la
NTC 4090, Ítem 10.3 ¨cálculo y expresión de los resultados obtenidos con el medio
sólido.24¨
Luego de aislar las colonias con morfologías diferentes se analizó
macroscópicamente la forma, tamaño, color y textura de cada una, además se llevó
acabo siembra en estrías con asa bacteriológicas en agar sangre; para la
clasificación de bacterias positivos o negativos, se utilizó la tinción de GRAM donde
hay variedades de familias sea cocos, bacillos o cocobacilos lo cual permite generar
base para la realización de pruebas bioquímicas determinando la identificación
de los microorganismos, después de los resultados obtenidos se registró en el
formato 1. Sábana de registro. Análisis microbiológico. Ver anexo 1
Tablas de identificación de cocos Gram positivo, bacilos Gram negativo.
Adicional a lo anterior se realizó los análisis fisicoquímicos, donde inicialmente se
empezó con la parte macroscópica, es decir; se observó el tamaño, color, peso y
posterior a eso se tomaron las muestras y se ejecutó las pruebas cualitativas de
Lieberman- Burchard.
De igual forma se tomó parte del cálculo para determinar el pH, para esto se pesaron
0.5 g de cálculo original en polvo, luego se diluyo en 1 mL de agua y se estableció
el pH inicial. La información se registrará en el (Formato 2). Ver anexo 2
Se llevó a la práctica la cromatografía de capa fina en el laboratorio agroindustria
de la Universidad Santander UDES sede Valledupar, el cual es una técnica
analítica rápida y sencilla, nos ayuda a determinar el grado de pureza de un
compuesto. Se utilizó 4 cálculos biliares de una misma procedencia, pero teniendo
en cuenta la forma de los cálculos, para determinar cuál es el componente principal.
Ver anexo 3
Fase III: Tabulación y análisis de resultados.
Con los datos obtenidos se realizó análisis de varianza con el software MATLAB
R2014a, para realizar análisis de varianza y gráficos para establecer las diferencias
estadísticas que puedan existir entre los cálculos biliares con la diferencia de
tonalidades de colores, así como la cantidad de carga microbiana.
5. RESULTADOS.
El presente estudio se realizó con varias procedencias con el fin de la obtención de
muestras de cálculos biliares bovinos, teniendo en cuenta las formas y tonalidades,
esto se llevó a cabo durante el mes de noviembre del 2018 a enero del 2019,
adquiriendo 15g de la muestra en total que cumplieron con los criterios de inclusión
y exclusión.
De acuerdo con los objetivos específicos planteados en el presente estudio se
obtuvo los siguientes resultados.
Gráfica 1 Recuento microbiano en UFC/g en cálculos biliares bovinos proveniente
de distintos sitios.
Fuente: Realizado por los investigadores, López. M; Montes. D.
Interpretación de la gráfico N° 1: Se tomaron 9 cálculos biliares de tres (3) sitios
procedentes; En Astrea se evidencio Staphylococcus lugdunensis con mayor
Bacill
us s
ub
tilis
Esche
richia
coli
Esche
richia
coli
Shig
ella
so
nne
i
Sta
ph
ylo
ccocus a
ure
us
De
rmacoccu
s s
pp
Esche
richia
coli
Mic
roco
ccus lute
us
Sta
ph
ylo
coccus
lugd
une
nsis
Valledupar Villanueva Astrea
750.000
3.000.000
150.000
7.000.000
150.000 500.000
3.400.000
250.000
9.000.000
Gráfico N° 1. Recuento microbiano en UFC/g en calculos biliares bovinos proveniente de distintos sitios.
crecimiento 9.000.000 UFC/g y de segundo lugar Villanueva con Shigella sonnei
7.000.000 UFC/g y Valledupar con Escherichia coli presentando 3.000.000 UFC/g
y en menor crecimiento microbiano fue en Valledupar con Escherichia coli y
Villanueva con Staphylococcus aureus que dio 150.000 UFC/g.
Pero el microorganismo con mayor prevalencia fue Escherichia coli.
Tabla 3. ANOVA análisis de varianza de microorganismos en cálculos biliares.
Fuente: Realizado por los investigadores, López. M; Montes. D. & Gutierrez. C.
