Proteinele serice indeplinesc functii variate in organism: - sursa de nutritie, - componente ale sistemelor tampon, - agenti imunologici (imunoglobulinele), - rol de carrier, asigurand transportul anumitor ioni si molecule (haptoglobina, prealbumina, transferina), - rol de reglare a activitatii diverselor enzime proteolitice (antiproteaze: alfa1-antitripsina, alfa2-macroglobulina), - rol in reglarea presiunii oncotice.DESCRIERE

Metoda curenta pentru separarea proteinelor serice utilizata in laboratoarele de biochimie medicala este electroforeza. Se utilizeaza suporturi solide si pH alcalin, la care toate componentele proteice sunt incarcate negativ si migreaza spre polul pozitiv. Pe electroforegrama, dupa colorare, proteinele apar sub forma de benzi carora li se masoara densitatea optica, fiecare banda avand un maxim de absorbtie. Prin electroforeza, in conditiile amintite mai sus, se obtin cinci fractiuni: albumina serica,1,2, si - globuline. Albumina, 1 si apar sub forma unor benzi omogene, bine definite. 2 si apar ca benzi difuze, iar fractiunea prezinta in partea sa centrala o zona mai intens colorata.

Pentru a facilita interpretarea rezultatelor va fi descrisa fiecare din cele 5 fractiuni cu proteinele componente: Albumina - scaderea albuminei serice (hipoalbuminemie) survine in stari patologice variate si are semnificatii diferite (malnutritie, malabsorbtie, sindrom nefrotic, neoplazii). Cresteri ale albuminei apar in urma deshidratarilor. In cazuri speciale, in zona de migrare a albuminei se constata o banda suplimentara, datorata unor variatii genetice fara relevanta clinica (aloalbuminemie si bisalbuminemie). Zona 1 reflecta in special concentratia serica de alfa1-antitripsina, astfel ca reducerea acestei fractiuni se intalneste in deficitul de alfa1-antitripsina asociat cu anumite boli pulmonare (emfizem cu debut precoce) si hepatice (hepatita neonatala). Cresteri se inregistreaza in toate reactiile inflamatorii (reactant de faza acuta). In cazuri rare, obtinerea unei benzi suplimentare largi in aceasta zona poate sugera prezenta alfa-fetoproteinei.

Zona 2 este constituita din 2 componente proteice: alfa2 macroglobulina si haptoglobina. Crestere de 2 apare in infectii acute, reumatismul articular acut, arterita, sindromul nefrotic, diabetul zaharat, neoplazii; scaderea acestei fractiuni se poate intalni in pancreatite acute severe, leziuni hepatocelulare, sindroame de coagulare intravasculara diseminata, anemii hemolitice, anemii megaloblastice.

Zona este alcatuita din 2 benzi distincte: 1 corespunzatoare transferinei si 2 care include fractiunile complementului C3 si C4. Al treilea component al acestei zone este beta-lipoproteina, a carei banda se poate suprapune pe cea a transferinei sau C3 sau poate fi situata in zona beta-gamma. Nivelul seric de globuline creste in anemia feripriva si ciroza biliara si scade in boli autoimune aflate in puseu activ (LES), nefroza, afectiuni hepatice, neoplazii, infectii acute si cronice. In unele cazuri de mielom multiplu de tip IgA se poate constata prezenta unui component monoclonal in aceasta zona.

Zona - gamma-globulinele sunt globulinele cele mai importante. Din aceasta categorie fac parte imunoglobulinele (IgG, IgA, IgM, IgD si IgE). Anomaliile suferite de acestea se traduc fie prin diverse deficite, fie prin hipergamaglobulinemii policlonale sau monoclonale. Procentul de -globuline scade in agamaglobulinemie, hipogamaglobulinemii si sindroame nefrotice. Hipogamaglobulinemia poate fi congenitala sau dobandita si poate fi usor detectata la electroforeza proteinelor serice atunci cand concentratiile principalelor 3 clase de imunoglobuline sunt scazute (IgG, IgA si IgM). Prezenta hipogamaglobulinemiei la adult impune continuarea investigatiilor in vederea depistarii unei posibile boli limfoproliferative (mielom cu lanturi usoare, leucemie limfatica cronica, limfoame).

