Esame Prenatale Non Invasivo del Cariotipo Fetale
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Esame Prenatale Non Invasivo del Cariotipo Fetale
E’ il test prenatale non invasivo (NIPT) tecnologicamente più avanzato e rappresenta una evoluzione dei tradizionali test di screening non invasivi che analizzano il cfDNA da sangue materno
Prenatalsafe Karyo rileva:
Aneuploidie fetali (sia quelle comuni in gravidanza che quelle meno frequenti);
Alterazioni cromosomiche strutturali fetali (delezioni e duplicazioni segmentali)
a carico di ogni cromosoma del cariotipo fetale
E’ un test prenatale non invasivo (NIPT) che consente di studiare il cariotipo fetale
Che cos’è
Nessun altro NIPT oggi disponibile offre un livello d’indagine così avanzato.
Gli altri test prenatali non invasivi analizzano solamente alcuni cromosomi fetali, quali i cromosomi 21, 18, 13, X e Y.
Il test prenatale non invasivo che studia il cariotipo fetale
Campione di sangue materno
DNA libero di origine materna
DNA libero di origine fetale
analizza il DNA fetale libero circolante nel sangue materno
Il DNA fetale libero (cfDNA) circolante nel sangue materno
Durante la gravidanza, alcuni frammenti del Dna del feto circolano nel sangue materno.
Il DNA fetale è rilevabile a partire dalla 5˚settimana di gestazione. La sua concentrazione aumenta nelle settimane successive e scompare subito dopo il parto.
La quantità di DNA fetale circolante dalla 10˚ settimana di gestazione è sufficiente per garantire l’elevata specificità e sensibilità del test.
Caratteristiche del test
Test eseguito da GENOMA
Maggiore accuratezza rispetto al Bi-test
I test di screening del primo trimestre (Bi-Test) presentano un’incidenza del 5% di falsi positivi, comportando un aumento significativo di esami invasivi non necessari, e non
rilevano il 5-15% dei casi di trisomia 21 (falsi negativi)
Gravidanze in cui è controindicata la diagnosi prenatale invasiva (es. rischio di aborto spontaneo)
Screening del primo trimestre (Bi-Test) positivo
Età materna avanzata (>35 anni)
Quadro ecografico di anomalie fetali suggestive di aneuploidia
Anamnesi personale/familiare di anomalie cromosomiche
Partner(s) della coppia portatore(i) di traslocazione cromosomica bilanciata.
Gravidanze a basso rischio (casistica limitata)
Indicazioni all’esecuzione del test
gravidanze singole ottenute mediante:
concepimento naturale
tecniche di fecondazione assistita omologhe
tecniche di fecondazione assistita eterologhe
gravidanze gemellari ottenute mediante:
concepimento naturale
tecniche di fecondazione assistita omologhe
tecniche di fecondazione assistita eterologhe
precedenti gravidanze andate a termine
precedenti gravidanze esitate in aborto spontaneo o seguite da interruzione volontaria di gravidanza
A chi è dedicato il testA tutte le donne in gravidanza con un età gestazionale di almeno 10 settimane
prevede 2 livelli di indagine
Detection rate
Il test evidenzia il 92.6%delle anomalie cromosomiche fetali rilevabili in epoca prenatale, ed il 96.2% di quelle riscontrate alla nascita
Livello di detection rate molto simile al cariotipo fetale tradizionale
Cariotipo fetale tradizionale vs
prevede 2 livelli di indagine
Detection rate
Il test evidenzia il 95.5%delle anomalie cromosomiche fetali rilevabili in epoca prenatale, ed il 99.1% di quelle riscontrate alla nascita
Plus
Livello di detection rate molto simile al cariotipo fetale tradizionalePlus
Cariotipo fetale tradizionale vs Plus
