Microsoft PowerPoint - DEC2 Chaco [Modo de compatibilidad]partir de muestras clínicas”
ETEC – E. coli enterotoxigénico
EPEC – E. coli enteropatogénico
EAEC – E. coli enteroagregativo
EIEC – E. coli enteroinvasivo
EHEC – E. coli enterohemorrágico
Microorganismo
•Serotipificación
-Sereney (EIEC)
-Adherencia cultivo celular (EPEC, EAEC, DAEC)
-ELISA (EIEC, ETEC, STEC)
EPEC Adherencia localizadaEPEC Adherencia localizada
Adherencia de EAggECAdherencia de EAggEC
Adherencia difusaAdherencia difusa
Evacuación espontanea
•Recolectar 2 g de materia fecal con una espátula y colocarla en un
recipiente estéril. Conservar refrigerada a 4ºC hasta su procesamiento.
•Si la muestra no es procesada dentro de las 2 horas de recolectada,
utilizar medio de transporte (Cary-Blair, Stuart,) conservar a 4ºC.
Toma de muestra para el diagnóstico de la Toma de muestra para el diagnóstico de la infección por DEC infección por DEC
Hisopado rectal • Tomar la muestra con hisopo, conservarlo en un medio de transporte y mantenerlo a 4°C hasta su procesamiento.
•Si el niño usa pañal, tomar la muestra que queda en el mismo con hisopo
o con espátula.
Recomendaciones a)Recolectar la materia fecal lo antes posible después del establecimiento de la
diarrea.
b)El paciente no debe estar con tratamiento antibiótico. Recolectar la muestra
después de suspender la antibioticoterapia por no menos de 48 horas.
Sistema de triple envase para el envío de Sistema de triple envase para el envío de
material infecciosomaterial infeccioso
Las muestras deben ser enviadas según las Normas de Bioseguridad que corresponden al transporte de muestras clínicas.
Algoritmo para el diagnóstico y caracterización de STEC, EPEC, ETEC, EIEC y EAEC
Agar
+-Tamizaje
Pooles de colonias
PCR Nº1 Positiva
Poolles colonias
IpaH (+) Aislamiento
Hisopado rectal
Hisopado rectal
Siembra directa
Agar MAC
PCR
Toma de muestra para realizar PCR múltiple
Nº1 (eae / lt / stp/ sth) y Nº2 (aggR / IpaH / stx1 / stx2)
Placa de MAC
•Pool de colonias no fermentadoras de lactosa
MAC Grillado
PCR Tamizaje
EPEC / ETEC
eae ltstp sth
Sk1 / Sk2 864
LT-L / LT-R 322
STh-f / STh-r 120
STp-f / STp-r 166
Referencias •Karch H,. J Clin. Microbiol. 1993; 31: 1200-5. •Tamanai-Shacoori Z, J. Microbiol. 1994; 40: 243-9. •Rodas CJ Clin. Microbiol. 2009; 47: 1218-20. •Woodward MJ, Vet. Microbiol. 31: 251-61.
STEC / EIEC / EAEC PCR múltiple aggR / ipaH / stx1 / stx2
stx1
stx2
ipaH
aggR
IpaH8B / IpaH15B 619
aggRks1 / aggRkas2 254
stx1a / stx1b 130
stx2a / stx2b 346
Referencias •Scethabutr O, l Dis. Res. 994; 12: 265-9. •Ratchtrachenchai OA,. Dep. Med. Sci. 1997.39: 211-20. •Pollard DR,. J. Clin. Microbiol. 1990; 28:540-5
Resultados posibles de la PCR múltiple
Nº1 (eae / lt / st) y Nº2 (aggR / IpaH / stx1 / stx2)
Confluencia y pool de
1º grilla
Confluencia positiva y pool de colonias negativas PCR seleccionando nuevas colonias
Confluencia y pool de colonias negativas Muestra negativa
2º grilla
ETEC, EPEC, EAEC, EIEC, y STEC Materia fecal (suspensión)
Agar MacConkey
zona de confluencia colonias lactosa (-) y lactosa (+)
Tamizaje PCR múltiple Nº2
aggR / IpaH / stx1 / stx2
IpaH (+) Aislamiento
EPEC /ETEC/ EAEC
Medio de cultivo
(TSI)
Según Manual of Clinical Formación de H2S
Producción de gas + TSI
(SIM)
Actividad
β-glucuronidasa
Actividad ornitina
1999
Triptofano 100 98,0 50,0
Producción de indol 80,0 98,0 50,0
ONPG 100 95,0 2,0
Movilidad 0 95,0 0
Voges-Proskauer 0 0 0
Acetato (utilización) 68,6 90,0 2,0
Porcentaje de positividad (%)
Triptofano 100 98,0 50,0
Producción de indol 80,0 98,0 50,0
ONPG 100 95,0 2,0
Movilidad 0 95,0 0
Voges-Proskauer 0 0 0
Acetato (utilización) 68,6 90,0 2,0
PRUEBA S
Acetato (utilización) 68,6 90,0 2,0
Mucato (fermentación) 10,8 10,8 0
Esculina (hidrólisis) 5,9 35,0 0
Arginina dihidrolasa 33,3 17,0 5,0
Lisina descarboxilasa 39,2 90,0 0
Ornitina descarboxilasa 59,8 65,0 1,0
Arabinosa (fermentación) 96,1 99,0 60,0
Dulcita (fermentación) 14,7 60,0 2,0
Glucosa (ácido) 100 100 100
Glucosa (gas) 100 95,0 2,0
Lactosa (fermentación) 78,4 95,0 30,0
Maltosa (fermentación) 97,0 95,0 50,0
Rafinosa (fermentación) 29,4 50,0 50,0
Ramnosa (fermentación) 72,5 80,0 5,0
Sacarosa (fermentación) 16,7 50,0 0
Salicina (fermentación) 15,7 40,0 0
* Datos obtenidos de Manual of Clinical Microbiology. Murray et al. 2003
Acetato (utilización) 68,6 90,0 2,0
Mucato (fermentación) 10,8 10,8 0
Esculina (hidrólisis) 5,9 35,0 0
Arginina dihidrolasa 33,3 17,0 5,0
Lisina descarboxilasa 39,2 90,0 0
Ornitina descarboxilasa 59,8 65,0 1,0
Arabinosa (fermentación) 96,1 99,0 60,0
Dulcita (fermentación) 14,7 60,0 2,0
Glucosa (ácido) 100 100 100
Glucosa (gas) 100 95,0 2,0
Lactosa (fermentación) 78,4 95,0 30,0
Maltosa (fermentación) 97,0 95,0 50,0
Rafinosa (fermentación) 29,4 50,0 50,0
Ramnosa (fermentación) 72,5 80,0 5,0
Sacarosa (fermentación) 16,7 50,0 0
Salicina (fermentación) 15,7 40,0 0
* Datos obtenidos de Manual of Clinical Microbiology. Murray et al. 2003
SIM
cultivo como agar TSA.
Realizar suspensión bacteriana con SF y hervir 1 Realizar suspensión bacteriana con SF y hervir 1
hora.
y categoría.
el antígeno flagelar.
Procedimiento:
Estimulación de la movilidad por 7 días en el medio de Estimulación de la movilidad por 7 días en el medio de
movilidad de Craigie.
Siembra de agar tripticasa de soja a partir del medio de
movilidad Craigie.
Siembra del
Detección de DEC por PCRm1 y PCRm2 a partir de
cultivo de materia fecal. nº=299
52% 48% 78%
49,2 45,5
1,2 0