El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiológico.El laboratorio nos ayuda a conocer el...

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LABORATORIO EN EL DIAGNÓSTICO DE ENFERMEDADES INFECCIOSAS AGUIRRE VIDAL IXCHEL BOBADILLA MALDONADO JONATAN PIÑA RAMÍREZ LUIS EDUARDO ROSAS CARRERA ANA ELENA VEGA REZA KAREN ARIADNA

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  • El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiolgico.El laboratorio nos ayuda a conocer el agente etiolgico. Las enfermedades por bacterias son frecuentes por lo tanto sus estudios son los ms usados.Las enfermedades por bacterias son frecuentes por lo tanto sus estudios son los ms usados. Metodologa de la toma de la muestra.Metodologa de la toma de la muestra. Se usa desde la tincin hasta la genotipificacin.Se usa desde la tincin hasta la genotipificacin. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
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  • La ms utilizada es la tincin de GramLa ms utilizada es la tincin de Gram Ziehl- Neelsen y Kinyoun (carbol fucsina)Ziehl- Neelsen y Kinyoun (carbol fucsina) Carbol glicerol, permanganato de potasio se necesita microscopio de luz ultravioleta.Carbol glicerol, permanganato de potasio se necesita microscopio de luz ultravioleta. Tinta china hongos (Cryptococcus neoformans)Tinta china hongos (Cryptococcus neoformans) Hidrxido de potasio hongos en uas y cabello.Hidrxido de potasio hongos en uas y cabello. Blanco de Calcoflor polisacridos de la pared de hongos filamentosos y levaduriformes.Blanco de Calcoflor polisacridos de la pared de hongos filamentosos y levaduriformes. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
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  • Histopatologa. Esfrula con endosporas. Tincin calcofluor. De: Mercy Hosp Toledo OH/Brian J. Harrington Dermatofitos, tincin de hidrxido de potasio Mycobacterias, Tincin de Ziehl- Neelsen criptosporidiosis, Tincin de Kinyoun Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
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  • Fundamento InmunoensayoInmunoensayo Ag - AcAg - Ac Mtodos ms usados ContrainmunoelectroforesisContrainmunoelectroforesis InmunofluorescenciaInmunofluorescencia Prueba de aglutinacin con ltexPrueba de aglutinacin con ltex CoaglutinacinCoaglutinacin Ensayo inmunoenzimtico (ELISA)Ensayo inmunoenzimtico (ELISA) Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008.
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  • LCR, esputo, orina, suero, lquido sinovial Detecta nanogramos Requiere cantidades pequeas del especmen clnico Capa delgada de gel de agarosa 1%. Se realizan dos pozos paralelos a una distancia de 3-4mm. En un pozo se coloca la muestra y en otro el anticuerpo vs el antgeno que se desea detectar. Se pasa una corriente a travs del gel. Voltaje constante por 30-60 min. Las cargas del Ag ctodo, el Ac nodo. Si hay reaccin Ag-Ac: Se visualiza una banda de precipitacin entre ambos pozos. Tcnica
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  • Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008. Se utilizan partculas de ltex cubiertas con Acs especficos. La muestra se coloca en laminillas y se le agrega la suspensin de ltex. Se realizan movimientos rotatorios por 3-10 minutos. Si hay reaccin Ag- Ac, se observar aglutinacin macroscpica: prueba positiva. COAGLUTINACIN. Se utiliza una sepa de S. aureus productor de protena A (cepa Cowan) que son cubiertos por Acs especficos. Tcnica
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  • Kumate-Gutirrez. El laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas. Infectologa clnica 17 edicin, 2008. Identificacin de complejos Ag-Ac mediante el empleo de enzimas. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay Sobre una fase slida (nitrocelulosa, poliestireno, perlas de plstico o microtubos) son fijados los anticuerpos. Se agrega la muestra pretratada y se incuba. Se agrega un segundo anticuerpo con una enzima (peroxidasa) dirgido vs el antgeno, se incuba y se lava otra vez. Se agrega el sustrato de la enzima y se produce un cambio de color macroscpico o puede medirse con espectrofotmetro. Principios bsicos
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  • La inmunofluorescencia es una tcnica de inmunomarcacin que hace uso de anticuerpos unidos qumicamente a una sustancia fluorescente para demostrar la presencia de una determinada molcula, en un microorganismo o tejido. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas, Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas, www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf
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  • El anticuerpo marcado se hace reaccionar contra un preparado biolgico Exposicin de la muestra a una fuente de luz de onda corta (ultravioleta o azul) seleccionada. La luz emitida puede ser cuantificada con facilidad por microscopia de fluorescencia en preparados histolgicos Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas. www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf Unin Molcula fluorescente a un anticuerpo. Isotiocianato de fluorescena. REACCIN DE POSITIVA: Acoplamiento de Ag-Ac produciendo una fluorescencia.
