Ensayos fitoquimicos_noPW
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ENSAYOS FITOQUMICOSCualitativos: Permiten detectar la presencia de grupos de principios activos en las drogas. Suelen ser ensayos de coloracin y/o de precipitacin
Hetersidos cianogenticos
Hetersidos saponnicos Compuestos Fenlicos
Alcaloides
Flavonoides
Taninos
Hetersidos antraquinnicos
Cuantitativos: Se emplean para valorar la cantidad de principio activo de una droga. El peso de la droga debe ser exacto.
Extraccin y valoracin de grasa
Valoracin del contenido de aceite esencial
Inicio
HETERSIDOS CIANOGENTICOSPrincipios activos de algunas drogas (por ejemplo, hoja de laurel cerezo) que al hidrolizarse originan gas CNH. Este desprendimiento puede detectarse suspendiendo en el interior de un matraz erlenmeyer una tira de papel picrosdico (cido pcrico y carbonato sdico) de color amarillo que se transforma por el CNH desprendido en cido isopurprico de color naranja. PRCTICA: pesar la droga, aadir agua, tapar sujetando la tira de papel y calentar en bao mara hasta que aparezca color naranja. Con el agua y el calor se favorece la accin del enzima hidroltico que existe en la propia drogaCN CH O C 6 H11 O5
EmulsinaC O H
+
C 6H12O 6
+ CNH
Prunassido
Papel picrosdico 0,5 g droga 15 ml H2OO2N
OH NO2 O2N
OH NHOH CN NO2
CNHNO2
Ac. Pcrico (amarillo)
Ac- Isopurprico (naranja)
HETERSIDOS SAPONNICOSSon principios activos de drogas con actividades farmacolgicas diversas: expectorantes, antiulcerosas, adaptgenas, hipoglucemiantes..... Son sustancias afrgenas (producen espuma por agitacin de sus soluciones acuosas) y al disminuir la tensin superficial de los lquidos, favorecen la formacin de emulsiones. La mayora son hemolticas. Son solubles en agua y cloroformo. Las geninas pueden ser esterodicas o triterpnicas. Las esterodicas reaccionan con dicromato potsico en medio sulfrico dando color verde. PRACTICA: La prctica consiste en observar la produccin de espuma persistente (agitar fuertemente dos tubos, uno con extracto y otro con agua), su accin emulsificante (agitar fuertemente dos tubos, uno con diclorometano y agua y otro con diclorometano y extracto) y la naturaleza qumica de la genina (en un tubo de ensayo vaco y seco realizar la mezcla crmica aadiendo cido sulfrico concentrado y una pequea cantidad de dicromato potsico slido hasta color naranja, verter esta mezcla con sumo cuidado resbalando por las paredes sobre otro tubo de ensayo con extracto, en caso positivo aparecer un anillo verde esmeralda en la zona de contacto entre la mezcla crmica y el extracto).E
Testigo
1g droga 30 ml H2O
E
A
Agitar = espuma E = extracto A = agua
E
T
Agitar + DM = emulsin E= extracto + DM T = agua + DM
M. Crmica SO4H2 + Cr2O7K2
ALCALOIDESGrupo de principios activos muy importante debido a sus actividades farmacolgicas. Se definen en general (existen excepciones) como compuestos con nitrgeno en su molcula, reaccin bsica dbil, biogenticamente derivados de aminocidos y de actividad farmacolgica potente. En la naturaleza pueden estar libres o combinados con cidos orgnicos u otros compuestos (taninos). Cuando estn libres son solubles en disolventes orgnicos y alcohol e insolubles en agua. Cuando estn en forma de sales son solubles en agua y alcohol e insolubles en disolventes orgnicos. Con reactivos yodados forman precipitados coloreados (Dragendorff anaranjado, Mayer blanco y Bouchardat pardo).
Se pueden extraer en medio cido/acuoso, extraccin sencilla pero poco selectiva o en medio alcalino/disolvente orgnico, extraccin mas selectiva pero mas compleja.