E’ consigliabile ricorrere all’utilizzo del PrenatalSafe® Karyo Plus solo in determinati contesti clinici(esempio dubbi ecografici suggestivi di sindrome da microdelezione cromosomica)
Studi di validazione pubblicati
Esempi di casi clinici
Esempio di un recente caso clinico (Caso 1)
Paziente di 31 anni
5
Risultato Negativo
Anomalie fetali ecografiche(ipoplasia del cervelletto; ventricolomegalia)
Rianalisi con Amniocentesi
20^ settimana di gestazione
12^ settimana di gestazione
Del5p15.33-13.2
Chr. 5Chr. 5
PrenatalSafe® KaryoArray-CGH
cfDNALiquido
Amniotico
34 Mb
Identifica una delezione 5p confermata con array-CGH
Paziente di 32 anni
5
Risultato Negativo
Anomalie fetali ecografiche
Amniocentesi
21^ settimana di gestazione
13^ settimana di gestazione
(difetto interventricolare, piede torto, intestino iperecogeno, dismorfismo facciale, arteria ombelicale unica)
Esempio di un recente caso clinico (Caso 2)
Del18p11.32-p11.31Chr. 18
PrenatalSafe® KaryoArray-CGH
cfDNALiquido
Amniotico
3,8 Mb
Del18q21.32-q2321,3 Mb
Identifica due delezioni (18p e 18q) confermate con array-CGH
Chr. 18
Paziente di 32 anniPortatrice di traslocazione reciproca 46,XX,t(7;9)(p15;q22)
Gravidanza ottenuta con PMA
Risultato Patologicorilevato cariotipo fetale con traslocazione sbilanciata
Anomalie fetali ecografiche
Villocentesi
12^ settimana di gestazione
11^ settimana di gestazione
(labiopalatoschisi; idrocefalia tetraventricolare, ipoplasia cuore)
Chr. 7
Chr. 9
Esempio di un recente caso clinico (Caso 3)
Risultato confermato
PrenatalSafe® KaryoArray-CGHcfDNAVilli Coriali
PrenatalSafe® KaryoArray-CGHVilli Coriali
Dup7p22.3p21.2 15 Mb Dup9p24.3-q31.1 107.5 Mb
cfDNA
Identifica una traslocazione sbilanciata confermata con array-CGH
Paziente di 35 anni
Amniocentesi(cariotipo tradizionale)
13^ settimana di gestazione
Risultato Negativo(Cariotipo fetale 46, XY)
Esempio di un recente caso clinico (Caso 4)
Anomalie fetali ecografiche(Sospetta Sindrome di DiGeorge)
20^ settimana di gestazione
Sindrome di DiGeorge
Amniocentesi
PrenatalSafe® KaryoArray-CGH
cfDNALiquidoAmniotico
Del22q11.21Sindrome di DiGeorge
Identifica una gravidanza con sindrome di DiGeorgePlus
4 Mb
Chr.22
Paziente di 33 anni(non consapevole di essere portatrice di traslocazione cromosomica)
Risultato Patologicorilevato cariotipo fetale con delezione 13q33.1q34 di 11.4 Mb
Anomalie fetali ecografiche
Villocentesi15^ settimana di gestazione
12^ settimana di gestazione
(Igroma Cistico e Sacci Giugulari)
Esempio di un recente caso clinico (Caso 5)
Paziente portatrice di traslocazione reciproca
46,XX,t(13;20)(q33;q13.3)
Risultato confermato
Chr. 13 Chr. 20
(cfDNA)
Del13q33.1q34 11.4 Mb
Identifica una traslocazione sbilanciata di origine materna
Dup20q13.33 1.9 Mb
Array-CGH(CVS)
Chr. 13 Chr. 20
(cfDNA)Array-CGH
(CVS)PrenatalSafe® KaryoPrenatalSafe® Karyo
Paziente di 40 anni
Risultato Patologicorilevata duplicazione 18p
Villocentesi
12^ settimana di gestazione
11^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 6)
Risultato confermato
Identifica una duplicazione 18p confermata con array-CGH
Chr. 18
Paziente di 38 anni
Risultato Patologicorilevata duplicazione 11p
Amniocentesi
16^ settimana di gestazione
10^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 7)
Risultato confermato
Chr. 11
PrenatalSafe® KaryoArray-CGH
cfDNALiquido
Amniotico
Dup11p15.4p15.1
16 Mb
Dup11p15.4p15.1
16 Mb
Identifica una duplicazione 11p confermata con array-CGH
Paziente di 35 anni
Risultato Patologicorilevata Delezione Xp
