Efecto del extracto hidroalcohólico de CIENCIAS Salvia

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i UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA Efecto del extracto hidroalcohólico de Salvia hispanica “chía” sobre la absorción intestinal de la glucosa en Rattus rattus var. Albinus. TESIS PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE BIÓLOGO - MICROBIOLOGO AUTORA: Br. Reyna Isabel Simón Gómez ASESOR: Ms.C. Orlando Pretel Sevillano TRUJILLO – PERU 2016 Biblioteca Digital - Direccion de Sistemas de Informática y Comunicación - Universidad Nacional de Trujillo Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No comercial-Compartir bajo la misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licenses/by-ns-sa/2.5/pe/ . No olvide citar esta tesis. BIBLIOTECA DE CIENCIAS BIOLOGICAS

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UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL MICROBIOLOGIA Y PARASITOLOGIA

Efecto del extracto hidroalcohólico de Salvia

hispanica “chía” sobre la absorción intestinal de la

glucosa en Rattus rattus var. Albinus.

TESIS

PARA OBTENER EL TÍTULO PROFESIONAL DE

BIÓLOGO - MICROBIOLOGO

AUTORA: Br. Reyna Isabel Simón Gómez

ASESOR: Ms.C. Orlando Pretel Sevillano

TRUJILLO – PERU

2016

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AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. ORLANDO GONZÁLES NIEVES

RECTOR DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. RUBÉN VERA VELEZ

VICE-RECTOR ACADÉMICO DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

Dr. STEBAN ALEJANDRO ILICH ZERPA

SECRETARIO GENERAL DE LA UNIVERSIDA NACIONAL DE TRUJILLO

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AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO

DECANO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dr. SANTOS ENRIQUE PADILLA SAGÁSTEGUI

SECRETARIO DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

Dra. EVA ELIZABETH VILLANUEVA TARAZONA

DIRECTORA DE ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE

MICROBIOLOGÍA Y PARASITOLOGÍA

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DEDICATORIA

A Dios todopoderoso, por

haberme dado la vida e iluminarla

día a día.

A mí abnegada madre Florencia y mí

querido padre Julio, por su cariño,

apoyo incondicional y por su sacrificio

para hacer de mí una profesional con

valores humanos para servir con

emoción social a los seres humanos

que me rodean.

A mi abuelita Antonia quien

siempre me brinda su bendición y

me incentiva a seguir adelante.

A mis amigos Mirelly y Manuel con

quienes comparto mis alegrías y

tristezas, por su paciencia y consejos.

A Irving por ser mi ejemplo de

lucha y sacrificio constante, a

pesar de la distancia eres mi

punto de apoyo.

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AGRADECIMIENTO

Al profesor asesor Ms.C. Orlando Pretel Sevillano, de la Universidad

Nacional de Trujillo por sus orientaciones y apoyo incondicional para la

realización del presente trabajo de investigación.

Al profesor Carlos Quijano Jara, de la Universidad Nacional de Trujillo por su

orientaciones brindadas en para la realización del presente trabajo.

A los servicios brindados por el Departamento Técnico de Fisiología y

Bioquímica Animal a cargo de la Mblga. Doris Asmat y el Tecn. Víctor Saldaña.

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PRESENTACIÓN

Señores miembros del jurado:

En cumplimiento con las disposiciones establecidas en el reglamento de

grados y títulos de la Universidad Nacional de Trujillo, pongo a vuestra

consideración y criterio el presente trabajo de tesis titulada: Efecto del extracto

hidroalcohólico de Salvia hispanica “chía” sobre la absorción intestinal de la

glucosa en Rattus rattus var. Albinus, con lo cual pretendo obtener el título de

Biólogo-Microbiólogo.

Br. Reyna Isabel Simón Gómez.

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MIEMBROS DEL JURADO

Dr. FELIX CASTILLO VIERA

PRESIDENTE

Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO

SECRETARIO

Ms.C. ORLANDO PRETEL SEVILLANO

VOCAL

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APROBACION

Los profesores que suscriben, miembros del jurado dictaminador, declaran que el

presente informe de tesis ha cumplido con los requisitos formales y

fundamentales, siendo aprobado por unanimidad.

Dr. FELIX CASTILLO VIERA

PRESIDENTE

Dr. MARCO LEONCIO SALAZAR CASTILLO SECRETARIO

Ms.C. ORLANDO PRETEL SEVILLANO VOCAL

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DEL ASESOR

El que suscribe, asesor de la presente tesis titulada: Efecto del extracto

hidroalcohólico de Salvia hispanica “chía” sobre la absorción intestinal de la

glucosa en Rattus rattus var. Albinus.

