Ematolab 2015

MULTIPLE MYELOMA: NEW SURFACE ANTIGENS FOR THE

CHARACTERIZATION OF PLASMA CELLS IN THE ERA OF NOVEL AGENTS

Vittorio Emanuele Muccio

Laboratorio di Citofluorimetria Divisione Universitaria Ematologia Prof. M. Boccadoro

Azienda Ospedaliero Universitaria Città della Salute e della Scienza di Torino

Incontri informali di aggiornamento e confronto sulla ricerca di laboratorio

Divisione Universitaria di Ematologia - Torino


Citofluorimetria: come funziona


Citofluorimetria: finalità

Caratterizzare

Quantificare Identificare


Le plasmacellule in citofluorimetria

Marcatori per identificare le plasmacellule


MALIGNE



CD38 perché?

CD138 perché?

CD40 Linfociti B e Antigen-Presenting Cells

CD31 Piastrine, monociti, neutrofili e linfociti T


Marcatori utilizzati per identificare le plasmacellule maligne

CD117

CD13

CD14 CD15

CD20

CD10

CD27 CD19

CD9 CD11b CD40

CD31

CD41

CD56 CD45

CD28

CD23

CD22

CD33 CD24

CD25

CD37

CD39

CD71

HLA-DR

CD44 CD4

CD8

CD81

CD38

CD200


Marcatori più utilizzati nell’identificazione delle plasmacellule maligne

Espressione monoclonale delle catene intracitoplasmatiche kappa o lambda

Linfociti NK

CD56

Cellule mieloidi

CD117

CD33

Linfociti T

CD27

CD28

CD45

Linfociti B/PC

CD27

CD19

CD20

CD81

CD10

Tohami et al. 2007 FASEB J Paiva et al. 2012 Leukemia

Robillard et al. 1998 Clin Cancer Res. Guo et al. 2015 Haematology

Shim et al. 2014 Biomed Res Int. Sahara et al. 2006 Eur J Haematol

Moureau et al. 2004 Haematologica Pellat-Deceunynck et al. 2004 Blood Cells Mol Dis Kumar et al. 2005 Leukemia

Guo et al. 2015 Haematologica

Liu et al. 2014 Hematol Oncol

Bataille et al. 2008 Leuk Res Guo et al 2015 Haematologica

= Espressione ridotta nelle PC di MM rispetto alle PC sane

= Espressione aumentata nelle PC di MM rispetto alle PC sane

= Espressione correlata a prognosi favorevole

= Espressione correlata a prognosi sfavorevole o ridotta sopravvivenza


9th International Conference on

Human Leukocyte Differentiation Antigens (HLDA9)

82 Molecole di superficie

5 Linee cellulari di MM 20 MM alla diagnosi


Famiglie in cui è possibile raggruppare gli antigeni studiati

SIALOADESINE

SLAM

INTEGRINE TNF/TNFR

IRTA CITOCHINE-R

CHEMOCHINE-R CD28/B7 TLR/C-TYPE LEC R


#mAb CD LP1 U266 OPM-2 NCI-H929 KMS-12-BM

29 CD86 1,0 6,3 2,3 13,4 74,1 33 CD83 64,8 1,8 1,0 1,5 43,0 34 CD152 (CTLA-4) 2,5 5,8 27,3 9,6 3,1 36 CD126 30,5 82,7 98,7 91,9 97,1 41 CD130 1,0 32,4 58,4 7,7 22,9 46 CD184 98,4 58,1 45,7 1,0 84,3 55 DR4 1,8 4,9 56,0 2,3 44,1 57 DR5 95,6 1,7 29,1 17,0 63,2 85 GITR 3,3 97,7 17,8 10,3 18,7 86 CD229 (Ly9) 89,6 92,7 99,7 96,1 6,1 87 CD319 (CRACC) 2,2 3,3 99,9 20,7 6,7 88 CD48 14,4 3,5 99,8 86,2 34,4 89 CD84 29,4 1,4 1,5 2,4 1,0 93 NTBA 41,3 98,0 1,0 1,9 1,0 94 HVEM (TR2) 15,2 34,4 10,8 25,7 97,9 235 BAFF-R 1,0 1,5 1,0 2,7 96,1 237 BAFF 5,2 33,5 87,0 88,5 57,9 239 B7-H2 1,7 3,8 2,2 10,5 44,5 242 LAIR1 92,4 1,8 1,0 2,3 1,0

