ENGENHARIA GENÉTICA. FERRAMENTAS Enzimas: de restrição, DNA-ligase, DNA-polimerase, transcriptase...
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ENGENHARIA GENÉTICA
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FERRAMENTAS
Enzimas: de restrição, DNA-ligase, DNA-polimerase, transcriptase
Vetores: plasmídeos, vírus
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O número de genes é muito menor do que o esperado (cerca de 25.000) e não corresponde ao número de proteínas (cerca de 100.000)• A espécie humana compartilha uma
quantidade muito grande de genes com outras espécies
• A complexidade do organismo não está relacionada ao número de genes que ela apresenta.
• Apenas menos de 2% de nosso material genético corresponde a regiões codificadoras
PROJETO GENOMA HUMANO
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• Regiões intergênicas: entre os genes• Regiões intrônicas (íntrons): dentro dos genes
Transcrição de RNAm no núcleo: Splicing (Editoração)
pré-RNAm RNAm (com íntrons) (sem íntrons)
Cada gene pode apresentar 8 a 9 íntrons splicing alternativoÞ Maior variedade de proteínas do que de genes
• Procariontes: têm pouco ncDNA e não têm íntrons• Na evolução dos eucariontes, houve aumento do genoma, sem
aumento do número de genes (maior proporção de “DNA-lixo”)• Espécie humana: 92% dos genes apresentam íntrons
DNA-lixo, DNA não-codificador ou ncDNA
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• As regiões de ncDNA foram ultra conservadas durante a evolução função importante
• O controle do metabolismo é exercido por proteínas e também de moléculas de RNA: ncRNAs, produzidos a partir de ncDNAs
• Vantagens da utilização de RNA na regulação: são rapidamente produzidos a produção depende de menor gasto de energia interagem com o DNA, RNAs e proteínas
• A complexidade dos organismos está relacionada com a transcrição de ncRNAs
Função do ncDNA
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• Regulação da editoração alternativa, inibição da tradução, localização celular de proteínas, desligamento de genes, etc
OBS: outras formas de desligamento dos genes são:
• metilação: um conjunto de partículas de hidrogênio e carbono (CH3) é capaz de se agrupar na base de alguns genes e “silenciá-los”;
• modificação das histonas: estímulos externos podem alterar essas proteínas e tornar o DNA mais frouxo;
Controle EPIGENÉTICA
Função do ncRNA
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CONSEQUÊNCIAS DESSES ESTUDOS
•alteração do dogma da biologia: as proteínas não seriam os únicos componentes finais do fluxo de informações genéticas
•alguns RNAs não codificam proteínas
•alteração do conceito de gene: um mesmo gene pode formar várias proteínas
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2) PCR: Reação em cadeia da polimerase
• Gene é isolado e adicionado a solução com nucleotídeos, primers, DNA-polimerase
• Solução é aquecida a 95ºC, resfriada a 50ºC e reaquecida
• A quantidade de DNA aumenta exponencialmente
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3. DNA-RECOMBINANTE
Importante:
• Universalidade do código genético
• Utiliza material genético já editorado
Produção comercial: insulina, fatores de coagulação, eritropoetina, GH
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4. TERAPIA GÊNICA
Transferência do gene normal para células específicas
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5. TRANSGÊNICOS
Vantagens: minimizam a utilização de pesticidas, são mais produtivos ou mais resistentes, podem aumentar a produtividade sem aumentar a área de cultivo
Desvantagens: seus efeitos tóxicos não foram completamente avaliados, podem eliminar os pequenos agricultores, podem reduzir a biodiversidade
Organismos que recebem, incorporam e manifestam genes de outras espécies
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6. CLONAGEM
Formação de organismos geneticamente idênticos
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7. Formação de células-tronco
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8. DNA Fingerprint
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Vantagem: aplicação de uma única dose
9. Vacinas de DNA