Establecimiento del cultivo primario de cardiacas provenientes de una rata sprague dawley y...
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Establecimiento del Cultivo Primario de cardiacas provenientes de una rata
Sprague-Dawley y células embrionarias
Fundamentos del Cultivo de Células Animales, 2013.Álvarez, D.; Arias, S.; Chaves, J.; Des Bouillons, R.
Cultivo primario
Fig 1. Esquema de las etapas de disección y el establecimiento del cultivo primario.Fuente: Freshney, 2005
Fig 2: Esquema del establecimiento del cultivo primario y los subcultivos.Fuente: Argenbio, s.f.
Aplicación• Desarrollo de nuevos productos biomédicos• Investigaciones
Envejecimiento Células madre Cáncer
• Miocitos en cultivo Trasplantarlos a corazón
Resultados y Discusión
Fig 3. Fotografías que muestran el crecimiento celular del cultivo primario de células de corazón de rata. Método del explante: a, b y c. Método enzimático: d,
e, f. De izquierda a derecha: primera, segunda y tercer semana, respectivamente.
d e f
a b c
Resultados y Discusión
Método enzimático Según Oswaldo et al. (2007) se obtienen gran cantidad de
fibroblastos cardiacos y miocitos.
Los fibroblastos presentan un alto grado de adaptación en condiciones in vitro y una rápida división celular, llegan a ser las
células predominantes en cultivo primario. Participan en la síntesis, la secreción y degradación de las proteínas de la matriz extracelular.
Brindan las condiciones apropiadas para que otros tipos de células puedan desarrollarse en conjunto.
Resultados y Discusión
Favorecieron las condiciones
para que otras células también
pudieran proliferar.
Junto con la secreción de
proteínas de la matriz
extracelular.
La gran tasa proliferativa de los fibroblastos.
Resultados y discusión
Explante El cultivo a partir de explante tiene la limitación de que el crecimiento se limita a la periferia del explante y la capacidad
proliferativa de la célula.
Procesos fisiológicos de las células como el ciclo celular, la presencia de factores de crecimiento, las concentraciones de suero agregadas
al medio, así como la densidad celular.
Esta situación se pudo haber debido a condiciones de estrés en las células que impidieron un buen desarrollo de las mismas luego de su establecimiento in vitro. Sin embargo, se logró determinar que
las células cardíacas de rata, crecen mejor cuando el tejido se disocia enzimáticamente.
Fig. 4. Fotografías que muestran los diferentes tipos de morfología celular observados en el cultivo primario de corazón de rata comparados con los que se reporta en la literatura. (a): miocitos. (b): miocitos de rata neonatal, fuente: Grubb et al., 2012. (c): dendríticas. (d): células dendríticas epidérmicas, fuente: Celluzzi y Falo. 1997. (e): fibroblastoide. (f): cultivo mixto de fibroblastos y miocitos, fuente: Hakimata, 2008.
b d f
a c e
Cardiomiocitos
Fiibroblastos
Celulas endoteliales
Mastocitos
Celulas del musculo liso
Macrofagos
Resultados y Discusión
Mio
cito
sCélulas musculares.
Células redondeadas al inicio y posteriormente presentan pseudópodos.
Mesotelio, epicardio.
Resultados y Discusión
Fibr
obla
stos
Células no musculares.
Producir y secretar proteínas de la matriz extracelular ( colageno y fribronectina).
Amplia variedad de estímulos tanto mecánicos como químicos, mediante los cuales pueden migrar, proliferar y diferenciarse a un fenotipo más activo
Amplia variedad de receptores y secretan diversos factores de crecimiento y citoquinas.
Resultados y Discusión
Dend
itríc
asFunciones de inmunovigilancia para antígenos exógenos que son presentados a los linfocitos T.
Intersticio de muchos órganos no linfoides como el corazón, donde pueden capturar los antígenos de microbios que invaden tejidos.
Ensayos de inmunomodulación en procesos infecciosos
Resultados y Discusión
Fig. 5. Fotografías que muestran las células de corazón de rata en los 4 pasajes obtenidos.
Pasaje 1
Pasaje 2
Pasaje 3
Pasaje 4
Resultados y discusión
Método enzimático
Técnica aséptica
Medio de cultivo
Resultados y Discusión
Fig. 6. Fotografías que muestran los tipos celulares predominantes en el cuarto pasaje. (a): dendríticas. (b): fibroblastos.
a b
Resultados y Discusión
Resultados y Discusión
• Fibroblasotide• Dendríticas
Fig 7. Porcentaje según el tipo de células presentes en corazón de rata adulta.
Fuente: Banerjee et al, 2007.
Resultados y Discusión
Figura 8. Funciones de los fibroblastos en el corazón de rata adulta
Fuente: Souders et al, 2013.
Secreción de citoquinas y factores de crecimiento
Diferenciación de Miofibroblastos
Proliferación y Migración
Fig. 9. Fotografías que muestran el cultivo primario de pulmón de embrión de pollo. (a):cultivo primario. (b): pasaje 1.
a b
Resultados y Discusión
Conclusiones
• Los mejores resultados se obtuvieron con el método enzimático
• Se obtuvieron células musculares, fibroblastoides y dendríticas, sin embargo las células más predominantes fueron las de morfología tipo fibroblastoide.
• Las células obtenidas de tejido embrionario tienen una mejor respuesta proliferativa en comparación con células de tejido ya adulto.