Interpretación de la tabla N° 3 El valor estadístico p> 0.05, con un valor de p=0.5132
no existe diferencia significativa entre los microorganismos encontrados en los
distintos cálculos biliares bovinos.
Gráfica 2. Análisis de varianza de cálculos biliares bovino.
Fuente: Realizado por los investigadores, López. M; Montes. D. & Gutierrez. C.
Valledupar Villanueva Astrea
-2
-1
0
1
2
3
x 104
Sitios donde se recolectaron los cálculos biliares
Gráfico de cajas del análisis de varianza, UFC/g de cálculos biliares bovinos, procedentes de tres sitios diferentes
Un
ida
de
s fo
rma
do
ras d
e c
olo
nia
s / g
(x1
00
0)
Interpretación del gráfico N°2. El gráfico de cajas del análisis de varianza ilustra lo
expresado matemáticamente en la tabla de ANOVA, es que no existe diferencia
significativa.
Tabla 4. Microorganismos identificados en los cálculos biliares bovinos.
PROCEDENCIA MICROORGANISMOS GRAM
Valledupar (A.S)
Bacillus subtilis Bacillos Gram positivo
Escherichia coli Bacillos Gram negativos
Escherichia coli Bacillos Gram negativos
Villanueva
Shigella sonnei Bacillos Gram negativos
Staphyloccocus aureus Cocos Gram positivos
Dermacoccus spp Cocos Gram positivos
Astrea
Escherichia coli Bacillos Gram negativos
Micrococcus luteus Cocos Gram positivos
Staphyloccocus
lugdunensis Cocos Gram positivos
Fuente: Tabla realizada por los investigadores.
Interpretación de la tabla N°4 en las 9 muestras analizadas de cálculos biliares
bovinos, se evidencia la presencia de microorganismos, representando el 11%
bacilos Gram positivo que es Bacillus subtilis 44% la morfología de Bacilos Gram
negativos los cuales fueron Shigella sonnei y con mayor frecuencia la Escherichia
coli que se aisló en dos lugares y el 44% la morfología es de cocos Gram positivos
donde se encontraron Micrococcus luteus, Staphyloccocus lugdunensis,
Staphyloccocus aureus y Dermacoccus spp.
Tabla 5 Resultados de la técnica de Lieberman- Burchard.
Procedencia Color
Técnica de
Liebermann-
Burchard
C. Villanueva
Marrón Lanosterol
Mixto Lanosterol
Ocre Colesterol
C.
Valledupar
Ocre Colesterol
Marrón Lanosterol
Mixto Lanosterol
C. Astrea
Mixto Colesterol
Ocre Colesterol
Marrón Lanosterol
Fuente: Realizada por los investigadores
Análisis de la tabla: Las 9 muestras analizadas se evidencia que el 55% de los
cálculos biliares bovinos está formado por triterpenos tetracíclico de lanosterol y el
44% de esteroide como el colesterol.
Ilustración 2 Técnica de Lieberman- Burchard
Fuente: Realizada por los investigadores
Se observa los virajes de colores azul y rosado para la identificación de compuesto
presente en los cálculos biliares.
Gráfica 3. Análisis fisicoquímico de los cálculos biliares en bovino.
Fuente: Gráfica realizada por los investigadores.
Interpretación de la gráfica N° 3 El análisis del pH en los 9 Cálculos biliares donde
se evidencia que el color ocre posee pH alcalino de 8,7; el color marrón un pH neutro
7,3 y el color mixto con pH acido de 5,5.
Ilustración 3. Cromatografía de capa fina.
Fuente: Fotografía tomada por los investigadores
0,00
2,00
4,00
6,00
8,00
10,00
Marron Ocre Mixto
7,378,72
5,54
Gráfica N°3 Analisis pH
Se observa los virajes de colores azul y rosado para la identificación de compuesto
presente en los cálculos biliares.
Tabla 6 Datos de la cromatografía de capa fina.
PARAMETROS DISTANCIA EN mm COLOR (30 segundos)
Colesterol puro 21,18 AZUL
Ácido ursodesoxicólico 10,54 ROSADO (débil)
FORMAS DE CALCULOS
Forma piramidal 1.
21,00 Azul
28,00 Rosado
Forma piramidal 2.