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  • UTILIDADES: CLNICA: ETS, influenza, dengue, etc. INVESTIGACINCLNICA: INVESTIGACIN VENTAJAS VENTAJAS - Se pueden obtener resultados rpidos. -No es necesario realizar cultivos. -Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto. -Determina la identidad de un organismo muerto. VENTAJAS VENTAJAS - Se pueden obtener resultados rpidos. -No es necesario realizar cultivos. -Se puede identificar microorganismos especficos en un grupo mixto. -Determina la identidad de un organismo muerto. DESVENTAJAS DESVENTAJAS - Costos en reactivo y equipo -Debe ser realizado por personal muy especializado. DESVENTAJAS DESVENTAJAS - Costos en reactivo y equipo -Debe ser realizado por personal muy especializado. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas, Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas, www.ibt.unam.mx/computo/pdfs/met/inmunoquimica.pdf puede ser utilizada en cortes de tejidos, lneas celulares cultivadas, clulas individuales y secreciones con la finalidad de analizar la presencia y distribucin de protenas, glcidos y molculas sobre el tejido.
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  • INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: Esta se vale de un Ac primario marcado con un fluorocromo( flurescena), que reacciona con el antgeno dentro de la muestra. Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas El anticuerpo reconoce la molcula diana y se une a ella directamente. Ventajas: Es rpida. Poca sensibilidad. El anticuerpo reconoce la molcula diana y se une a ella directamente. Ventajas: Es rpida. Poca sensibilidad.
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  • Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
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  • INMUNOFLUORESCENCIA INDIRECTA: Hace uso de dos anticuerpos; el anticuerpo primario es el que reconoce y se une a al molcula diana, mientras que el secundario que es el que se encuentra marcado con el fluorforo, reconoce al primario y se une a l.
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  • Kumate- Gtz, Infectologa clnica, 17ma edicin, Mndez Editores, Mxico, DF (2008) Cap. 8 Laboratorio en el diagnstico de enfermedades infecciosas
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  • Es un examen de laboratorio solicitado con mucha frecuencia al que el clnico se enfrenta desde la valoracin de un sujeto hasta el seguimiento de enfermedades hematolgicas y no hematolgicas Hemograma o citometra hemtica (CH). Serie roja Serie blanca Serie tromboctica Estudio de tres lneas celulares Fisiolgicos. Edad, embarazo, actividad fsica, clima y localizacin geogrfica. Patolgicos. Procesos inflamatorios, metablicos, neoplsicos, infecciosos. Valores alterados RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004.
