DIDACTICA GENERAL II PROFESORA: LICDA MI. DE R. ALUMNO: DR. ANTONIO VASQUEZ HIDALGO

P

LAN DE UNIDAD

Nombre: Enfermedades del Sistema Digestivo Asignatura: Enfermedades Transmisibles IObjetivo Objetivo General 1. Conocer la morfologa y principales enfermedades parasitarias del sistema digestivo Objetivos Especificos: 1. Conocer la morfologa de los protozoarios intestinales. 2. Conocer la enfermedad y el cuadro clinico de los protozoarios intestinales. 3. Explicar el tratamiento y prevencin de los protozoarios intestinales Contenido I. Parasitismo *Helmintos: Enterovius vermicularis, Thrichuris thrichuria. *Nematodos: Ascaris lumbricoides *Protozoos intestinales. E. coli, E. nana, E. hystolitica. II. Enfermedades Sistema Digestivo. * Amibiasis * Giardiasis * Uncianariasis *Fiebre tifoidea * Shiguelosis * Clera * Diarreas virales III, Tratamiento y prevencin de las enfermedades parasitarias. Metodologa *Clases expositivas * Laboratorio * Discusiones

Unidad: I Fecha: enero , ciclo I / 03Recursos *Fisicos: - Auditorium - Laboratorios A y B * Humanos: -docentes -estudiantes *Materiales: - microscopio - acetatos - Examenes de Heces. -Plumones - Manual de laboratorio Evaluacion 3 Examen Parcial 6 Examenes cortos de laboratorio 3 Examen prctico. 3 discusiones.

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ARTA DIDACTICA

Institucin: Universidad de El Salvador Facultad de Medicina

Asignatura: Enfermedades Transmisibles I Profesor: Dr. Msp Antonio Vsquez Hidalgo

Nivel: 3 ao de Medicina Objetivo General: Conocer la morfologa y las propiedades generales de los protozoarios intestinales.Objetivo 1. Conocer la morfologa de los Helmintos Contenido 1. Helmintos Enterovius vermicularis Thrichuris thrichuria. -Morfologa -Ciclo vital -Sintomas y signos. Actividades Maestro Alumno Explicar la Aprender y morfologa de conocer la los helmintos. morfologa de los helmintos en el laboratorio utilizando el microscopio . Explicar los sintomas y signos de la enfermedad. Reconozca los principales signos y sintomas en el paciente en el nivel I de atencin de Salud. Aprender el tratamiento y prevencin de los Helmintos intestinales. Tiempo 1 hora clase expositiva 2 horas en laboratori o Recursos *Fisicos: Auditorium Laboratori os A y B * Humanos: -docentes estudiante s *Materiale s: microscopi o - acetatos Examenes de Heces. -Plumones - Manual de laboratorio Evaluacin

1 Examen parcial en auditorium 2 examenes cortos en el laboratorio 1 examen prctico de laboratorio. 1 discusiones

2. Conocer la enfermeda d y el cuadro clinico de los helmintos. 3. Explicar tratamiento y prevencin de los helmintos intestinales .

- Farmacos antiparasitari os.

Explicar el tratamiento y prevencin de la enfermedad

Objetivo

Contenido

Actividades Maestro Alumno Explicar la morfologa de los Nematodos. Aprender y conocer la morfologa de los Nematodos en el laboratorio utilizando el microscopio.

Tiempo

Recursos

Evaluacin

1. Conocer la morfologa de los Nematodos intestinales

2. Nematodos Ascaris lumbricoide s -Morfologa -Ciclo vital

1 hora clase expositiva 2 horas en laboratori o

*Fisicos: Auditorium Laboratori os A y B * Humanos: -docentes estudiante s *Materiale s: microscopi o - acetatos Examenes de Heces. -Plumones - Manual de laboratorio

1 Examen parcial en auditorium 2 examenes cortos en el laboratorio 1 examen prctico de laboratorio. 1 discusiones

2. Conocer la enfermeda d y el cuadro clinico de los Nematodos

-Sintomas y signos.

Explicar los sintomas y signos de la enfermedad .

Reconozca los principales signos y sintomas en el paciente en el nivel I de atencin de Salud.

3. Explicar tratamiento y prevencin de los nematodos intestinales .

- Farmacos antiparasitari os.

