EUROIMMUN

Differentialdiagnostik autoimmuner

ZNS-Erkrankungen

Teil 1 – paraneoplastische Syndrome und

Neuromyelitis optica

Dr. rer. nat. Jasmin Aldag

EUROIMMUN AG

EUROIMMUN

Stiff-Person-

Syndrom

Autoimmun-

Neuropathie

Myasthenie-

Syndrom

Autoimmun-

Enzephalitis

Zerebelläre

Syndrome

Erkrankungen mit

Demyelinisierung

Antikörper-assoziierte

Syndrome

EUROIMMUN Abbildung modifiziert nach Lancaster and Dalmau, Nat Review Neurol 2012

Intrazelluläre Antigene

Hu, Yo, Ri, CV2, Ma, SOX1,

Zic4, ANNA-3, PCA-2, GAD

Zelloberflächen-/Synapsenantigene

NMDAR, AMPAR, GABABR, VGKC,

LGI1, CASPR2, mGluR1, mGluR5,

GlyR, DPPX, D2R, AQP4, Tr, AChR

Autoantikörper in der Neurologie

EUROIMMUN

Paraneoplastische neurologische Syndrome

(PNS)

• Erkrankungen des ZNS und PNS, die in

unmittelbarem Zusammenhang mit einem

Tumorleiden auftreten.

• Nicht direkt durch den Tumor, seine Metastasen

oder Therapie und Bestrahlung verursacht.

EUROIMMUN

Klinische Bedeutung paraneoplastischer

Syndrome

• Antikörper können bis zu 5 Jahre

vor einem Tumornachweis auftreten

• Regelmäßige Tumorsuche mittels

PET-Scan (2-4/Jahr für 4 Jahre)

erforderlich

• Ziel: Frühzeitige (kurative) chirurgische Resektion des

Tumors

Wikipedia

EUROIMMUN

• anti-Hu (ANNA-1) SCLC, Neuroblastom • anti-Yo (PCA-1) Ovar, Mamma, Uterus • anti-Ri (ANNA-2) Mamma, SCLC • anti-Amphiphysin Mamma, SCLC • anti-CV2 (CRMP5) SCLC, Thymom • anti-Ma1 (PNMA1) Mamma, Various

• anti-Ma2/Ta (PNMA2) Testis • anti-Recoverin SCLC

Paraneoplastische neurologische Syndrome

- Gut charakterisierte onconeuronale Antikörper -

Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012

EUROIMMUN

• anti-Tr (PCA-Tr) Hodgkinlymphom, NHL • anti-Zic4 SCLC • anti-SOX-1 (AGNA) SCLC • anti-PCA-2 SCLC • anti-ANNA-3 SCLC

Paraneoplastische neurologische Syndrome

- Teilcharakterisierte onconeuronale Antikörper -

Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012

Wahrscheinlichkeit für Tumor bei positivem Befund: >95%

EUROIMMUN

„Klassische“ Paraneoplastische Syndrome

Leypold et al., Akt Neurol 2012

Subakute sensorische

Neuronopathie (25%) Hu, Amphiphysin, CV2, Ma

Subakute Kleinhirndegeneration

(25%)

Hu, Yo, CV2, Ma, Ri, Tr,

Amphiphysin etc.

Enzephalomyelitis (11%) Hu, CV2, Amphiphysin, Ma

Limbische Enzephalitis (10%) Hu, Ma, CV2 etc.

Opsoklonus-Myoklonus Syndrom

(2%)

Ri, Hu, Ma, NMDAR

EUROIMMUN

Laboratoriumsdiagnostik

von Antikörpern gegen intrazelluläre Antigene

EUROIMMUN

Methoden:

Indirekte Immunfluoreszenz

Westernblot, Linienblot

Zielsetzung:

Nachweis und

Bestätigung paraneoplastischer Antikörper

Yo (PCA-1)

Graus et al., J. Neurol. Neurosurg. 2004; Leypold et al., Akt Neurol 2012

Paraneoplastische neurologische Syndrome

- Strategie zur Antikörperbestimmung -

EUROIMMUN

1.) Indirekter Immunfluoreszenztest: Färbemuster auf neuronalem Gewebe

Primatenkleinhirn

Amphiphysin Hu, Ri Ma Yo CV2

Paraneoplastische neurologische Syndrome

- Strategie zur Antikörperbestimmung -

EUROIMMUN

2.) Bestimmung der Reaktivität mit den

spezifischen Zielantigenen:

Membran-basierte Testsysteme

(Linienblot, Westernblot)

Befundbericht:

Immer Ergebnis der

IIFT und Blotuntersuchung

berücksichtigen!