CERTIFICA:

Que la investigación ha sido desarrollada de conformidad con su

correspondiente proyecto de tesis y con las orientaciones pertinentes.

El informe ha sido redactado bajo mi asesoramiento, acogiendo las observaciones

y sugerencias alcanzadas. Por lo tanto autorizo al bachiller Reyna Isabel Simón

Gómez a continuar con los procedimientos según sus fines.

Ms.C. Orlando Pretel Sevillano

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INDICE

AUTORIDADES DE LA UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO ii

AUTORIDADES DE LA FACULTAD DE CIENCIAS BIOLÓGICAS iii

DEDICATORIA iv

AGRADECIMIENTO v

PRESENTACION vi

MIENBROS DEL JURADO vii

APROBACION viii

DEL ASESOR ix

INDICE x

RESUMEN xiii

ABSTRACT xiv

I. INTRODUCCION 1

II. MATERIAL Y METODO 7

2. Material biológico 7

3. Procedimiento 7

3.1. Preparación de harina de las semillas de Salvia hispanica “chía” 7

3.2. Obtención de extracto de las semillas de Salvia hispanica “chía”

3.3. Disección de los ejemplares Rattus rattus var. Albinus 7

3.4. Preparación del intestino delgado de los ejemplares

Rattus rattus var. Albinus 8

3.5. Evaluación de las concentraciones 100, 300 y 500 mg/dL del

extracto hidroalcohólico de semillas de Salvia hispanica sobre

la absorción intestinal de glucosa en Rattus rattus var. Albinus 8

3.5.1. Toma de muestra 8

3.5.2. Análisis de glucose 9

4. Análisis de datos 9

III.RESULTADOS 10

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Fig. 1. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en duodeno

de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas 10

Fig. 2. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en yeyuno

de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas 11

Fig. 3. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en íleon de

Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas 12

IV.DISCUSION 13

V. CONCLUSIONES 17

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 18

ANEXOS 23

Anexo 1. Promedios de las concentraciones de glucosa en duodeno de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas 24

Anexo 2. Promedios de las concentraciones de glucosa en yeyuno de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas 25

Anexo 3. Promedios de las concentraciones de glucosa en íleon de Rattus rattus var. Albinus

medidos cada media hora durante dos horas 26

Anexo 4. Filtración del extracto hidroalcohólico de las semillas de

Salvia hispanica “chía” 27

Anexo 5. Preparación del intestino delgado de los ejemplares Rattus rattus var. Albinus en

el sistema de incubación 28

Anexo 6. Evaluación del efecto de las concentraciones 100, 300, 500 mg/dl del extracto

hidroalcohólico de las semillas de Salvia hispanica “chía” 29

Anexo 7. Variación de las concentraciones de glucosa en duodeno de Rattus rattus var.

Albinus en los diferentes grupos experimentales: Control negativo (sol. Tyrode); Control

positivo con GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% + 100mg/kg; Experimental 2:

GLUCOSA10% + 300mg/kg y Experimental 3: GLUCOSA10% + 500mg/kg 30

Anexo 8. Variación de las concentraciones de glucosa en yeyuno de Rattus rattus var.

Albinus en los diferentes grupos experimentales: Control negativo (sol. Tyrode); Control

positivo con GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% + 100mg/kg; Experimental 2:

GLUCOSA10% + 300mg/kg y Experimental 3: GLUCOSA10% + 500mg/kg 31

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Anexo 9. Variación de las concentraciones de glucosa en íleon de Rattus rattus var. Albinus

en los diferentes grupos experimentales: Control negativo (sol. Tyrode); Control positivo con

GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% + 100mg/kg; Experimental 2: GLUCOSA10% +

300mg/kg y Experimental 3: GLUCOSA10% + 500mg/kg 32

Anexo 10. Variación de las concentraciones de glucosa en duodeno de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas 33

Anexo 11. Variación de las concentraciones de glucosa en yeyuno de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas 34

Anexo 12. Variación de las concentraciones de glucosa en íleon de Rattus rattus var. Albinus

medidos cada media hora durante dos horas 35

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RESUMEN

El propósito de la presente investigación fue determinar el efecto del extracto

hidroalcohólico de Salvia hipanica sobre la absorción intestinal de la glucosa en Rattus

rattus var. Albinus, por lo cual se obtuvo el extracto por maceración hidroalcohólica de

harina de semillas de “chía”, luego de filtrado y evaporado el solvente.