Explicar el tratamiento y prevencin de la enfermedad

Aprender el tratamiento y prevencin de los Nematodos intestinales.

Objetivo

Contenido

Actividades Maestro Alumno Explicar la morfologa de las Amebas. Aprender y conocer la morfologa de los Protozoos en el laboratorio utilizando el microscopio .

Tiempo

Recursos

Evaluacin

1. Conocer la morfologa de los Protozoos intestinales : Amebas

3. Protozoos: Amebas. E. coli E. nana H. diminuta E. hystolitica -Morfologa -Ciclo vital

1 hora clase expositiva 2 horas en laboratori o

*Fisicos: Auditorium Laboratori os A y B * Humanos: -docentes estudiante s *Materiale s: microscopi o - acetatos Examenes de Heces. -Plumones - Manual de laboratorio

1 Examen parcial en auditorium 2 examenes cortos en el laboratorio 1 examen prctico de laboratorio. 1 discusiones

2. Conocer la enfermeda d y el cuadro clinico de los Amebas

-Sintomas y signos.

Explicar los sintomas y signos de la enfermedad.

Reconozca los principales signos y sintomas en el paciente en el nivel I de atencin de Salud.

3. Explicar tratamiento y prevencin de los Amebas intestinales .

- Farmacos antiparasitari os.

Explicar el tratamiento y prevencin de la enfermedad

Aprender el tratamiento y prevencin de las Amebas intestinales.

GUION DE LABORATORIOTEMA: Helmintos intestinales Tiempo: 3 horas

OBJETIVO: Que los estudiantes conozcan la morfologa de los helmintos en su prctica de laboratorio.

PRCTICA

1

PRIMERA PARTE MTODOS PARA EL DIAGNSTICO DE HELMINTOS . MTODOS DE FIJACIN, CLARIFICACIN Y TINCIN DE HELMINTOS. Para la identificacin y estudio de los helmintos parsitos se han ideado algunos mtodos, con el fin de colectarlos de sus huspedes. Entre los ms importantes podemos citar: 1. 2. 3. 4. Eliminacin debida a la administracin de un helmntico. Por biopsia de rganos parasitados. Por medio de la extirpacin quirrgica como en los casos de cisticercosis, oncocercosis e hidatidosis. Por necropsia, que es talvez el ms til, porque permite obtener el parsito intacto.

MATERIALES, REACTIVOS Y EQUIPO. Muestras de heces frescas y preservadas. Portaobjetos de 3 X 1 . Cubreobjetos de 22 X 22 mm. y 22 X 40 mm. No. 2. Bandas de hule. Cajas de Petri. Frascos con fijador de Bouin Frascos con fijador de Travassos. Permount o medio similar. Solucin salina fisiolgica Solucin de Lugol de trabajo Colorante de Carmn clorhdrico Etanol al 70%. Etanol al 70% con 0.5% de HCL. Etanol al 90%, 95% y 100%.

Creosota de Haya. Agujas de diseccin. Bistur (Trado por el estudiante) Pinzas sin garra. Tijeras. Progltidos de tenias sin teir. Carnes y vsceras frescas con cisticercos. Aplicadores de madera. Microscopios estereoscpicos y compuestos Beaker de 500 ml. Placas de Petri.

DESARROLLOA.

Bsqueda de cisticercos en carnes infectadas. Buscar cuidadosamente cisticercos haciendo pequeos cortes con un bistur en msculos y vsceras frescas, ayudndose para ello de una pinza. Los cisticercos aparecen como pequeas vesculas llenas de lquido blanquecino que sobresalen del tejido muscular. Tmelos suavemente con la pinza sin garra y colquelos en una base de caja de Petri con solucin salina 0.85%, permita la relajacin de los cisticercos y djelos en el fijador por 2 a 3 das antes de colorear.

B.

Recuperacin de progltidos y esclices de tenia en heces. Este procedimiento tambin puede ser aplicado para la separacin de pequeos nemtodos y tremtodos. Procedimiento: 1. Mezcle una muestra de heces de 24 horas (frescas o preservadas con formalina al 10%) con agua hasta obtener una suspensin homognea. 2. Filtrar pequeos volmenes de la suspensin a travs de una malla o gasa doblada en dos. 3. Agregar agua sobre la gasa en que se hizo el filtrado para eliminar pequeos detritos. 4. Examine los detritos contenidos en la gasa con una lupa para la bsqueda de esclices y progltidos. 5. Repetir los pasos 2 a 4 hasta terminar con toda la suspensin de heces. 6. Los progltidos recuperados se pueden colocar en solucin salina 0.85%.