Amniocentesi
16^ settimana di gestazione
12^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 8)
Risultato confermato
PrenatalSafe® KaryoArray-CGH
cfDNALiquido Amniotico
delXp22.33p11.1
58.5 Mb
Identifica una Delezione Xpconfermata con array-CGH
delXp22.33p11.1
58.5 Mb
Paziente di 40 anni
NIPT(screening 5 cromosomi)
Trisomia 21 non rilevataRilevata CNV materna
Identificata causa del risultato Falso Positivo riportato dal
test eseguito da altro laboratorio
13^ settimana di gestazione
Risultato PositivoAlto Rischio per Trisomia 21
Esame eseguito da altro laboratorio
Esempio di un recente caso clinico (Caso 9)
Riduce il rischio di falsi positivi determinati da CNV materni
PrenatalSafe® KaryocfDNA
Array-CGHPrelievo ematico gestante
Riduce il rischio di falsi positivi determinati da CNV materni
Chudova et al., 2016 NEJM
Riduce il rischio di falsi positivi determinati da CNV materni
Strom et al., 2017 NEJM
Paziente di 42 anni
Risultato Patologicorilevata Trisomia 9
Amniocentesi
16^ settimana di gestazione
14^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 10)
Risultato confermato
Trisomia 9 a mosaico (20%)
Identifica una Trisomia 9 a mosaico confermata con cariotipo
PrenatalSafe Karyo®
Chr. 9
L’esito di PrenatalSafe Karyo® e dello studio del cariotipo tradizionale concordano su una Trisomia 9 (a mosaico)
46,XX[80]/47,XX,+9[20]
Paziente di 40 anni
Risultato Patologicorilevata Trisomia 22
Amniocentesi
16^ settimana di gestazione
10^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 11)
Risultato confermato
Trisomia 22 a mosaico (16%)
Identifica una Trisomia 22 a mosaico confermata con cariotipo
PrenatalSafe Karyo®
Chr.22
L’esito di PrenatalSafe Karyo® e dello studio del cariotipo tradizionale concordano su una Trisomia 22 (a mosaico)
46,XY[42]/47,XY,+22[8]
Paziente di 31 anni
Risultato Patologicorilevata Trisomia 7
Amniocentesi
16^ settimana di gestazione
12^ settimana di gestazione
Esempio di un recente caso clinico (Caso 12)
Risultato confermato
Trisomia 7 a mosaico (4%)
Identifica una Trisomia 7 a mosaico confermata con cariotipo
PrenatalSafe Karyo®
Chr. 7
L’esito di PrenatalSafe Karyo® e dello studio del cariotipo tradizionale concordano su una Trisomia 7 (a mosaico)
46,XX[48]/47,XX,+7[2]
Studio Prospettico
Fiorentino et al., submitted
Background Conventional cfDNA-based NIPT approaches focus on detection of common
trisomies and sex-chromosome aneuploidies.
This leaves a gap of approximately 17% of clinically relevant chromosomal/subchromosomal abnormalities that would go undetected.
Previous studies have shown the potential of extending conventional NIPT to detect fetal microdeletion syndromes from maternal plasma (Peters et al., 2011; Srinivasan et al., 2013).
Other studies showed how genome-wide cfDNA testing can contribute in lowering the incidence of false positive results generated by maternal copy number variants (Snyder et al., 2015; Chudova et al., 2016).
At present, there are limited data available on the potential of genome-wide screening to detect rare autosomal trisomies and structural chromosome anomalies in a general population of pregnant women.
Aim of the study
From December 2015 through May 2016, genome-wide cell-free fetal DNA(cfDNA) testing was offered to pregnant women undergoing conventionalcfDNA-based non-invasive prenatal testing (NIPT) for common fetalaneuploidy.
We aimed to compare the performance of the two test in a general obstetricalpopulation.
