[ 13 ]

【実験】

抗てんかん薬の血中濃度測定とその解析

血中濃度をモニターしながら薬物を安全かつ有効に投与する TDM の概念は，ジギタリス製剤，免疫抑制

薬，抗てんかん薬を中心として広く医療に定着している．薬を処方するうえで匙加減は欠かせないが，その

科学的根拠を与える検査値として血中薬物濃度の重要性がある．本実習では TDM の基本を理解することを

目的として，抗てんかん薬の血中濃度測定を HPLC 法を用いて行い，得られた血中濃度及び与えられた患者

情報から投与量の妥当性及び投与計画の立案を行う．

○分析対象医薬品：

フェノバルビタール

カルバマゼピン

○使用機器及び測定条件：

ポンプ，Waters Alliance 2695 separations module；

検出器，Waters 2996 photodiode array detector；

データ処理ソフト：Empower ™ 2 Chromatograph

分離カラム，Wakopack Handy ODS (150× 4.6 mm, i.d.)；

溶離液，7 mM Acetate buffer (pH 7)/CH3CN (=78:22, v/v%)；

流速，1.5 ml/min；

測定波長，240 nm； 試料注入量，20 µl．

○血液試料の前処理：

１）エッペンチューブに血漿 100 µl 及び内標準物質溶液 200 µl を加える．

２）これにアセトニトリルを 800 µl 加えて 30秒間撹拌する．

３）3000 rpm, 10 分間，遠心分離を行う．

４）上清を採り，ろ過する．

５）ろ液を専用のバイアルに入れ HPLC にセットする．

○血中濃度の算出：

１）HPLC 分析により得られたフェノバルビタールあるいはカルバマゼピンのピーク面積と内標準物質のピ

ーク面積との比を求める．

２）それぞれのシステムの検量線から，得られたピーク面積比を基に血中薬物濃度を算出する．

[ 14 ]

血中テオフィリン濃度の測定

○分析対象医薬品：

テオフィリン

7-(2-ヒドロキシエチル)テオフィリン（内部標準）

○使用機器及び測定条件：

ポンプ，Shimadzu LC-10 AT VP；

検出器，Shimadzu SPD-10A VP；

分離カラム，Wakopak Handy ODS (150× 4.6 mm, i.d.)；

溶離液，H2O/MeOH (=80:20, v/v)；

流速，1.0 ml/min；

測定波長，273 nm； 試料注入量，20 µl．

○血液試料の前処理：

１）エッペンチューブに血漿 50 µl を採り，これに 0.1 M リン酸緩衝液 (pH 6.6) を 50 l

及び内標準物質のクロロホルム溶液 1 ml を加える．

２）これを 1 分間撹拌後，3500 rpm, 10 分間で遠心分離を行う．

３）有機層 800 µlを採り，窒素気流下減圧乾固させる．

４）残渣に溶離液 100 l を加え HPLC 分析に供する．

○血中濃度の算出：

１）HPLC 分析により得られたテオフィリンのピーク高さと内標準物質のピーク高さとの

比を求める．

２）検量線から，得られたピーク高さ比を基に血中薬物濃度を算出する