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  • Depender de factores como: edad, peso, hbito tabquico, etc. Leucocitosis > 12 000 y Leucopenia < 4 000 L Etiologa Errores bajo citometra de flujo: fragilidad leucocitaria (frmacos inmunosupresores o citotxicos), formacin de agregados. Leucocitos totales4000 12 000 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Clula(%)Lmites absolutos Leucocitos totales Neutrfilos Eosinfilos Basfilos Monocitos Linfocito 40 -85 0 -7 0 -3 1 -13 12 - 46 4 000 12 000 L 1 500 7 000
  • Leucocitos Leucocitosis > 12 000/ L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de leucocitosis Infecciones agudas Intoxicaciones Hemorragia aguda Hemlisis Padecimientos mielo o linfoproliferativos Necrosis tisular Condiciones fisiolgicos Localizadas: Neumonas, meningitis, abscesos, amigdalitis, apendicitis. Generalizadas: Fiebre reumtica aguda, septicemia, clera, endocarditis infecciosa. Metablicas: uremia, etc. Otras: veneno de arcnidos,etc Leucemias crnicas, policitemia vera IAM, quemaduras Ejercicio, trabajo de parto, menstruacin. Causas de leucopenia Infecciones agudas Frmacos Radiacin Otros Bacterianas: Septicemia, TB miliar, tifoidea, brucelosis, rickettsias (tifo). Paludismo Virales: Mononucleosis infecciosa, hepatitis, influenza, parotiditis. Sulfonamidas, analgsicos, mielosupresores. LES, AR, Insuficiencia renal, shock anafilctico. Leucocitos Leucopenia > 4 000/ L
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  • Neutropenia: < 1 500 L Neutrofilia > 7 000 L. Relacionada a incremento de bandas Bandemia: > 800 L Causas iguales a las sealadas para leucocitosis. Leucoblastosis. Leucocitosis + Bandas Leucoeritroblastosis: Leucistosis + Bandas + Blastos SR. Neutrfilos 1 500 7 000 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de leucoblastosis /leucoeritroblastosis Infecciosas Quemaduras Eclampsia Envenenamientos Hemlisis aguda Hemorragia aguda Ca metastsico a MO Endocarditis infecciosa Neumona Leptospirosis Causas de neutropenia InfecciosasBacterianas: Septicemia, TB miliar, tifoidea, brucelosis, rickettsias (tifo). Paludismo Virales: Mononucleosis infecciosa, hepatitis, influenza, parotiditis. Sulfonamidas, analgsicos, mielosupresores. Causas de neutrofilia InfecciosasLocalizadas: Neumonas, meningitis, abscesos, amigdalitis, apendicitis. Generalizadas: Fiebre reumtica aguda, septicemia, clera, endocarditis infecciosa.
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  • Lo ms comn es encontrar Eosinofilia: >0.5 x 10^9/L Eosinopenia, trmino poco usado porque se acepta que no haya eosinfilos en una cuenta normal de leucocitos. Eosinfilos
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  • Basofilia Basfilos < 10 20 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de basofilia Infecciosas Otras Rara (varicela, sarampin) Leucemia mieloide crnica, policitemia vera, metaplasia mieloide, Hodgkin, anemia hemoltica, sinusitis crnica, esplenectoma, etc.
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  • Monocitosis >500 - 800 / L Monocitos 100 - 800 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de monocitosis Infecciosas Otras TB, paludismo, endocarditis infecciosa, brucelosis, tripanosomiasis, rickettsiasis Virales: VVZ, CMV Leucemias, Hodgkin, linfomas, recuperacin de dao medular por radiaciones o medicamentos,kala azar, CUCI.
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  • Linfopenia < 1 500 / L Linfocitosis > 4 000 / L Linfocitos 1 000 4 200 / L RUZ ARGELLES G RUIZ REYES G. INTERPRETACIN DE LA CITOMETRA HEMTICA. NDICES Y PARMETROS. FUNDAMENTOS DE HEMATOLOGA 3 e. EDITORIAL PANAMERICANA, 2004. Causas de linfocitosis Infecciosas Otras Virales: Varicela, tos ferina, mononucleosis infecciosa, hepatitis, parotiditis, rubela, CMV. Otros agentes: TB, brucelosis, sfilies, toxoplasmosis. Leucemia linftica, tirotoxicosis, linfomas.