Extraccin cida
Extraccin alcalina
ALCALOIDESPara la extraccin cida realizar un extracto acuoso en caliente con agua acidulada con cido clorhdrico, filtrar y en el filtrado comprobar la presencia de alcaloides con los reactivos yodados.
1.- EXTRACCIN CIDATestigo Bouchardat (I + IK) 1g droga 20 ml H2O 2-3 ml ClH 10% Mayer (IK + HgCl2)
Dragendorff(IK + Subnitrato de bismuto)
ALCALOIDESPara la extraccin alcalina, realizar una extraccin en fro con ter etlico despus de humedecer la droga con 1 ml de una solucin de amoniaco. Agitar fuertemente el frasco, abriendo cada cierto tiempo el tapn, dejar reposar y decantar filtrando sobre un embudo de decantacin. Este proceso se repite dos veces para agotar el marco de la droga. Aadir al embudo 5 ml de una solucin cida para extraer de la fase orgnica los alcaloides libres en forma de sales, agitar para favorecer la extraccin y separar la fase acuosa. Este proceso se repite dos veces para que la extraccin sea ms eficaz. Sobre las fases acuosas obtenidas, se comprueba la presencia de alcaloides con los reactivos yodados.2.- EXTRACCIN LCALINA1 g droga 1 ml NH3 10% 10 ml Eter etlico
AgitarDecantarMtodo B
x2 + 5 ml ClH 10%
Agitar
x2
Separar fase acuosa
Testigo Bouchardat (I + IK) Mayer (IK + HgCl2)
Dragendorff(IK + Subnitrato de bismuto)
FLAVONOIDESPrincipios activos derivados de la cromona muy frecuentes en los vegetales que poseen actividades farmacolgicas de gran inters. Poseen grupos hidroxlicos fenlicos reactivos por lo que actan sobre diferentes estructuras biolgicas activndolas o inhibindolas PRCTICA: preparar el extracto en agua en caliente (bao mara) 10 min, agitando de vez en cuando. Filtrar con filtro de pliegues. Como todos los compuestos fenlicos, con sales de hierro dan color o precipitados, en este caso se produce coloracin verdosa. Los flavonoides, se solubilizan en soluciones alcalinas diluidas (KOH, NaOH) dando coloracin amarillo intenso. Si al extracto acuoso se le adicionan 2 o 3 gotas de solucin de KOH, se observa una intensificacin del color amarillo.
O
FLAVONOIDESO
Testigo
1g droga 30 ml H2O
II III FeCl3
II III KOH
HETERSIDOS ANTRAQUINNICOSPrincipios activos con geninas derivadas del antraceno. Las 1,2 dihidroxiladas son colorantes naturales. Las 1,8 dihidroxiladas poseen actividad laxante o purgante dependiendo de la dosis. Los hetersidos son solubles en agua, las geninas libres son insolubles en agua pero pueden solubilizarse en medio acuoso-alcalino dando color rojocereza. Es la reaccin de Borntreger que sirve para reconocer las geninas oxidadas y solubilizarlas.O
ANTRAQUINONAS
8
1
OH
O
0,2 g droga 20 ml H2O + 1 ml NaOH 10%
BORNTRGER BORNTREGER (geninas 1,8 dihidroxiladas)
Hetersidos + Geninas
TANINOSCompuestos polifenlicos de elevado peso molecular. Tienen propiedades antioxidantes, antidiarreicas, cicatrizantes. Precipitan protenas por lo que se han empleado como curtientes. Al precipitar las protenas de la saliva producen sensacin de acorchado en la boca (astringencia). Pueden clasificarse en glicos o hidrolizables y catquicos, no hidrolizables o condensados. Los taninos glicos estn constituidos por unidades de los cidos glico o hexahidroxidifnico (semejante a elgico) y se hidrolizan con facilidad con cidos y calor. Con sales de hierro dan precipitados azul oscuro. Los taninos catquicos poseen como unidad qumica la catequina. Con cidos, en presencia de un donador de grupos metilnicos y en caliente se polimerizan y oxidan formando precipitados algodonosos de color rosceo denominados flobafenos. Con sales de hierro dan precipitados de color verdoso. PRCTICA Realizar una extraccin acuosa en caliente, filtrar y comprobar la presencia de taninos con FeCl3. Comprobar la astringencia. Deteccin de T. catquicos: a 15 ml del extracto acuoso se le adiciona igual volumen de reactivo de Stiasny (mezcla de HCL y formol 1:1), se acopla una varilla refrigerante y se mantiene 30 min en bao Mara. Observacin de aparicin de precipitados. Filtrar. En el papel de filtro detectar el precipitado de taninos catquicos aadiendo sobre el papel con precipitado unas gotas de Fe3Cl y amoniaco (para alcalinizar). Si es positivo aparecer color azul-verdoso. En el filtrado detectar la presencia de taninos glicos aadiendo a una pequea fraccin (tubo de ensayo) Fe3Cl y acetato sdico. Si es positivo aparecer color azul.