In aceste cazuri, hipergamaglobulinemia se datoreaza activarii unui numar mare de clone plasmocitare care elibereaza imunoglobuline. Trebuie mentionat aspectul caracteristic cirozei alcoolice de punte beta-gama, vizualizat pe gel ca o zona intens colorata intre zonele beta si gamma. Uneori, in zona gamma se pot observa cateva benzi mici, inguste, denumite oligoclonale, intalnite la pacienti cu hepatita, boli ale complexelor imune, sindromul imunodeficientei dobandite, limfomul angioimunoblastic. Cresterile policlonale de gamaglobuline indica un proces imunologic cronic asociat cu afectiuni hepatice (hepatita cronica activa, ciroza), boli de colagen (LES, poliartrita reumatoida), neoplazii (ex. boala Hodgkin), leucemie mielo-monocitara cronica.

Gamapatiile monoclonale includ un numar mare de conditii clinice si biologice asociate de obicei cu afectiuni maligne (mielom multiplu, boala Waldenstrm, amiloidoza, limfoame) dar si cu unele afectiuni benigne sau chiar cu absenta unei modificari patologice (gamapatii monoclonale cu semnificatie nedeterminata). In aceste cazuri, se depisteaza la electroforeza proteinelor un component monoclonal (banda M), rezultat ca urmare a proliferararii unei singure clone plasmocitare. Pe gel, componentele monoclonale apar sub forma unor benzi inguste, net definite, iar dupa scanarea densitometrica, se obtin varfuri (peak-uri) caracteristice, ce pot fi intalnite oriunde intre zonele alfa si gamma, datorita mobilitatii electroforetice variabile, cel mai frecvent insa in zona gamma.

Imunoglobulinele monoclonale sunt omogene din punct de vedere structural si biochimic, fiind alcatuite dintr-un singur tip de lant usor (kappa sau lambda). In circulatie pot fi eliberate imunoglobuline complete sau numai subunitati ale acestora (ex. lanturi usoare monoclonale, denumite proteine Bence-Jones). Prezenta componentului monoclonal va fi precizata pe buletinul final de analize al pacientului, cu recomandarea de a se efectua electroforeza proteinelor serice cu imunofixare.

RECOMANDARIRecomandari pentru efectuarea electroforezei proteinelor serice: - detectarea gamapatiilor monoclonale; - evaluarea proteinelor serice si a statusului nutritional. Pregatire pacientSe recolteaza a jeun (pe nemancate) sau postprandial (dupa mese). MetodaSe foloseste metoda electroforetica (in gel agar) urmata de scanarea densitometrica a fractiunilor obtinute.

Specimen recoltat - sange. Recipient de recoltare - vacutainer fara anticoagulant cu/fara gel separator. Prelucrare necesara dupa recoltare - se separa serul prin centrifugare. Volum proba - minim 0.5 mL ser. Cauze de respingere a probei - ser hemolizat. Stabilitate proba - serul separat este stabil 4 zile la temperatura camerei sau o saptamana la 2-8 C.

Limite si interferenteVariatii fiziologice: in sarcina scade albumina si cresc 2, - si - globulinele (IgG); valori mai scazute ale -globulinelor pot fi intalnite la varstnici. Interferente medicamentoase: Albumina (scaderi): acid valproic, allopurinol, asparaginaza, azatioprina, clorpropamid, cisplatin, contraceptive orale, dapsona, dextran, estrogeni, fenitoin, ibuprofen, izoniazida, nitrofurantoin, prednison (doze mari), sargramostim. 1-globuline (cresteri): testosteron. 2-globuline: estrogeni, contraceptive orale, fenitoin (cresteri), asparaginaza (scaderi). -globuline: estrogeni, contraceptive orale (cresteri); asparaginaza (scaderi). -globuline: tratament citostatic sau imunosupresor (scaderi).