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  • { Es el proceso de crecimiento de m.o. mediante la toma de bacterias de un sitio de infeccin por mtodo de recoleccin de muestra y crecimiento en un medio ambiente artificial. Facilitar el aislamiento y crecimiento. Determinar cuales de las bacterias que se desarrollan es ms probable que sean la causa de infeccin Desarrollo suficiente para su identificacin y caracterizacin
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  • Debe ser de material del sitio real de infeccin, con el mnimo de contaminacin Establecer los momentos ptimos para la toma de muestras Cantidad de muestra suficiente Utilizacin adecuada de dispositivos de recuperacin envases para muestras y medio de cultivo
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  • < INICIO DE ANTIBIOTICOS 2-3 MUESTRAS (85-90%) BACTEREMIAS Vol. Requerido: Adultos 5-10 ml. Nios 1-2 ml. RN mantener la proporcin 1:10 MUESTRA Enriquecidos y suplementados junto con un anticoagulante (polianetol de sodio) CULTIVO
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  • CULTIVO DE LQUIDO CEFALORRAQUDEO Paciente en decbito lateral o sentado, con flexin de la cabeza y los muslos A nivel de L4-L5 3-5 ml., fraccionado en varis tubos Citoqumico y citolgico Aglutinacin con latex Cultivo
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  • UROCULTIVO Muestra de chorro medio, sonda transuretral, puncin suprapbica y con bolsa colectora Realizar aseo amplio con agua y jabn la zona periuretral La muestra debe ser procesada en 30 minutos 24-48 hr.
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  • CULTIVO DE EXUDADO FARINGEO CON SIGNIFICADO CLNICO S. PyogenesHaemophilus influenzae Corynebacterium diphtheriae S. Pneumoniae N. MeningitidisM. Catarrhalis N. gonorrhoeaeS. agalactiae Muestra tomada con hisopos estriles e inocularse en medios de transporte semislidos (Stuart) Muestra tomada con hisopos estriles e inocularse en medios de transporte semislidos (Stuart)
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  • MEDIO STUART DE TRANSPORTE Cloruro de sodio3 g. Cloruro de potasio0.2 g. Fosfato disdico1.25 g. Trioglicato de sodio1 g. Cloruro de calcio10 g. Agar4 g. Agua destilada1 L Mantener la muestra tan prxima a su estado original como sea posible, con deterior mnimo, y minimizando el riesgo que afrontan quienes transportan la muestra, mediante el uso de recipientes hermticamente cerrados.
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  • Esterilizacin de los medios Condiciones ptimas de incubacin Evaluacin de la morfologa de la colonia Coloracin de Gram y subcultivos
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  • De acuerdo con su funcin y uso. Hay 3 categoras generales de medios: MEDIOS NO SELECTIVOS: Crecimiento con gran variedad de m.o., en corto tiempo Agar sangre, Agar chocolate, Agar Mller-Hinton MEDIOS SELECTIVOS: Contienen substancias que buscan inh. la mayora de los m.o. Agar sal-manitol, Agar MacConkey, Agar sabouraud MEDIOS DIFERENCIALES: Agar sangre (efecto hemoltico),Agar salmanitol, Agar MacConkey (fermentacin lactosa), Agar TSI (Produccin c. Sulfdrico), MIO
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  • MEDIOCOMPONENTESOBJETIVO PRINCIPAL Agar chocolate Base de peptona, enriquecida con una solucin de Hb al 2% Cultivos de especies de Haemophilus y especies patgenas de Neisseria Agar MacConkey Gram (+) son inhibidos por el cristal violeta y sales biliares. Rojo neutro como indicador Bacilos entricos gram (-) fermentadores y no fermentadores Agar sangre Infusin de carne y corazn con 5% de sangre de carnero Requerimientos especiales, reacciones hemolticas Agar XLD El desoxicolato de sodio inh. Los m.o. gram (+); rojo fenol indicador Especies de Salmonella y Shigella, de otros bacilos entrico gram (-) (amarillo) Agar salmanitol Base de peptona, manitol y rojo fenol indicador, sal al 7.5% Selectivo para estafilococos Agar SS Base de peptona con lactosa, rojo neutro indicador Salmonella y Shigella