Se trabajó en cinco grupos de ratas con cinco individuos cada uno. Un grupo control

negativo, un control positivo y experimentales a dosis diferentes del extracto de chía;

cada individuo fue anestesiado con pentobarbital sódico y mediante disección se

extrajo el intestino delgado dividiéndolo en duodeno, yeyuno e íleon.

Cada porción individualmente fue colocado en un sistema de incubación a 37°C en

solución Tyrode con oxigenación continua, el grupo control negativo sin tratamiento

alguno, el control positivo con glucosa al 10% y los experimentales con glucosa al 10%

más 100, 300 y 500mg/dL del extracto hidroalcohólico de “chía” respectivamente. Se

obtuvieron muestras del líquido contenido en cada porción del intestino, a los 0, 30, 60,

90 y 120 minutos, realizándose el dosaje de glucosa leído en espectrofotómetro

SPECTRONIC 20 a 530 nm.

Se encontró que el extracto hidroalcohólico de semillas de Salvia hispanica a

concentración de 500 mg /dL disminuye en forma significativa la absorción intestinal

de la glucosa en la porción duodenal de Rattus rattus var. Albinus mientras que en el

yeyuno e íleon la absorción de glucosa no fue significativa.

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ABSTRACT

The purpose of this study was to determine the effect of alcoholic extract hipanica Salvia on

the intestinal absorption of glucose in Rattus rattus var. Albinus

They worked in five groups of rats with five individuals each. A negative control group, positive

and experimental at different doses of the extract chia Control; each individual was

anesthetized with sodium pentobarbital and dissected small intestine dividing it into

duodenum, jejunum and ileum was extracted.

Each serving individual was placed in a system of incubation at 37 ° C in Tyrode solution with

continuous oxygenation, the negative control group without treatment, the positive control

with 10% glucose and experimental with 10% glucose plus 100, 300 and 500mg / dL of

alcoholic extract of "chia" respectively.

Samples of liquid contained in each portion of the intestine, at 0, 30, 60, 90 and 120 minutes,

performing the assay of glucose read in spectrophotometer SPECTRONIC 20-530 nm were

obtained. It was found that the hydroalcoholic extract of seeds of Salvia hispanica a

concentration of 500 mg / dL significantly decreases intestinal absorption of glucose in the

duodenal portion Rattus rattus var. Albinus while in the jejunum and ileum glucose uptake

was not significant.

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I. INTRODUCCION

La diabetes mellitus (DM) es un desorden metabólico resultado de la deficiencia en

la secreción de insulina, en la efectividad de su acción, o de ambas. Como

consecuencia se produce hiperglucemia crónica con disturbios en el metabolismo de

los carbohidratos, grasas y proteínas, constituyéndose un problema de salud pública

debido a que su prevalencia e incidencia están en incremento; tal es así que para el

año 2000, cerca de 150 millones de personas a nivel mundial padecían de DM y se

estima que para el año 2025 esta cifra se incrementará a cerca de 300 millones

diagnosticados1. Esta enfermedad produce un impacto socioeconómico importante

en el país que se traduce en una gran demanda de los servicios ambulatorios,

hospitalización prolongada, ausentismo laboral, discapacidad y mortalidad producto

de las complicaciones agudas y crónicas 2,3.

La diabetes mellitus es una de las enfermedades crónicas y discapacitantes más

prevalentes en el mundo, constituye un problema de salud pública creciente, a tal

punto de ser considerada una epidemia de carácter mundial. En el Perú se observa

un fenómeno similar, con prevalencia de diabetes mellitus tipo 2 variando entre el

1 y el 8%, siendo Lima y Piura, las regiones más afectadas 4.Se menciona que la

diabetes mellitus afecta a más de un millón de peruanos y menos de la mitad han

sido diagnosticados 5.

Una de las características principales de la diabetes es que durante su evolución

aparecen complicaciones crónicas como angiopatias, ateroesclerosis, hipertensión,

neuropatías entre otros que son, en última instancia, la causa principal de la

morbimortalidad en pacientes diabéticos y provocan una importante disminución de

la calidad de vida de éstos. Asimismo, estas complicaciones son las responsables de

una elevada proporción de los gastos generados por la enfermedad 6.

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Comercialmente se dispone de medicamentos para el tratamiento de la diabetes

mellitus tipo 2; sin embargo, los medicamentos recientemente desarrollados son

generalmente menos potentes, a menudo menos efectivos en disminuir la

glucemia, más caros y además se asocian a eventos adversos serios 7.