Antigeni positivi in almeno una linea cellulare di MM


# mAb Specificity Conjugated fluorochrome CD Isotype Ab Species % of positive MM samples

20 FCRL1 PE CD307a IgG1k Mouse 0 21 FCRL2 PE CD307b IgG2Ak Mouse 0 22 FCRL3 PE CD307c IgG2Bk Mouse 0 23 FCRL4 PE CD307d IgG2Ak Mouse 0 28 Siglec-7 PE CD328 IgG1k Mouse 0 29 B7-2 PE CD86 IgG1k Mouse 64* 30 IL-10R PE CD210 IgG2ak Rat 0 31 CCR7 PE CD197 IgG2ak Rat 0 32 Siglec-9 PE CDw329 IgG1k Mouse 0 33 HB15 PE CD83 IgG1k Mouse 0 34 CTLA-4 PE CD152 IgG2ak Mouse 0 35 B7-1 PE CD80 IgG1k Mouse 0 36 IL6-Rα PE CD126 IgG1k Mouse 45 37 PD1 PE CD279 IgG1k Mouse 0 38 B7-DC PE CD273 IgG1k Mouse 0 39 IL-4Rα PE CD124 IgG1k Mouse 0 40 OX2 PE CD200 IgG1k Mouse 70* 41 gp130 PE CD130 IgG1k Mouse 45 42 IL-12R PE CD212 IgG1k Mouse 0 43 Siglec PE CD328 IgG1k Mouse 0 44 CCR2 A647 CD192 IgG2b Mouse 18 45 ICOS PE CD278 IgG1 Mouse 0 46 CXCR4 PE CD184 IgG2ak Mouse 64* 47 BTLA PE CD272 IgG1k Mouse 64* 48 CCR6 PE CD196 IgG1k Mouse 18 49 TACI PE CD267 IgG2ak Rat 0 50 CXCR5 A647 CD185 IgG2bk Rat 45 51 Integrin beta 7 chain PE NONE IgG2ak Rat 0 52 CCR1 A647 CD191 IgG2bk Mouse 27 53 Integrin beta 5 PE NONE IgG1 k Mouse 0 54 B7-H4 PE NONE IgG1 k Mouse 0 55 DR4 PE CD271 IgG1 k Mouse 0 56 CMKLR1 PE NONE IgG2a k Rat 0 57 DR5 PE CD262 IgG1 k Mouse 18 74 Integrin beta 6 PE NONE IgG2b Mouse 0 75 Dectin-1/CLEC7A PE NONE IgG2b Mouse 0 76 TREM-1 PE NONE IgG1 Mouse 10 77 Siglec-5/Siglec-14 APC CD170 IgG1 Mouse 0 78 AMICA PE NONE IgG2a Mouse 0 79 BLT1/LTB4R1 PE NONE IgG1 Mouse 10 80 Siglec-9 APC CD329 IgG2a Mouse 0 81 IL-23-R PE NONE IgG2b Mouse 9 82 Integrin alfaVbeta5 PE NONE IgG1 Mouse 0 83 CRTAM PE CD355 IgG2b Mouse 0 84 DCIR/CLEC4A PE NONE IgG1 Mouse 0 85 GITR PE NONE IgG1k Mouse 0 86 Ly9 PE CD229 IgG1k Mouse 100* 87 CRACC PE CD319 IgG2b k Mouse 100* 88 BLAST-1 PE CD48 IgG1k Mouse 100* 89 SLAMF5 PE CD84 IgG2a k Mouse 17 90 Toll-like Receptor 3 PE CD283 IgG2a k Mouse 0 91 DcR3 PE NONE IgG1k Mouse 9 92 DR3 (TRAMP) PE NONE IgG1k Mouse 0 93 NTBA PE NONE IgG1k Mouse 100* 94 HVEM PE CD270 IgG1k Mouse 45 95 TSLPR PE NONE IgG1k Mouse 0 96 TWEAK PE CD255 IgG3 k Mouse 0 97 TCL1 PE NONE IgG2b k Mouse 0 98 Galectin-3 (Mac-2) PE NONE IgG1k Mouse 0 99 GITR-L PE NONE IgG1k Mouse 0 100 Lymphotoxin beta receptor PE NONE IgG2b k Mouse 0 101 TREM-1 PE NONE IgG1k Mouse 0 106 SLAM PE CD150 IgG1k Mouse 67* 109 S1PR1 PE CD363 IgG2B Mouse 0 234 IL-15Ralfa PE NONE IgG2b k Mouse 0 235 BAFF-R PE CD268 IgG1 k Mouse 20 236 LIGHT PE CD258 IgG2b k Mouse 20 237 BAFF PE CD257 IgG1 k Mouse 40 238 CD274 PE CD274 IgG2b k Mouse 45 239 B7-H2 PE CD275 IgG2b k Mouse 20 240 CD267 PE CD267 IgG2a k Rat 20 241 NKG2D PE CD314 IgG1 Mouse 0 242 LAIR1 PE CD305 IgG2b Mouse 0 243 DEP-1 PE CD148 IgG1 Mouse 20 244 Syndecan-2 PE NONE IgG2b Rat 20 245 CXCR7/RDC-1 PE NONE IgG2a Mouse 0 246 IL21R PE NONE IgG1 Mouse 0 247 Toll-like Receptor 9 PE CD289 IgG2a k Rat 0 249 TACI PE CD267 IgG2a Mouse 40 250 ABCG2 PE CDw338 IgG2b k Mouse 0 251 BR3 PE CD268 IgG2a k Mouse 0 252 BLyS PE CD257 IgG1 k Mouse 0