TANINOSCOOH
GlicosHO OH OH
TANINOS CatquicosHO
O
OH OH
Testigo (astringencia)
II III FeCl3 1g droga 50 ml H2O 1- I FeCl3 2- I NH3
15 ml extracto 15 ml r. STIASNY ClH + Formol (1:1) 30 min 1- I FeCl3 2- Acetato Na
ENSAYOS CUANTITATIVOSSe emplean para valorar la cantidad de principio activo de una droga. El peso de la droga debe ser exacto.
Extraccin y valoracin de grasa
Valoracin del contenido en aceite esencial
Extraccin y valoracin por gravimetra del contenido lipdico de una drogaSe emplea un extractor Soxhlet, sistema de extraccin/valoracin en caliente que rene dos formas de extraccin: maceracin y percolacin. Consta de tres partes: matraz, cuerpo intermedio y refrigerante. Procedimiento 1. Pesar exactamente el matraz, incluyendo algn fragmento de porcelana porosa para regular la ebullicin 2- Pesar exactamente la droga e introducirla en un cartucho dentro del cuerpo intermedio. 3 Conectar el refrigerante. 4 Aadir el disolvente (ter de petrleo para extraer grasa). 5 Calentar para realizar la extraccin. 6 Eliminar el disolvente y pesar el matraz con la grasa. La diferencia entre el matraz vaco y el matraz con el residuo nos indicar la cantidad de grasa en los x gramos de droga extrados.
Para ver vdeo pinchar en l
SOXHLET
Refrigerante
El disolvente llega a la altura del sifn
El lquido extractivo cae al matraz
Cuerpo intermedio (droga)
Matraz
Valoracin de aceite esencialSe emplea el mtodo de Clevenger que est incluido en la Real Farmacopea Espaola. Se basa en que los aceites esenciales, mezclas complejas, son voltiles y arrastrables por corriente de vapor de agua. Consta de tres partes: matraz de fondo redondo, bureta Clevenger para recoger y medir el volumen de aceite esencial y refrigerante. Procedimiento: Se calienta el matraz con el agua y la droga exactamente pesada. El vapor arrastrar las gotitas de aceite esencial hacia el refrigerante donde se condensar cayendo hacia la bureta agua y aceite. Como el aceite esencial es, en general, menos denso que el agua, queda en la parte superior de la bureta, mientras que el agua, ir hacia la parte inferior, retornando al matraz. Al cabo de 1 o 2 horas, se enfra y se mide en ml el aceite esencial obtenido (V). Si en X g se han obtenido V ml y conocemos la densidad (d) del aceite esencial de la planta destilada: X g ------------- d x V ml 100 ------------- Y % de aceite esencial en la droga
Agua + AEml
Agua Vapor de agua + AE
AE
Agua Agua
Calor