20,33 Azul
21,04 Rosado
Forma redonda 1. 30,9 Rosado
Forma redonda 2. 25,39 Rosado
Fuente: Tabla realizada por los investigadores.
Procesamiento y análisis de datos: Inicialmente se calcula el factor de retención
(FR) el cual se obtiene dividiendo la distancia en la cual se obtuvo la mancha sobre
la distancia de la fase móvil:
Para el colesterol puro: FR= 21.18/90 =0,235
A partir de estos cálculos se elaboró la siguiente tabla.
Tabla 7. Datos obtenidos de la cromatografía en RF.
SUSTANCIA RF
Colesterol puro 0,235 (azul)
Ácido ursodesoxicólico 0,117 (rosado débil)
FORMA DE CALCULOS BILIARES
Forma piramidal 1 0,233 (azul)
0,311 (rosado)
Forma piramidal 2 0,226 (azul)
0,234 (rosado)
Forma redonda 1 0,343 (rosado)
Forma redonda 2 0,282 (rosado)
Fuente: Tabla realizada por los investigadores.
Interpretación de la tabla N°6 : El color azul es compatible con el peso molecular del
colesterol puro, pero el rosado no es acorde con el peso molecular de ácido
ursodesoxicólico, lo cual significa que los cálculos biliares bovinos no están
conformados por este último, sino que puede asemejarse a un compuesto de
triterpenoide tetracíclico como el Lanosterol.
Gráfica 4. Cromatografía de capa fina.
Fuente: Tabla realizada por los investigadores.
Interpretación del gráfico 4 de la cromatografía de capa fina: Expresa los
compuestos de los cálculos biliares, donde el color azul expresa la presencia de
colesterol puro y el rosado la conformación por Lanosterol en las piedras.
0,235
0,117
0,233
0,311
0,226 0,234
0,343
0,282
0
0,05
0,1
0,15
0,2
0,25
0,3
0,35
0,4
Azul Rosado Azul Rosado Azul Rosado Rosado Rosado
Colesterol puro
AcidoUrsodesoxicólico
Formapiramidal1
Formapiramidal2
FormaRedonda1
FormaRedonda 2
Gráfico No. 4. Cromatografia de capa fina en cálculos biliares Bovinos
6. DISCUSIÓN
En el gráfico 1 se puede apreciar la presencia de bacterias tales como Bacillus
subtilis, Shigella sonnei, Staphyloccocus aureus, Dermacoccus spp, Micrococcus
luteus, Staphyloccocus lugdunesis y Escherichia coli, esta última se encontró en dos
ocasiones en los cálculos proveniente de Valledupar y en los cálculos biliares
bovinos de Astrea, en Villanueva no se evidencio esta bacteria. Es importante
aclarar que la mayor carga microbiana UFC/g es de Staphylococcus lugdunensis
9.000.000 UFC/g, Shigella sonnei 7.000.000 UFC/g respectivamente le siguió el
recuento de la Escherichia coli con 3.400.000 UFC/g
El análisis de varianza muestra que no existe una diferencia significativa de los
cálculos biliares bovinos recolectados en los diferentes sitios mencionados, esto
implica que independientemente se recolecten los cálculos biliares bovinos manejan
una carga elevada de microorganismo altamente patógenos, como quiera en su
mayoría son coliformes totales o fecales que puede causar patologías en la piel,
gastrointestinales, sistema respiratorio.
Esto es coincidente con otros estudios como Gómez D. 2009 que dice que los
cálculos hay una enzima las que contienen las bacterias de Escherichia coli, y
Clostridium sp, lo que describe el autor es estas bacterias desconjugan al
diglucorónido de bilirrubina, y otras bacterias desconjugan y dehidroxilán los ácidos
biliares y otro autor como Bedoya, J, Hurtado (2012 ) en su estudio lo que resalto
fue la presencia de parásitos que juegan un papel importante los principales
implicados son Clinorchus sinensis, y Ascaris sp
De hecho, con los resultados obtenidos y la referencia de otros autores se dimana
que la teoría sobre la formación de los cálculos biliares asociadas a las infecciones
de diferentes microorganismos en la vesícula biliar son coincidentes, por tanto el
riesgo biológico con la manipulación de los cálculos biliares bovinos hacia los
operarios y el personal de manejos es un hecho para prestarle más atención en los
beneficiaderos oficiales.