C.

Examen de progltidos al fresco. 1. Coloque un progltido en una lmina 3x1 . Coloque cuidadosamente otro portaobjetos sobre el espcimen. 2. Sujete las lminas con dos bandas de hule en sus extremos. 3. Examnelo con lupa o microscopio estereoscpico y determine el nmero de ramificaciones uterinas y poro genital. Si se trata de un esclex observe la presencia de rostelo y ventosas.

D.

Mtodo de clarificacin de helmintos Mediante este proceso, se estudian rpidamente las estructuras externas e internas de los nemtodos. Los aclaradores ms usados son: cido actico glacial y glicerina pura. No es conveniente realizar la aclaracin si el parsito se quiere teir. Procedimiento: 1. Colocar los pequeos helmintos entre porta y cubreobjetos (fijados o no). 2. Agregar una gota de cido actico glacial por uno de los bordes del cubreobjetos. 3. Secar el exceso de cido de los bordes con papel filtro. 4. Observar al microscopio moviendo el cubreobjetos para hacer girar el helminto en la posicin deseada. NOTA: Cuando la clarificacin no es suficiente, puede repetirse la operacin utilizando fenol en vez de cido actico. Coloracin de progltidos y cisticercos. Las formas o estados de helmintos obtenidos de las cuatro formas que se explican al inicio de la prctica, se colocan en solucin salina 0.85% para la relajacin (la concentracin vara segn el animal de origen del parsito). Se pueden hacer varios lavados con solucin salina 0.85%. El primer paso en la preparacin de especimenes de helmintos es la fijacin. Los helmintos una vez lavados se colocan en diferentes lquidos conservadores y segn la coloracin a seguir y del parsito del que se trate, existen diferentes tcnicas de fijacin.

E.

F.

Tcnica para la fijacin de helmintos. 1. Para nemtodos.i) ii) iii)

Sustituir la solucin salina por lquido fijador caliente a 70 C. Dejar enfriar y mantener el nemtodo en esta solucin por 24 horas. Pasar los ejemplares a un medio conservador.

Nota: Pocas veces se necesita comprimir el nemtodo entre lmina y laminilla. Solamente en casos especiales como cuando se pretende identificar la bolsa copulatriz, boca o extremidad caudal del macho y de la hembra.

Nemtodos. 1. 2. Fijar en solucin de Travassos o formalina caliente (70 C). Pasar directamente el ejemplar al cido actico puro, previamente fijado o procedente del lquido conservador. 3. Teir con Carmn actico de Semichn concentrado durante 3 a 5 minutos para nemtodos grandes. 4. Decolorar con cido actico concentrado hasta que la cutcula sea transparente. 5. Neutralizar con alcohol de 70%, hacer varios cambios en este alcohol. El ejemplar debe tener un color rozado. 6. 7. Deshidratar 20 minutos en alcoholes de 70% - 95% y alcohol absoluto. Diafanizar durante 20 minutos en cada uno de los siguientes pasos:a) b) c) d)

Tres partes de alcohol absoluto y 1 de salicilato de metilo 2 partes de alcohol absoluto y 2 de salicilato de metilo 1 parte de alcohol absoluto y 3 de salicilato de metilo, y Salicilato de metilo puro.

8.

Montar en Blsamo de Canad, Permount o cualquier otra resina.

En caso de quemaduras aplicar bicarbonato de sodio. Los resultados sern observados posteriormente.

SEGUNDA PARTE MTODOS Y TCNICAS ESPECIALES PARA EL DIAGNSTICO DE HELMINTOS.

MATERIALES: Portaobjetos de 3 X 1 . Embudos de vidrio de 100 mm de dimetro. Tubos de hule. Coladores de metal. Gasa cortada en cuadros de 10 cm por lado. Pinzas para los tubos de hule. Agua a 45 C. Tubos cnicos de 15 ml. Agua destilada. Tiras de papel filtro 40 42. Cajas de Petri. Pipetas serolgicas de 5 ml. Tierra vegetal calentada a 60 C en horno. cido actico glacial. Parafina derretida. Carbn animal granulado. (Tambin puede utilizarse carbn vegetal) Solucin salina fisiolgica (Reactivo No. 29) Solucin fijadora de Raillet-Henry. Bicarbonato de sodio. Microscopio compuesto Guantes (trados por el alumno)

DESARROLLO:A.