Demographic and pregnancy characteristics
Characteristics nNo. of eligible patients 12.114Maternal age-yr- Mean ±SD 35.3±4.1- Min-max 20-58Gestational age at sample collection -wk- Mean ±SD 12.3±2.1- Min-max 10-29Indications for NIPT- Parental Anxiety 3804 (31.4%)- Advanced maternal agea 4446 (36.7%)- Positive prenatal screen 1199 (9.9%)- Fetal ultrasound abnormality 472 (3.9%)- Prior pregnancy with fetal aneuploidy 157 (1.3%)- More than one indication 2035 (16.8%)
Results of samples testedTotal
No. of patients analyzed 12.114
Samples with a call - no. (%) 12.078 (99.7)
Total cancellations - no. (%) 182 (1.5)
- Samples with low FF - no. (%) 145 (1.2)
- Samples with assay failure - no. (%) 36 (0.3)
Samples with a conclusive result - no. (%) 11.932 (98.5)
Chromosomally abnormal results- Genome-wide cfDNA screening - no. (%) 196 (1.6)
- Conventional cfDNA screening - no. (%) 166 (1.4)
Pregnancies confirmed as chromosomally abnormal - no. (%)- Genome-wide cfDNA screening - no. (%) 169 (1.4)
- Conventional cfDNA screening - no. (%) 151 (1.3)
Clinically relevant chromosomal abnormalities classes detected by genome-wide cfDNA analysis
Types of chromosome anomalies detected by conventional and genome-wide cfDNA testing
^ Clinically relevant chromosomal abnormalities, not detected by conventional cfDNA screening, potentially resulting in the birth of babies with chromosomal anomalies, have been considered as false negative. § A P-value of less than 0.05 was considered to indicate statistical significance (**).
Performance of conventional cfDNA screening vs. genome-wide analysis
Conventional cfDNA
screening
Genome-wide cfDNAscreening
P-value§
No. of pregnancies assessed 11.932 11.932Clinical relevant chromosomal abnormalities detected - no. (%) 166 196
Pregnancies confirmed as chromosomally abnormal - no. (%) 151 169
False Positive 15 27False Negative 12* 0True Positive 151 169True Negative 11.754 11.736Sensitivity 92.64% 100.00% <0.001Specificity 99.87% 99.77% 0.064Positive Predictive Value (PPV) 90.96% 86.22% 0.161Negative Predictive Value (NPV) 99.90% 100.00% <0.001
Performance of the Genome-wide cfDNA screening
Conclusion
The clinical utility of expanding NIPT to cover the entire genome iscontroversial, especially in low-risk pregnancies. In fact, it pertains a risk ofoverdiagnosis with a higher number of false positives because ofchromosomal rearrangements which are confined to the placenta, potentiallyleading to an increase in unnecessary invasive testing.
The results of this study demonstrate that a high specificity may bemaintained while extending the screen to all chromosomal abnormalities.
La tecnologia
La Tecnologia del test
Tecnologia di sequenziamento totale del genoma fetale
Tecnologia di nuova generazioneMigliore qualità dei risultati
Totale Automazione e High Throughput
Procedura di laboratorio completamente automatizzata, dall’estrazione del DNA all’analisi dei dati
Capacità di analisi di elevati volumi di campioni
L’introduzione del Sequenziamento bidirezionale (Paired-end) del genoma fetale raddoppia il numero di letture, migliorando l’affidabilità del test.
Maggiore risoluzione
Tecnologia di nuova generazioneMigliore qualità dei risultati
Determinazione della frazione fetale più accurata
Differenziazione del DNA di origine fetale da quello maternoin base alla differente lunghezza
Tecnologia di nuova generazioneMigliore qualità dei risultati
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
rileva le aneuploidie anche a bassa FF (<4%)
rileva le aneuploidie anche a bassa FF (<4%)
Le linee guida Italiane e Internazionali* concordano nel dedicare particolare attenzione ai campioni a bassa frazione fetale in quanto ritenuti a maggiore rischio (da 4 a 10 volte) di aneuploidie cromosomiche
*-Ministero della Salute. Linee-Guida Screening prenatale non invasivo basato sul DNA (Non Invasive Prenatal Testing – NIPT). Maggio 2015-Committee Opinion No. 640: Cell-free DNA Screening for Fetal Aneuploidy. Obstet Gynecol 2015; 126:e31-7.-Society for Maternal-Fetal Medicine (SMFM) Publications Committee #36: Prenatal aneuploidy screening using cell-free DNA. Am J Obstet Gynecol2015;212:711-6.-Benn P, Borrell A, Chiu RW, et al. Position statement from the Chromosome Abnormality Screening Committee on behalf of the Board of the International Society for Prenatal Diagnosis. Prenat Diagn 2015; 35:725-34.
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
Fiorentino et al., Prenatal Diagnosis (2016) 36:304-311
Validazione pre-clinica del test
Fiorentino et al., EJHG conference 2016
Performance del test su casi clinici
Performance procedura Standard
Performance procedura FAST
Procedura e Servizi gratuiti
Procedura semplice ed intuitiva
Servizi gratuiti forniti con il test
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