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  • S. aureus S. epidermidis S. haemolyticus S. saprophyticus Especies de Micrococcus MEDIOS DE CULTIVOS DE ELECCIN.- Agar sangre o Agar chocolate Cultico selectivo: Agar manitol (halo amarillo) Incubacin a 35 C x 24-48 hr. COLONIAS S AUREUS: Medianas-grandes, elevadas, traslucidas; con pigmento amarillo, la mayora betahemolticas
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  • S. Betahemoltico (pyogenes) S. Pneumoniae S. Viridans Enterococos ( faecalis y fecium MEDIOS DE CULTIVO.- Agar sangre de oveja al 5% y agar chocolate Betahemolisis, es mejor en condiciones anaerbicas Perodo de incubacin 48 hr ASPECTO COLONIAS.- Translucida a opacas; planas, brillantes, ancho estrecho de betahemlisis
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  • Moraxella catarrhalis N. gonorrhoeae N meningitides MEDIO DE ELECCIN Agar sangre de carnero al 5% Agar chocolate Medios selectivos: Thayer Martin (agar chocolate + suplemento y antimicrobianos colistina, nistatina y vancomicina) Incubacin a 35-37 C x 72 horas En una atmosfera hmeda enriquecida en CO2 ASPECTO DE LAS COLONIAS MC: Grande, no pigmentada o gris, opaca, lisa; consistencia friable NG: Pequeas, blanco-grisaceas, convexas, translcidas, brillantes.
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  • BACILOS GRAMPOSITIVOS Corynebaterium: Amycolatum Auris diphteriae Listeria monocytogenes MEDIOS DE CULTIVO Agar sangre de carnero al 5% Agar chocolate NO agar MacConkey Incubacin a 35C en 48 hr.-3 das Color negro gris
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  • Burkholderia pseudomallei Burkholderia cepacia Pseudomona aeruginosa P. alcaligenes P. fluorescens P. luteola MEDIOS DE CULTIVO Agar sangre de oveja al 5% Agar chocolate Agar MacConkey, caldos de los sistemas de hemocultivo Incubacin a 35 C en CO2 o aire atmosfrico x 24-48 horas >siembra COLONIAS.- Esparcidas, planas y con bordes dentados, brillo metlico, colonias betahemolticas, pigmentacin verde azulada
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  • Brucella abortus Brcella meltensis B. canis B. suis Bacilos cortos o cocobacilos gramnegativos, inmviles y aerobios; requieren CO2 MEDIOS DE CULTIVO Sistemas comerciales para hemocultivo (BACTEC, lisis- centrifugacin) Incubacin prolongada x 30 das Atmosfera humidificada con CO2 al 5-10% ASPECTO COLONIAS.- Pequeas, convexas, lisas, traslcidas no hemolticas, amarillo plido
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  • M. tuberculosis M. Bovis BCG M. Bovis M. africanus M. No tuberculosas Complejo M. avium M. Simiae M. Celatum M. fortuitum Bacilos inmviles muy delgados cido-alcohol resistentes MEDIO DE CULTIVO.- Se requiere la combinacin de medios de cultivo slidos lquidos SOLIDOS: Lowenstein-Jensen. 35 C en la obscuridad con una atmosfera con 5-10% de CO2 y humedad elevada x 3-6 semanas Agar chocolate LQUIDOS: BACTEC. Atmosfera 5-10% de CO2 x 1 das
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  • Costoso Mucho tiempo No siempre se pueden aislar los microorganismos Genotipo Dx microoganismos de difcil cultivo Mycobacterias y Legionella ID secuencias de DNA