Cultivo de larvas de nemtodos por el Mtodo de Baerman y Morais.

Este mtodo se utiliza para separar larvas de nemtodos del material de cultivo (materias fecales o tierra), y se basa en el hecho de que una gran mayora de las larvas de nemtodos emigran hacia el agua que se pone en contacto con la muestra, siempre y cuando el agua est a una temperatura aproximada de 45 C. El dispositivo de Baerman consta de:

1. Un embudo de vidrio conectado en la espiga (extremidad de su tallo) con un corto tubo de hule. 2. Una pinza de presin para el tubo de hule. 3. Un cedazo o malla de alambre fino (colador de cocina) que ajuste por debajo del borde del embudo y un pedazo de tela de algodn (gasa) bastante fino que no deje pasar partculas gruesas en caso de trabajarse con cultivos de tierra o heces. 4. Un pie universal con anillo. Mtodo 1. Colocar el cedazo en el embudo con la tela o gasa. 2. Sobre esto y en forma delicada colocar el tejido o la muestra. 3. Llenar el embudo con agua a 45 C poco a poco hasta que se ponga en contacto con el nivel inferior de la muestra contenida en la malla. 4. El medio lquido y el calor atraern los parsitos en forma singular sedimentndose la mayora en el trmino de una hora. La muestra puede dejarse por 2 horas o ms. 5. Retirar la primera porcin abriendo la llave y recogiendo el lquido en un tubo cnico que luego puede centrifugarse por 2 min. a 500 x g para concentrar an ms los parsitos y examinar el sedimento bajo el microscopio (100X y 400X) para observar la presencia de larvas mviles. Es difcil observar los detalles debido a que las larvas se mueve rpidamente, si esto ocurre, use una gota de solucin de Lugol o formol al 10% para inmovilizar las larvas.

La tcnica sirve para aislar larvas parsitas y de vida libre. Si la muestra a analizar (heces) se sospecha que est contaminada con tierra o agua conteniendo estas ltimas, es necesario diferenciar entre ambas lo cual es posible debido a que las formas parsitas son ms resistentes a cidos que las de vida libre. Para esto proceda a realizar lo siguiente: Aada 0.3 ml de cido clorhdrico concentrado por 10 ml de agua que contengan larvas (dilucin 1:30). Las larvas de vida libre mueren instantneamente y las parsitas viven cerca de 24 horas. Reporte de resultados. Reporte sus hallazgos como Larvas no detectadas si no se encuentran larvas al final de la incubacin. En caso contrario reporte las larvas detectadas, por ejemplo: Larvas de Strongyloides stercoralis detectadas por cultivo fecal.B.

Mtodo de Harada Mori. (Cultivo de larvas en tubo de ensayo)

Para obtener larvas a partir de huevos de helmintos, un mtodo simple fue diseado inicialmente por Harada y Mori en 1955, el cual fue modificado por otros investigadores. El mtodo requiere solamente materiales con los que cuenta cualquier laboratorio. Mtodo 1. Se prepara una tira de papel filtro de aproximadamente 0.8 por 5 pulgadas ( 2 cm. de ancho por 13 cm. de largo 2. Se extiende aproximadamente de 0.5 a 1 g de material fecal sobre el centro del papel filtro, por un solo lado. 3. Agregar 3 a 4 ml de agua destilada al tubo de centrfuga cnico.

4. Insertar el papel filtro dentro del tubo procurando que 1.5 cm de la parte inferior del papel se encuentre inmersa en el agua. No es necesario tapar el tubo, sin embargo se puede cubrir con un tapn de algodn (ver figura). 5. Coloque el tubo en posicin vertical en una gradilla e incubar en la oscuridad a temperatura ambiente (25 a 28 C) por 10 das. Agregar agua

destilada cuidadosamente para mantener el nivel del agua. El agua sube por capilaridad y mantiene las heces hmedas. 6. Sostenga el tubo con pinzas o guantes para evitar la infeccin por larvas. Examine diariamente observando una gota del lquido del fondo del tubo. Las larvas migran del papel al lquido. Realice una preparacin al fresco y obsrvela con el objetivo 10X. 7. Examine la movilidad de las larvas y las caractersticas morfolgicas para identificar las larvas de uncinarias, Strongyloides spp., y Trichostrongylus spp. Puede usar solucin de Lugol para matar las larvas.