En el 2006 y 2007 se evidenció que las glitazonas no solo incrementaron el riesgo

de insuficiencia cardiaca, sino también de infarto de miocardio y el riesgo de

fracturas óseas en mujeres 8, 9.Además, recientes estudios clínicos han demostrado

que los análogos de la insulina, y en particular la insulina glargina, incrementan el

riesgo de cáncer de mama. El nuevo conocimiento generado sobre la seguridad de

los fármacos hipoglicemiantes ha producido que la Food Drug

Administration (FDA) y la European Medicines Agency (EMEA) evalúen estos

fármacos, realicen nuevas advertencias, contraindicaciones y retiro de

medicamentos para su comercialización 10.

Generalmente para el manejo terapéutico del control de la diabetes mellitus tipo

2 (DM2) se utilizan medicamentos con diferentes estructuras químicas y

mecanismos de acción, que tienen el propósito de normalizar los niveles de

glucosa en sangre. Los tratamientos son administrados de por vida, lo que

representa un alto costo económico. Por otra parte, la aparición de efectos

adversos o reacciones de hipersensibilidad son situaciones que obligan a

suspender el tratamiento o cambiarlo constantemente 11.

El control metabólico de la diabetes tiene como objetivo la normalización de la

glucemia, intentando aliviar los síntomas derivados de la hiperglucemia y evitar la

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aparición, o al menos retrasar, la evolución de dichas complicaciones. Uno de los

aspectos que, hoy día, se siguen estudiando es el impacto de los diferentes

abordajes terapéuticos de la DM2 sobre su evolución 12.

Las plantas medicinales se convierten en una alternativa válida con el fin de

mejorar la calidad de vida de quienes padecen la más importante enfermedad

relacionada con el páncreas endocrino; resultando de particular interés aquellas

que manifiesten tanto propiedades hipoglucemiantes como antioxidantes. Ciertas

especies empleadas popularmente para el tratamiento de la diabetes han sido

probadas científicamente con el fin de corroborar esta bioactividad 13, 14.

Salvia hispanica L., comúnmente conocido como “chía”, es una planta anual que

pertenece a la familia de Lamiaceae. Proviniendo en tales países como Guatemala,

México y Colombia, la semillas de “chía” se usó y se consumió como una fuente de

energía e incorporado en varios alimentos en la dieta de la civilización azteca

indígena15.

El contenido del lípido en semillas de “chía” varía del 25% al 40%, con el 60% de

los lípidos totales arreglado de ALA (n-3) y el 20% formado de ácido linoleico (n-

6) 16. Cuando el aceite se extrae de la semilla de chía, lo que permanece en una

concentración significativa de fibra alimenticia (33.9g/100g) y proteína (17g/100g)

17.

De fibra alimenticia total, la mayor fracción (el 53.45g/100g) comprende la fibra

insoluble, que juega un papel en saciedad y función del intestino apropiada 18. Por

su alto contenido en magnesio y compuestos fenólicos (principalmente quercetina

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y kaempferol), la semilla de “chía” ofrece la capacidad de antioxidante significativa

19, mientras que el contenido de calcio y potasio sugiere que puede ser provechoso

en el control tensión arterial alta 20.

En nuestro país, de acuerdo a un estudio de alcance nacional realizado por el

Instituto Nacional de Salud, la prevalencia de Diabetes Mellitus en mayores de 20

años para el año 2005 fue de 2,8%; asimismo, los estudios de factores de riesgo

para enfermedades no transmisibles (FRENT) realizados por la Dirección General

de Epidemiología encontraron una prevalencia de Diabetes mellitus de 2,8 a 3,9%

en ciudades de la costa y sierra (Lima, Callao, Villa el Salvador, Trujillo,

Huancayo),es esperable un incremento de los casos de DM y de consecuencias

fatales21.

Los medicamentos para el control glicémico interfieren con la acción de los

enzimas alfa- glicosidasas intestinales sobre los carbohidratos complejos y

disminuyen la absorción de glucosa por el intestino 22; En la actualidad y después

de numerosos estudios se han revelado las notables propiedades nutricionales de

la semilla de “chía”, por lo que su consumo es recomendable debido a su alto

contenido en aceite, proteínas, antioxidantes, minerales y fibra dietética 23.

La semilla posee 25-38% de aceite, el cual contiene un alto contenido de ácidos

grasos omega-3 y omega-6 (principalmente ácido linolénico 50-67% y ácido

linoleico 17-27%, respectivamente); 15 g de chía aportan más de 3000 mg de

Omega 3 y se recomienda el consumo de mínimo 3g de omega 3 como mecanismo

de prevención para el desarrollo de enfermedades cardiovasculares 24.