Nella colonna di destra è riportata la

percentuale di pazienti alla diagnosi

di MM positivi per quel determinato antigene. Solo gli

antigeni espressi in >50% dei pazienti

sono stati selezionati per la fase successiva

dello studio.

# mAb

Specificity Conjugated fluorochrome

CD Isotype Ab Species % of positive MM samples

29 B7-2 PE CD86 IgG1k Mouse 64* 40 OX2 PE CD200 IgG1k Mouse 70* 46 CXCR4 PE CD184 IgG2ak Mouse 64* 47 BTLA PE CD272 IgG1k Mouse 64* 86 Ly9 PE CD229 IgG1k Mouse 100* 87 CRACC PE CD319 IgG2b k Mouse 100* 88 BLAST-1 PE CD48 IgG1k Mouse 100* 93 NTBA PE NONE IgG1k Mouse 100* 106 SLAM PE CD150 IgG1k Mouse 67*

Anticorpi testati


Seconda fase dello studio

24 nuove diagnosi MM 8 recidive di MM 6 PCL

13 soggetti sani

CD86 CD200 CD272 CD184

CD229 CD319 CD352 CD150

CD48


Percentuale di PC positive

0

20

40

60

80

100

120

CD150 CD229 NTBA CD319 CD48 CD272 CD184 CD28 CD200

Percentage of positive PCs

pc poli mm dia

mm rec pcl

* *

*

*

°

°


Percentuale di PC positive

%PC

Healthy

MM diagnosis

MM relapse

PCL

Kruskal-Wallis

(Post test p-value)

Median (range)

Median (range)

Median (range)

Median (range)

CD150

84.2 (48 - 98.7)

57.05 (3.3 - 100)

15 (6.2 - 99.4)

86.3 (1.8 - 99.8)

0.231 (ns)

CD319

99.3 (95.7 - 100)

96.1 (51.5 - 100)

96.4 (54 - 100)

82.65 (51.9 - 99.5)

0.044 (ns)

CD229

94 (79 - 99.7)

94.55 (36 - 100)

96.15 (77.7 - 100)

99.1 (44 - 99.7)

0.926 (ns)

CD352

99.3* (96.2 - 100)

83.2* (5.6 - 100)

95.45 (9.9 - 100)

78.2 (17.5 - 99.6)

