UNIVERSIDAD CENTRAL DEL ECUADOR CIENCIAS QUIMICAS BIOQUIMICA CLINICA

LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA CLINICA I

Escherichia coli enteropatógena INTEGRANTES: Cacarin KarinaOntaneda Yessenia Quishpe JosuéRemache Angie

Índice 1. INTRODUCCION 2. PATOGENESIS MOLECULAR• Adherencia inicial• Inyección de factores y

transducción de señales• Contacto intimo y formación

de pedestales 3. DIAGNOSTICO DE L A EPEC4.CASOS CLINICOS

DEFINICIÓN:

Bacteria comensal del intestino grueso ,asociado a una gran diversidad de síndromes clínicos que van desde septicemia, gastroenteritis, meningitis e infección de vías urinarias

EPIDEMIOLOGIATransmisión fecal –oralAlimentos y agua contaminados

AGENTE CAUSAL • Bacilos Gram negativos • Móviles• Anaerobios, Aerobios facultativos • Antígeno somático O • Antígeno capsular K• Antígeno flagelar H

• Fermentan glucosa• Fermentan lactosa

(colonias acidas ,rosadas)• Reducen nitratos a

nitritos• Oxidasa negativa• Producción de gas FACTORES DE VIRULENCIA

INTRODUCCIÓN

• Pilis o fimbrias • Pilis tipo 1: se fija a manosa

en cualquier CE• Pili P : se une a

digalactósido de células uretrales y eritrocitos

• AFC: se fija al enterocito• PFH: se fija a enterocitos

PATOGENESIS MOLECULAR EPEC ALTERACION HISTOPATOLOGICA

INTESTINO A/E

EL MODELO DE PATOGENESIS EPEC 1. Adherencia Inicial ( fundamental en la patogénesis )2. Inyección de factores y traducción de señales 3. Contacto intimo

Fase1: adherencia inicial• Entre las mismas

bacterias Fase 2: adherencia de las bacterias a la célula huésped

Intestino del huésped

2.Inyeccion de factores y transducción de señales

Locus de la eliminación del enterocito o LEE(LEE1-LEE5)

LEE: Estos operones forman 3 dominios de virulencia que codifican:1. Los operones LEE1,2 Y 3

que codifican las proteínas del SSTT las cuales forman un complejo de aguja CA.

LEE4: Genes de proteínas EspLEE5: codificadas las adhesinas bacteriana intimina y su receptor llamado Tir

Proteínas EscN --ATP

LESIÓN A/E

DIAGNOSTICO EPEC Aislar muestra de heces en medios selectivos y diferenciales Agar MacConkey o el agar de eosina y azul de metileno EMB. Sospecha de brote epidémico diferenciar EPEC de las E. coli de flora normal

METODOLOGIAS

Serotipificacion Ensayo de adherencia en células HEp-

2 Pruebas FAS (tinción fluorescente para

actina) Técnicas de biología molecular

(amplifica genes que codifican a proteínas de virulencia)

SEROTIPIFICACION Método que logro reconocer a tipos

específicos de E. coli (esquema kauffman)

Diarrea infantil Etapas de EPEC aisladas de heces de

niños con diarrea (75%) Recuperación de entero patógenos a

partir de heces

Ensayo de adherencia en células HEp-2 Prueba fenotípica de diagnostico Estándar de oro para la

identificación de EPEC Identifica EPEC dado que

bacterias se agrupan en cúmulos o microcolonias sobre las células epiteliales en cultivo.

reconocer EAEC, se agrupan y forman empalizadas que se adhieren a las células y al cristal}

PRUEBAS DE FAS

Se emplea con amplitud en estudios epidemiológico y la investigación básica

Se observa la acumulación de actina del citoesqueleto en forma de puntos fluorescentes

Se encuentran pedestales y bacterias adheridas

PROCEDIMIENTO DE LA PRUEBA FAS Modo directo, biopsias intestinales en niños con

enfermedad diarreica Cultivos de células HEp-2, HeLa o Caco-2

infectadas con la cepa aislada de las heces del paciente

Se usa faloidina que une constitutiva a la actina intracelular

Se acopla algún fluorocromo (rodamina) se observa citoesqueleto de actina de CE no infectadas “fibras de estrés”

PRUEBAS DE FAS

Puntos de acumulación de actina sobre células infectadas por EPEC: PRUEBAS DE FAS POSITIVA

Los ensayos de adherencia y prueba de fas deben ir acompañada de técnicas de biología molecular

Detecta genéticamente los factores de virulencia

BIOLOGIA MOLECULAR Estudios moleculares Mediante la reacción de PCR y con sondas

genéticas Blancos genéticos o secuencia del plásmido EAF que se emplea

como sonda o Amplificación por PCR de la subunidad

estructural de los BFP (bfp A) o Gen que codifica la intimina (eae)

BIOLOGIA MOLECULAR

PCR para identificar EPEC se realiza en un tiempo menor a 5 horas

Manera rápida y especifica de diagnostico Se ha probado cepas provenientes de

muestras clínicas y alimentos

Ensayo que utiliza la tecnología de microarreglos de DNA

Sondas con genes específicos de serotipos de E. coli

1. O552. O1113. O1144. O1285. O157 Extender la detección de antígenos

somáticos así como antígenos flagelares

BIBLIOGRAFIA :

Vidal J., Canizález A., Gutierrez J., Navarro F., (septiembre-octubre de 2007), PATOGENESIS MOLUCULAR, epidemiologia y diagnostico de Escherichia coli enteropatógena, salud publica de mexico/ vol.49, No.5, recuperado el 17 de Dic 2015