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  • Anlisis de DAN o RNA Deteccin de segmentos dentro de otros no especficos Enzimas de restriccin DNA varios millones fragmentos RNA 1/1000 Electroforesis en gel Hibridacin con sonda para ID mol. inters
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  • ID gen especifico del microorganismo Segmentos cortos Iniciadores para amplificacin PCR Hibridacin de segmentos complementarios Segmentos largos Sondas
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  • ADN o ARN Muestras clnicas o Cultivos In situ en cls. En laminillas en el microscopio Comn fijados en formalina y embebidos en parafina
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  • Southern blot Ed southern aos 70 Analisis fragmentos de DNA generados por enzimas de restriccin EnzimaOrganismoSitio de rotura 5 3 Bam HIBacillus amyloliquefaciens H G * GATCC Eco RIE. Coli RY 13G * AATTC HaeIIIH aegyptusGG * CC Hind IIIH. Influenzae RdA * AGCTT Hpa IH. ParainfluenzaeGTT * AAC Pst IProvidencia stuartiiCTGCA * G Sma ISerratia marcescensCCC * GGG Sal IStrptomices albus GG * TCGAC
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  • Enzima de restriccin Separacin por electroforesis Gel de agarosaDesnaturalizacin Filtro nitrocelulosa (transparencia y capilaridad) Incubacin del filtro Hibridacin Exposicin a rayos X o a pelcula sensible a la luz
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  • AplicacinOrganismo Deteccin directa de muestras clnicasChlamydia trachomatis Streptococcus del grupo A Papilomavirus Neisseria gonorrhoeae Confirmacin de cultivosCoccidioides immitis Haemophilus influenzae Histoplasma capsulatum Mycobacterium tuberculosis complex Listeria monocitogenes
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  • Determinar tamao y abundancia de mRNA derivado de un determinado gen No enzimas de restriccin Longitud por exones
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  • PCR Alternativa a la clonacin Miles de millones de copias en pocas horas Iniciadores especficos de genes cuya secuencia es conocida Alta sensibilidad Reaccin cruzada 1 trepano-inmediato CMV 23S E. Coli Inhibidores de la polimerasa
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  • PCR Amplificacin enzimtica de un fragmento de DNA diana Desnaturalizacin con calor Cebadores cadenas complementarias DNA polimerasa 2 nuevas cadenas Repetidos ciclos
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  • Desnaturalizacin de las cadenas de ADN Hibridacin de los iniciadores Extensin de la secuencia amplificada Termociclado r PCR-RT PCR - multiplexLCR (Ligasa Chain Reaction) Hibridacin con sondas especificas Amplificacin de las sondas Ligamiento Producir cadenas duplicadas
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  • Cantidad de DNA concreta existente en una muestra Se duplica x cada ciclo Seguimiento fases iniciales Umbral arbitrario PCR tiempo real
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  • Enzimtica Radioactiva Quimioluminiscente Fluorescente Cualitativa Cuantitativa Multiplicacin de la seal Reaccin Secuencia blanco Sondas Seal
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  • OrganismoNombre de la prueba MtodoLimite de deteccin Aplicacin HIV 1AmplicorPCR20 organismo/RXN Pacientes no tratados y baciloscopia + C. TrachomatisAmplicorPCR10-20 cuerpos elementales/RXN Confirmacin y monitoreo EnterovirusAmplicorPCRNo reportadoConfirmacin y monitoreo VHCQuantiplexDNA ramificado200,000 -120x10 6 copias/ml Cuantificacin durante terapia VHBQuantiplexDNA ramificado.7x10 6- 5000x10 6 copias/ml Confirmacin y monitoreo N. gonorrhoeaeLCXLCRNo reportadoConfirmacin y monitoreo