El ácido graso Omega – 6 derivan del ácido linoleico el cual se encuentra

asociado a los fosfolípidos de membrana, además puede ser oxidado a una

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variedad de compuestos eicosanoides importantes en la señalización célula –

célula. Tiene un alto contenido de fibra (18-30%) controla la ansiedad y el apetito

ya que retrasa el vaciamiento gástrico y por tanto disminuiría la liberación de

glucosa al torrente sanguíneo, siendo así un aliado para personas con diabetes

mellitus II. 25

En la actualidad se siguen usando los medicamentos que para el control

glucémico y son de tres tipos: insulina, hipoglucemiantes orales y

antihiperglicemiantes. Entre estos últimos se encuentran la acarbosa que se

obtiene de Actinoplanes utahensis y el fibraguar de la Cyamopsis tetragonoloba,

que interfieren la acción de las enzimas alfa glicosidasas intestinales sobre los

carbohidratos complejos y disminuyen la absorción de glucosa por el intestino 11.

Resulta importante para los pacientes diabéticos poder contar con fármacos

capaces de controlar los estados hiperglicémicos.

La semilla de “chía” es fuente de calcio que es necesario para la contracción

muscular, coagulación sanguínea, trasmisión de impulsos nerviosos, secreción

hormonal, presión arterial y activación enzimática y fuente de magnesio para que

la insulina lleve la glucosa dentro de las células y para el uso de la misma 26.

Además, la chía contiene una alta proporción de compuestos antioxidantes

(flavonoides, tocoferol, beta-caroteno), por lo que evita la rancidez de los ácidos

grasos insaturados en los alimentos que la contiene 27.

Por sus beneficios resulta de suma importancia el desarrollo de su estudio sobre

propiedades antidiabéticas que no perjudiquen nuestro sistema, siendo los

objetivos:

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- Evaluar el efecto del extracto hidroalcohólico de Salvia hispanica “chía” sobre la

absorción intestinal de la glucosa en Rattus rattus var. Albinus.

- Determinar el tiempo de la efectividad del extracto hidroalcohólico de Salvia

hispanica “chía” sobre la absorción intestinal de la glucosa en Rattus rattus var.

Albinus.

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II. MATERIAL Y METODOS

2 Material de estudio

1.1. Muestra biológica

Rattus rattus var. Albinus de la ciudad de Trujillo

Semillas de Salvia hispanica “chía”

3 Procedimiento

3.1. Preparación de harina de las semillas de Salvia hispanica “chía”.

Las semillas de “chía” fueron limpiadas de los residuos orgánicos e

inorgánicos, luego fueron molidas dos veces con molino de mano.

3.2. Obtención del extracto de las semillas de Salvia hispanica “chía”.

El polvo fino obtenido, se procedió a macerar en alcohol al 70 % en

proporción de 1:4, en un frasco ámbar por 6 días, con agitación de 5

minutos diarios. Después del tiempo transcurrido, primero se colocó el

macerado en gasa estéril, luego filtrado (papel filtro Wathman Nº 1) y el

líquido obtenido se sometió a evaporación mediante flujo de aire

constante para eliminar todo el líquido extractante (alcohol y agua) 28.

Finalmente el extracto concentrado se guardó en refrigeración hasta su

uso en el presente proyecto de investigación (Ver Anexo 4).

3.3. Disección de los ejemplares Rattus rattus var. Albinus.

Las ratas en estudio estuvieron en ayuno (12 horas), fueron anestesiadas

con pentobarbital sódico (Halatal) con una dosis de 1 mL por kilogramo

de peso corporal y se les extrajo todo el intestino delgado, el cual fue

lavado con solución de Tyrode para eliminar la sangre 29.

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3.4. Preparación del intestino delgado de los ejemplares Rattus rattus var.

Albinus.

El intestino de cada rata se dividió en tres porciones (duodeno, yeyuno e

íleon) cada uno de 10 cm y cada parte se evertido de manera que las

vellosidades queden hacia fuera, colocados en un sistema de incubación

a 37 °C y con aireación constante; las porciones tuvieron los extremos

fuera del contenedor atados con hilo y sostenidos con cinta adhesiva30

según el diseño experimental estas porciones fueron llenadas con

solución de Tyrode con la siguiente composición (en g/L): NaCl 8.00, KCl

0.40, CaCl2. 2H2O 0.20, MgCl2 0.10, NaHCO3 1.00 NaH2PO4 0.05 31(Ver

Anexo 5).