0.027 (*0.033)

CD48

95.3 (39.6 - 100)

99.45 (82.2 - 100)

92.8 (2.3 - 99.9)

98.6 (3.5 - 100)

0.087 (ns)

CD86

62.6 (20 - 98.6)

48.8 (3.1 - 100)

72.2 (9.3 - 95.3)

81.6 (10 - 96.8)

0.581 (ns)

CD272

85 (46 - 99.6)

91.75 (3.3 - 100)

77.7 (4 - 100)

99.4 (18 - 100)

0.396 (ns)

CD200

15* (4.8 - 66.9)

65.2*° (2 - 99.7)

8.15° (1.3 - 91)

34 (1.4 - 97.5)

0.001 (*0.003) (°0.024)

CD184

54.4 (13.7 - 94.7)

47.4 (2 - 100)

14.65 (1.3 - 83)

19.2 (2.4 - 90.8)

0.129 (ns)


Mean fluorescence Intensity delle PC positive

0

2000

4000

6000

8000

10000

12000

CD150 CD229 CD352 CD319 CD48 CD272 CD184 CD86 CD200

MFI of positive PCs

MM Diangosis

MM Relapse

PCL

Healthy

* *

*

*

^

^

^

^

*

*

+

+


Mean fluorescence Intensity delle PC positive

MFI

Healthy

MM diagnosis

MM relapse

PCL

Kruskal-Wallis

(Post test p-value)

Median (range)

Median (range)

Median (range)

Median I (range)

CD150

2851* (982 - 4711)

899* (0 - 7352)

467 (56 - 4866)

1237.5 (106-3419)

0.008 (*0.012)

CD319

4433*^ (1890 - 9055)

1742.5* (363 - 4093)

1199.5 (179 - 5024)

859^ (674 - 1461)

< 0.001 (*< 0.001) (^0.004)

CD229

4369^ (1905- 6532)

2923.5 (625 - 8774)

3189 (663 - 9494)

2033.5^ (518 - 3359)

0.051 (^0.045)

CD352

7819*+

(1607- 11560) 2237*

(108 - 11909) 2191.5

+

(388 - 6734) 1636.5

(148 - 3124) < 0.001

(*< 0.001) (+ 0.008)

CD48

11300 (2344 - 25808)

10526.5 (2133-40378)

5978.5 (59 - 48388)

8196 (257 - 18189)

0.370 (ns)

CD86

1543 (527 - 5422)

717.5 (60 - 6633)

1492.5 (526 - 2387)

858 (150 - 1743)

0.262 (ns)

CD272

6150 (917 - 10705)

5745.5 (0 - 28420)

2909.5 (47 - 16996)

5107 (861 - 8844)

0.606 (ns)

CD200

356 (38 - 4498)

1036.5 (0 - 5099)

251 (12.1 - 2322)

273.5 (112-1027)

0.013 (ns)

CD184

1200 (213 - 5922)

1617.5 (0 - 9005)

323.5 (0 - 3237)

241 (90 - 4956)

0.223 (ns)


0

20

40

60

80

100

CD150 CD229 CD352 CD319 CD48 CD272 CD184 CD86 CD200

Positive samples %

MM diagnosis

MM relapse

PCL

Healthy

+

+

*

* *

*

*

*

°

°

Percentuali di pazienti positivi

Pazienti positivi: pazienti in cui più del 20% delle PC esprime un

determinato antigene.


Conclusioni

CD150, CD86 e CD200 possono aiutare a differenziare PC sane da PC tumorali

Utili nella caratterizzazione delle PC nello studio della MRD dopo terapia con Lorvotuzumab (anti-CD56) o

Dacetuzumab e Lucatumumab (anti-CD40) Vittorio Emanuele Muccio

Conclusioni

CD272, CD319, CD229 e CD48 sono espressi ad alta intensità dalle PC

Bersagli terapeutici?


Conclusioni

Utili nella caratterizzazione delle PC nello studio della

MRD dopo terapia con BT062 (anti-CD138) o

Daratumumab (anti-CD38)


Grazie per l’attenzione


Ematolab 2015

Science

Transcript of Ematolab 2015