Reporte de resultados. Reporte sus hallazgos como Larvas no detectadas si no se encuentran larvas al final de la incubacin. En caso contrario reporte las larvas detectadas, por ejemplo: Larvas de Strongyloides stercoralis detectada por cultivo fecal.

C.

Mtodo de Clemente Pereira. (Cultivo de larvas en tierra vegetal)

En muestras fecales viejas pueden existir larvas rabditoides de uncinarias y Strongyloides; si existen dudas acerca de la especie presente, pueden cultivarse las heces hasta obtener larvas filariformes. Las uncinarias necesitan de 5 a 6 das para desarrollarse y las de Strongyloides solamente de 2 a 3.

Tcnica: 1. Se coloca tierra seca vegetal previamente calentada a 60 C en la tapa inferior de una caja de Petri, en cantidad suficiente para cubrir el fondo. 2. Se coloca sobre la tierra una capa fina de heces por medio de un bajalengua. 3. Luego se coloca otra capa de tierra que cubra completamente las heces. Esta ltima capa de tierra tiene la finalidad de retardar el crecimiento de hongos. 4. Se humedece la tierra con agua de chorro evitando poner exceso. 5. Se aplica sobre el borde de la tapa inferior de la caja de Petri, una capa de cera o parafina fundida. La parafina se solidifica al ponerse en contacto con la tapa inferior de la caja, con lo cual esta queda sellada hermticamente, evitando as que las larvas puedan escapar de su interior.

2 tierra.

capa

de

Capa de heces. 1 Capa de tierra. 6. Despus de la eclosin de los huevos, las larvas se desplazan en todas direcciones, tratando de abandonar el medio donde nacieron, lo que hace que se acumulen en los bordes de la caja. Como la tapa de sta se calent al aplicarle la parafina, ello determin cierta evaporacin al enfriarse, formando finas gotitas de agua de condensacin. Al llegar la larvas a las paredes de la caja suben por la pelcula de agua de condensacin y se acumulan en la tapa superior. Las larvas quedan as concentradas en las gotas pendientes del techo de la caja y pueden ser observadas con lupa o microscopio entomolgico. Estos cultivos sern observados entre el 4 y 12 da de incubacin.

Reporte de resultados. Igual que en los mtodos anteriores.

D.

Mtodo de la caja de Petri-papel filtro inclinado. (Mtodo de Little) Esta tcnica tiene la ventaja de que las larvas parsitas y larvas de vida libre pueden observarse directamente con el microscopio o preferiblemente con un microscopio estereoscpico al enfocar la masa fecal o el agua, sin necesidad de hacer preparaciones microscpicas. Tcnica. 1. Cortar tiras de papel filtro de 3 x 1. 2. Con un aplicador de madera hacer extensin de heces tomando aproximadamente 1 a 2 g de heces en el centro de l papel. 3. Colocar el papel sobre un portaobjetos 3 x 1 Colocar el portaobjeto en forma inclinada (10) sostenida en una varilla de vidrio en una caja de Petri (ver figura).

4. Agregar agua destilada a la caja de Petri hasta que del portaobjetos est sumergido en el agua. Tapar la caja de Petri y incubar a 25 28 C por 10 das. Cuando sea necesario, agregue agua para mantener el nivel original. 5. Examine diariamente utilizando un microscopio estereoscpico o si el microscopio compuesto lo permite, coloque la caja de Petri abierta en la platina. Tambin puede hacer preparaciones al fresco del lquido y observando con el objetivo de 10X. 6. Examine la movilidad y las caractersticas morfolgicas para identificar las larvas de uncinarias, Strongyloides spp., y Trichostrongylus spp. Puede usar solucin de Lugol para matar las larvas Reporte de resultados. Igual que en los mtodos anteriores.

C.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS. 1. Cmo puede Ud. diferenciar las larvas de vida libre aisladas por los mtodos anteriores con larvas parsitas? ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ _____________________ 2. Qu es termotropismo positivo?. ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ ____________________________________________________________________ _____________________ 3. Cules son las ventajas del mtodo de Baerman sobre los otros mtodos? _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ _____________________________________________________________ ________________________________________________________