DNA MitocondrialMedicina Forense

Jonathan H. Nakata Orientadora: Dr. Cintia Fridman

Mitocndria

Uma das mais importantes organelas celulares Presente na maioria dos eucariontes Processamento e converso de glicose e oxignio em energia na forma de ATP -oxidao de cidos graxos, o Ciclo de Krebs, e a Cadeia Respiratria Na matriz mitocondrial existem protenas, ribossomos e DNA

DNA Mitocondrial

DNA extra-cromossmico, circular Fita dupla, no contm histonas Cada mitocndria possui de duas dez cpias de mtDNA Herana matrilinear Alta taxa de mutao, em funo da baixa fidelidade da mtDNA Polimerase e pela ausncia de mecanismo de reparo

DNA Mitocondrial

16569pb, seqenciado inicialmente por Anderson et al., 1981 A seqncia de Anderson et al. revisada denominada Cambridge (referncia)

Possui apenas xons, sendo 37 genes codificando em 13 protenas, 22 tRNAs e 2 rRNAsHVI e HVII, regies no

codificadoras, na ala D-loop

DNA Mitocondrial na Medicina Forense

De 2 10 cpias por mitocndria, tendo at 1000 mitocndrias por clula Anlise de materiais que sejam muito antigos ou apresentem um avanado grau de decomposio

Esta tcnica de anlise forense tem sido utilizada com sucesso por laboratrios, sendo de grande interesse para a comunidade cientfica, para a Justia, para a Polcia e para o Exrcito

Com exceo das mutaes, a seqncia idntica para todos os familiares maternosAlto grau de polimorfismos na regio controle, ala D-loop (1100pb, regio no codificadora), hipervariveis I e II (HVI e HVII), amplificados por PCR gerando um molde para ser seqenciado

Procedimento

Extrao do mtDNA PCR inicial para amplificao de HVI e/ou HVII PCR secundria para enexao das bases fluorescentes Reao de precipitao Sequenciamento Anlise dos resultados BioEdit

Extrao do mtDNA

Vdeo

PCR

Sequenciamento

Anlise dos Resultados - BioEdit

mtDNA x DNA NuclearVantagens

Desvantagens

Genoma pequeno e volumoso, facilitando a anlise de uma amostra escassa e/ou em alto grau de decomposio/antigos Casos de desaparecimento com herana matrilinear conhecida

No pode ser utilizado para testes de paternidade No identificao do indivduo e apenas como membro de uma famlia Tcnica trabalhosa e de custo elevado

ProjetoDados

100 mes e 100 filhos Possuem parentesco comprovado por teste de paternidade Anlise mtDNA Regies HVI e HVII Parmetro de comparao: Cambridge

ProjetoProcedimento

Comparar sequenciamento obtido com Cambridge Procura por SNPs e polimorfismos de comprimento Anotar a posio das bases trocadas e a respectiva troca Pela herana matrilinear, o filho possui os mesmos polimorfismos

ProjetoObjetivos

Cruzar resultados obtidos em um banco de dados Parear em teste cego os filhos com suas respectivas mes Quantificar a herdabilidade de heteroplasmias passadas de uma gerao outra