Otra parte por analizar es el pH de los cálculos biliares bovinos, observando sus
tipos de colores generan distintas medidas sobre todo con mayor frecuencia los de
color marrón que marcaron un pH cercano a la neutralidad, el cual es un factor que
predispone a un buen habitad para la proliferación de estos microorganismos.
En el análisis cromatográfico, con el principio de la técnica de Lieberman- Burchard,
se pudo detectar la presencia de diferentes componentes como colesterol y
lanosterol, teniendo mayor predominio este último con un 55% en los cálculos
marrón. El RF obtenido, ver gráfico 4, para la coloración rosada29 revela la presencia
de compuesto triterpenos tetracíclicos típicos del lanosterol el cual tiene un peso
molecular ligeramente mayor del colesterol, por ello los RF obtenido para el
lanosterol fueron 0,311 0,234 0,343, 0,282, es poco soluble en soluciones acuosa.30
El otro compuesto que fue el ácido ursodesoxicólico pesa que es un compuesto
similar a los triterpenos su peso molecular es inferior al lanosterol dando un RF de
0,117. Estos análisis cromatográfico que los cálculos biliares bovinos contienen,
posiblemente, mayor concentración de triterpenos tetracíclicos que de esteroides
tipo colesterol, implicando una diferencia significativa con los cálculos biliares
humanos donde los documentos científicos señalan mayor presencia de colesterol.
7. CONCLUSIONES
Se logró el aislamiento e identificación de microorganismos presentes en los
cálculos biliares bovinos en tres sitios del departamento del Cesar y Guajira
como son, Valledupar, Villanueva y Astrea; donde sí se evidencia la
presencia de baterías.
Además, las pruebas fisicoquímicas se observó el tamaño, color y pH
cercano a la neutralidad, representando un factor por el cual las bacterias
patógenas mencionadas pueden proliferarse más rápido. La técnica de la
cromatografía de capa fina donde se empleó como revelador el Test de
Lieberman- Burchard, puso en evidencia que los cálculos biliares bovinos
contienen en mayor proporción compuestos triterpenoides tetracíclicos
(lanosterol) que esteroides (colesterol).
8. RECOMENDACIONES
Dada a la alta concentración de UFC/g de bacterias patógenas encontradas
en este trabajo, coincidentes con otros estudios similares, es importante
recomendar la utilidad de las normas de bioseguridad en los operarios al
momento de la manipulación de la bilis y de los cálculos biliares bovinos en
razón que puede existir una contaminación cruzada con las canales y con los
mismos operarios, llegando a ser potencialmente perjudiciales para la salud
humana.
Indagar información sobre toxiinfecciones alimentarias o prevalecía de
enfermedades asociadas al manejo de los cálculos biliares bovinos, dado
que por lo general cuando ocurren estas patologías siempre se explora es en
los alimentos recién consumidos o factores de riesgo asociados al contagio
directo, pero muy poco a la fuente de infección del patógeno.
Los beneficiaderos tanto oficiales y no oficiales deberán realizar charlas
sobre los riesgos al estar expuesto a la manipulación de los cálculos biliares
bovinos si no se rigen las estrategias planteadas para evitar toxiinfecciones
alimentarias y otras enfermedades.
Se debe resaltar que este mismo estudio de aislamiento microorganismo y
pruebas fisicoquímicas, se realice en cálculos biliares humanos; para
establecer comparaciones respectivamente.
Dada que la NTC 4092 que fue la referenciada en el presente estudio para el
reporte de UFC/g indica que debe hacerse un conteo selectivo de colonias
de interés se procedió de manera consecuente con dicha técnica, pero no se
puede desconocer colonias, invasoras tal vez que no se consideraron en el
presente estudio por tema delimitación analítica, por tanto en futuros
estudios se deberán incluir para determinar si se trata de microorganismos
con invasoras o contaminante o propias de los cálculos biliares bovinos.
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ANEXOS Anexo 1. Sabana de registro: Análisis microbiológico
Anexo 2. Sabana de registro: Análisis fisicoquímico
Anexo 3. Sabana de registro: pruebas bioquímicas
Anexo 4. Cromatografía de capa fina