3.5. Evaluación de las concentraciones 100, 300 y 500 mg/dL del extracto

hidroalcohólico de semillas de Salvia hispanica sobre la absorción

intestinal de glucosa en Rattus rattus var. Albinus.

*: Solución de Tyrode modificado (sin glucosa)

**: Concentración del extracto hidroalcohólico de Salvia hispanica.

3.5.1. Toma de muestra.

De cada porción de intestino (duodeno, yeyuno e íleon) se

Grupos Intestino Contenedor Ejemplares

Control negativo Solución de

Tyrode*

Solución de

Tyrode*

5 ratas

Control positivo Solución de

Tyrode*

Glucosa 10%

5 ratas

Experimental 1

Solución de

Tyrode*

Glucosa

10%+100mg/dl**

5 ratas

Experimental 2 Solución de

Tyrode*

Glucosa

10%+300mg/dl**

5 ratas

Experimental 3 Solución de

Tyrode*

Glucosa

10%+500mg/dl**

5 ratas

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procedió a tomar una muestra de 0.5 mL del contenido con una

pipeta Pasteur y colocadas en un vial para el dosaje de glucosa.

El tiempo para cada toma de muestra fue de 0, 30, 60, 90 y 120

minutos 32.

3.5.2. Análisis de glucosa

Las muestras de cada porción del intestino (duodeno, yeyuno e

íleon) estas fueron analizadas con el reactivo para glucosa

(Glicemia enzimática, WIENER LAB.) que dió una reacción de color

y se midió en espectrofotómetro a una longitud de onda de 530nm

(Ver Anexo 6).

4. Análisis de datos

El análisis estadístico se llevó a cabo en base al paquete estadístico STATGRAF

aplicando la prueba de Análisis de Varianza Unidireccional (ANOVA) para ver la

respuesta de la concentración de 100, 300 y 500 mg/dl del extracto hidroalcohólico

de semillas de “chía” sobre la absorción intestinal de la glucosa de los ejemplares.

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III. RESULTADOS

Se determinó las concentraciones de glucosa del intestino delgado, en la porción del duodeno

la concentración de 500mg/dl del extracto hidroalcohólico de Salvia hipanica “chía” disminuyó

la glucosa en comparación con el grupo control positivo, las concentraciones de glucosa varían

con el tiempo posterior a 60 minutos, mientras en yeyuno e íleon de los animales de

experimentación (Rattus rattus var. albinus) no hubo absorción intestinal de glucosa.

Fig. 1. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en

duodeno de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos

horas.

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Fig. 2. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en

yeyuno de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos

horas.

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Fig. 3. Concentración de glucosa promedio de grupos controles experimentales en íleon

de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas.

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IV. DISCUSION

Las plantas son consideradas un laboratorio biosintético, que elaboran

metabolitos primarios: carbohidratos, proteínas, lípidos; participando en la

actividad celular de todo ser vivo además sintetiza principios activos, como es en

la semilla de “chía” en la que se encuentran flavonoides y otros antioxidantes

como el ácido clorogénico, ácido cafeíco, miricetina, kaempferol, quercetina,

betacaroteno (vitamina A) y tocoferol (vitamina E). Considerados los metabolitos

secundarios; dichos compuestos difieren por su carácter químico, estructura

potencial y concentración, lo que producen ciertos efectos beneficiosos en el

organismo 33.

Sobre la biodisponibilidad absorción y metabolismo poco se conoce, pero es

sabido que los diferentes grupos de flavonoides poseen distintas propiedades

farmacocinéticas. Los compuestos solubles son metabolizados en el tracto

gastrointestinal. Las agliconas libres como la quercetina, genisteína y compuestos

simples como los ácidos ferúlico, cafeico y p-cumárico son absorbidos a través de

la mucosa del intestino delgado, determinado mediante ensayos experimentales

en ratas 34 de estos compuestos bioactivos reducen el riesgo de muchas

enfermedades, incluyendo enfermedades crónicas entre ellas la diabetes 35.

Entre las actividades biológicas de los compuestos fenólicos destacan su

capacidad de establecer radicales libres, regular la apoptosis e inducir enzimas

antioxidantes. Además, se ha reportado que modulan el metabolismo de

carbohidratos, atenúan la hiperglucemia, debido a que reducen la absorción

intestinal de los carbohidratos ingeridos, modulan los enzimas implicados en el

metabolismo de la glucosa y estimulan la secreción de la insulina36.