Interferente analitice: - o crestere usoara a largimii benzii de albumina poate fi datorata legarii unor medicamente (penicilina) sau a bilirubinei (pacienti cu icter); - bisalbuminemia tranzitorie (non-ereditara) poate fi intalnita ca rezultat al unui tratament medicamentos sau unei perturbari metabolice severe (ex. pancreatita); - benzi monoclonale false pot fi date de: hemoglobina libera, in cazul unui ser hemolizat sau a unei hemolize intravasculare (banda in zona 2 - ; proteina C reactiva in cantitate mare; lizozim crescut, fibrinogen (la pacientii tratati cu anticoagulante; in coagulopatii, daca sangele a fost centrifugat inainte de a coagula complet); alfa-fetoproteina in concentratii mari, seruri vechi; - vizualizarea este dificila in cazul in care banda monoclonala se suprapune peste o banda normala (ex. banda monoclonala in zona 1 va migra in aceeasi pozitie ca si transferina).

COMPONENTA SISTEMULUI ESTE: 1. Camera de migrare - Camera de migrare universala pentru electroforeza proteinelor serice, lipoproteinelor, Hb- A1, hemoglobina, electroforeza pentru urina concentrata si fluid cerebrospinal; - Permite separarea simultana pana la 20 de probe - Securitate maxima si volum redus al solutiei tampon (buffer) - Operare si curatare extrem de usoara 2. Sistem de aplicare: suport folie, rola folie, aplicator - sistem universal de aplicare BFA - sistem universal de aplicare PRA - sistem universal de aplicare CEL 3. Stabilizator de curent 300V / 50 W inclus in camera de migrare - pentru uz universal in electroforeza. - program protejat complet; - afisaj digital cu LED-uri.

4. Densitometru prevazut cu software de prelucrare automata a datelor - sistem de calcul PC cu software protejat ce lucreaza pe platforma WINDOWS NT ce permite analiza digitala a imaginii preluate prin intermediul scanner-ului inclus. - Software-ul permite generarea de masti individuale pentru scanare si analiza in cadrul aplicatiilor pentru electroforeza proteinelor serice , lipoproteinelor , Hb- A1, hemoglobina, electroforeza pentru urina concentrata si fluid cerebrospinal, Bence - Jones, izo-enzime ,imuno-fixare. - Reproductibilitate excelenta a determinarilor, viteza foarte mare pentru analiza. - Este prevazut cu baza de date pentru pacienti, graficul este printat in format A5 ilustrind graficul cu separarile, datele pacientului si analiza rezultatelor in procente, precum si valorile normale total proteina serica si observatiile laboratorului de analiza

INSTRUMENTE DE ELECTROFOREZA

Sistem complet de electroforezaLinia de analiza utilizata pentru diagnostic clinic are posibilitatea de a realiza electroforeza multiparametric: proteine serice; lipoproteine; hemoglobina; LDH, CPK, AP, gammaGT,izoamilaza; imunoelectroforeza; cercetare stiintifica. mediu de migrare: acetatul de celulozaSistemul este compus din: sursa de alimentare tip Phero-stab; cuva de migrare Model 1000; sistem de aplicare pentru probe tip CEL; sistem de analiza si interpretare (scanner, imprimanta si PC) avind programul TurboScan, specializat in analiza si interpretarea rezultatelor.

Electroforeza automata "Maestro 101 " Analizor partial-automat pentru electroforezaElectroforeze proteine serice, lipoproteine, hemoglobina, hemoglobina glicolizata, urina, CSF; Suport de migrare: gel agaroza; Costuri minime de intretinere ; Necesar minim de consumabile ; Reproductibilitate maxima ; Optiuni multiple de corectie ; Soft specializat Turbo-Scan ; Procesul de migrare, colorare, transparentizare si uscare este complet automat.