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Pueden unirse a los polímeros biológicos, tales como enzimas, transportadores

de hormonas, y ADN; quelar iones metálicos transitorios, tales como Fe2+, Cu2+,

Zn2+, catalizar el transporte de electrones, y depurar radicales libres. Debido a este

hecho se han descrito efectos protectores en patologías tales como diabetes

mellitus, cáncer, cardiopatías, infecciones víricas, úlcera estomacal y duodenal, e

inflamaciones 37.

El efecto inhibitorio en la absorción intestinal de glucosa mediante un bloqueo

de los cotransportadores de Na+ - Glucosa presentes en la membrana apical de los

enterocitos se atribuye a los flavonoides 38.

Los flavonoides actúan bloqueando o inhibiendo al cotransportador SGLT-1 en la

membrana de borde en cepillo o produciendo una alteración del gradiente Na+ -K

+ en la membrana del enterocito por lo que se produciría una disminución en la

absorción de glucosa a nivel del intestino de las ratas diabéticas 39.

La relación que existe entre los flavonoides y la actividad antidiabética ha sido

estudiada en modelos in vivo se estudiaron el efecto del flavonoide isoquercetina

en ratones con diabetes mellitus inducida. Los autores plantearon que la

isoquercetina inhibe la acción de la enzima α-glucosidasa localizada en el epitelio

del intestino delgado. La inhibición de la α-glucosidasa retrasa la absorción de

carbohidratos en el intestino delgado y consecuentemente disminuye la

hiperglucemia 40.

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Aunque es difícil desarrollar un sistema único in vitro que puede simular todas

las condiciones existentes en el intestino humano, algunos de los modelos in vitro

que han sido aplicados en el estudio de absorción intestinal de metabolitos 41.

En la porción del duodeno el grupo control positivo obtuvo un promedio de las

concentraciones de la glucosa de 37.69 mg/dL a los sesenta minutos. El promedio

de las concentraciones de glucosa de duodeno, del grupo experimental 300mg/dL

de extracto hidroalcohólico fue 30.05 mg/dL mientras que en el grupo

experimental de 500mg/dL del extracto fue 21.92 mg/dL (ver Anexo 2).

El tercer grupo experimental de 500 mg/dL del extracto de semillas de Salvia

hispanica presento diferencia significativa de concentraciones de glucosa en las

porción de duodeno a los sesenta minutos (ver figura 1) mientras que en el resto

del tiempo las concentraciones fueron diversas.

Las concentraciones fueron diversas debido a que bajo condiciones óptimas el

saco intestinal es viable hasta aproximadamente 120 minutos 42 mientras que en

la porción del íleon no hubo diferencia significativa de concentraciones (ver figuras

2 y 3), debido a que el epitelio especializado para la absorción de nutrientes se

encuentra principalmente en duodeno y yeyuno mientras que en el íleon

desaparecen gradualmente las vellosidades hasta la mucosa plana del colon 43.

Es posible entonces que la presencia de dichos metabolitos secundarios sean los

responsables del efecto hipoglucemiante en combinación sinérgica o solo alguno

de ellos como se ha reportado en algunos trabajos de investigación. Los

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flavonoides presentan un gran número de actividades farmacológicas entre ellas

la de hipoglucemiante a través de un incremento en la salida de insulina, además

en esta especie también se le atribuye el efecto hipoglucemiante a los taninos por

tener acción astringente controla y evita la hiperglicemia al disminuir la absorción

intestinal 44.

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V. CONCLUSIONES

- El extracto hidroalcohólico de semillas de Salvia hispanica a concentración

de 500 mg/dL disminuye significativamente la absorción intestinal de la

glucosa en la porción duodenal.

- El extracto hidroalcohólico de semillas de Salvia hispanica no demostró

diferencia significativa en la absorción intestinal de la glucosa en Rattus

rattus var. Albinus.

- El tiempo de efectividad de la concentración de 500 mg/dl del extracto

hidroalcohólico de Salvia hipanica fue durante 60 minutos, posterior a este

tiempo las concentraciones variaron.

.

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ANEXOS

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Anexo 1. Promedios de las concentraciones de glucosa en duodeno de Rattus

rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas.

ST: Solución de Tyrode *: Concentración del extracto hidroalcohólico Salvia hispanica.

GRUPOS TIEMPO[min]

CO

NC

ENTR

AC

ION

[m

g/d

l]

0 30 60 90 120

CONTROL NEGATIVO ST

10.94 19.74 18.31 16.99 19.32

CONTROL POSITIVO ST +GLUCOSA 10%

9.77 27.62 37.69 44.44 49.76

EXPERIMENTAL 1 ST +GLUCOSA 10%+ 100 mg/dl*

12.57 19.64 21.45 37.76 41.40

EXPERIMENTAL 2 ST +GLUCOSA 10%+ 300 mg/dl*

11.30 16.33 30.05 51.41 71.48

EXPERIMENTAL 3 ST +GLUCOSA 10%+ 500 mg/dl*

10.53 17.22 21.92 42.65 73.46

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Anexo 2. Promedios de las concentraciones de glucosa en yeyuno de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas.

GRUPOS TIEMPO[min]

CO

NC

ENTR

AC

ION

[m

g/d

l]

0 30 60 90 120

CONTROL NEGATIVO ST 10.00 20.86 18.40 16.56 18.40

CONTROL POSITIVO ST +GLUCOSA 10%

9.46 25.42 32.97 41.29 48.60

EXPERIMENTAL 1 ST +GLUCOSA 10% + 100 mg/dl*

12.06 19.74 25.09 35.12 46.43

EXPERIMENTAL 2 ST +GLUCOSA 10%+ 300 mg/dl*

11.35 22.44 35.03 54.57 71.45

EXPERIMENTAL 3 ST +GLUCOSA 10%+ 500 mg/dl*

10.26 23.26 37.33 52.68 75.83

ST: Solución de Tyrode *: Concentración del extracto hidroalcohólico Salvia hispanica.

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Anexo 3. Promedios de las concentraciones de glucosa en íleon de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante dos horas.

GRUPOS TIEMPO[min]

CO

NC

ENTR

AC

ION

[m

g/d

l]

0 30 60 90 120

CONTROL NEGATIVO ST 10.78 17.78 17.21 19.51 20.50

CONTROL POSITIVO ST +GLUCOSA 10%

9.74 20.06 30.77 37.79 43.06

EXPERIMENTAL 1 ST +GLUCOSA 10% + 100 mg/dl*

12.08 20.20 23.66 27.26 39.57

EXPERIMENTAL 2 ST +GLUCOSA 10%+ 300 mg/dl*

10.25 22.58 40.26 55.70 68.56

EXPERIMENTAL 3 ST +GLUCOSA 10%+ 500 mg/dl*

10.98 20.60 49.83 71.98 95.11

ST: Solución de Tyrode *: Concentración del extracto hidroalcohólico Salvia hispanica

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Anexo 4. Filtración del extracto hidroalcohólico de las semillas de Salvia hispanica “chía”.

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Anexo 5. Preparación del intestino delgado de los ejemplares Rattus rattus var.

Albinus en el sistema de incubación.

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Anexo 6. Evaluación del efecto de las concentraciones 100, 300, 500 mg/dl del

extracto hidroalcohólico de las semillas de Salvia hispanica “chía”.

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.

Anexo 7. Variación de las concentraciones de glucosa en duodeno de Rattus rattus var.

Albinus en los diferentes grupos experimentales: Control negativo (sol.

Tyrode); Control positivo con GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% +

100mg/kg; Experimental 2: GLUCOSA10% + 300mg/kg y Experimental 3:

GLUCOSA10% + 500mg/kg

[mg/

dL]

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Anexo 8. Variación de las concentraciones de glucosa en yeyuno de Rattus

rattus var. Albinus en los diferentes grupos experimentales:

Control negativo (sol. Tyrode); Control positivo con

GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% + 100mg/kg;

Experimental 2: GLUCOSA10% + 300mg/kg y Experimental 3:

GLUCOSA10% + 500mg/kg.

[mg/

dL]

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Anexo 9. Variación de las concentraciones de glucosa en íleon de

Rattus rattus var. Albinus en los diferentes grupos

experimentales: Control negativo (sol. Tyrode); Control

positivo con GLUCOSA10%; Experimental 1: GLUCOSA10% +

100mg/kg; Experimental 2: GLUCOSA10% + 300mg/kg y

Experimental 3: GLUCOSA10% + 500mg/kg.

[mg/

dL]

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Anexo 10. Variación de las concentraciones de glucosa en duodeno

de Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora

durante dos horas.

[mg/

dL]

[Min]

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Anexo 11. Variación de las concentraciones de glucosa en yeyuno de

Rattus rattus var. Albinus medidos cada media hora durante

dos horas.

[mg/

dL]

[Min]

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Anexo 12. Variación de las concentraciones de glucosa en íleon de Rattus rattus var.

Albinus medidos cada media hora durante dos horas.

[Min]

[mg/

dL]

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