Amphiphysin

CV2

PNMA2

Ri

Yo

Hu

Recoverin

SOX

Titin

Zic4

GAD65

Tr

Control

EUROIMMUN

Empfehlungen zur Diagnostik eines PNS

EUROIMMUN Aktuelle Neurologie 2012; 39: 60–73

Leitlinien der DNG zur Diagnostik eines PNS

EUROIMMUN

Serum:

Hu, Yo, Ri, Ma, CV2, Amphiphysin, Recoverin, SOX1,

Zic4, Tr, PCA-2, ANNA-3 Intrazelluläre-Antigene

Laboranforderung: Serum oder Liquor?

Liquor und Serum:

NMDAR, GABABR, AMPAR, LGI1, CASPR2, GAD

Oberflächen-Antigene

EUROIMMUN

Rezidivierende entzündliche Erkrankung, die zur Zerstörung der

schützenden Nervenummantelung der Sehnerven und des

Rückenmarks führt.

Neuromyelitis Optica (NMO)

A

B

A

B

C C C

Eugène Devic

(1858-1936)

EUROIMMUN

Rezidivierende entzündliche Erkrankung, die zur Zerstörung der

schützenden Nervenummantelung der Sehnerven und des

Rückenmarks führt.

→ akute Sehstörungen (Erblindung)

→ Muskelschwäche bzw. Lähmung

→ Kontrollverlust von Darm- und

Harnblase

Neuromyelitis Optica (NMO)

A

B

A

B

C C C

Eugène Devic

(1858-1936)

EUROIMMUN

A

B

A

B

C C C

Eugène Devic

(1858-1936)

Patienten mit NMO sprechen auf

Plasmapherese und immunosuppressive

Medikamente an!

Neuromyelitis Optica (NMO)

EUROIMMUN

A

B

A

B

C C C

Eugène Devic

(1858-1936)

Patienten mit NMO sprechen auf

Plasmapherese und immunosuppressive

Medikamente an!

Autoantikörper Marker:

NMO-IgG (Lennon et al. 2004), gerichtet gegen

Aquaporin-4 (AQP-4) (Lennon et al 2005).

Überarbeitete diagnostische Kriterien für NMO (Wingerchuk et

al. 2006) geben den Antikörpern eine bedeutende Rolle.

Neuromyelitis Optica (NMO)

EUROIMMUN Lennon et al., Lancet 2004

Immunofluorescence pattern of bound NMO-IgG in mouse CNS

Identifizierung von Autoantikörpern bei NMO

mittels indirekter Immunfluoreszenz

EUROIMMUN

Laboratoriumsdiagnostik

von Antikörpern gegen AQP4/ NMO-IgG

EUROIMMUN

Transfektion

von Zellen

Recombinant Cell IIFT (RC-IIFT)

DNS

Synthese

von DNS

Transfizierte Zelle

Insertion

ins Plasmid

Antigen

Expression

des Antigens

Bestimmung

von Aak mit IIFT

Plasmid mit DNS

EUROIMMUN

Sehnerv

NMO-IgG:

(Muster)

HEK Kleinhirn

Anti-AQP-4:

HEK (rek. AQP4)

Serologische Diagnose von NMO

Sensitivität NMO (Wingerchuk-Kriterien): 78% (RC-IFT), 73% (IHC)

Spezifität (vs. MS, ADEM, SLE etc.): 100%

EUROIMMUN

Tested at Mayo Clinic

IIF for NMO-IgG (in house)

ELISA for AQP4 (RSR)

FIPA-M (in house)

CBA-E (EUROIMMUN)

Aquaporin-4: Testsysteme P.J. Waters, V.A. Lennon, A. Vincent et al. Neurology 2012

Tested at Oxford University

FIPA-O (in house)

CBA-O (in house)

FACS

CBA-E (EUROIMMUN)

Sechs Testmethoden:

Serumproben:

- 35 NMO

- 25 NMO Spektrum-Erkrankungen (NMOSD)

- Kontrollen: 39 schubförmig remittierende MS, 25 verschiedene

autoimmune Erkrankungen, 22 gesunde Blutspender

EUROIMMUN

Aquaporin-4: Testsysteme P.J. Waters, V.A. Lennon, A. Vincent et al. Neurology 2012

Cohort n IIFT FACS CBA-O CBA-E ELISA FIPA-M/

FIPA-O

NMO 35 17 25 24 21 18 16/ 16

NMOSD 25 12 21 20 20 18 16/ 16

Sensitivity 60 48.3% 76.7% 73.3% 68.3% 60.0% 53.3%

Controls 86 0 0 0 0 0 2/ 0

Specificity 86 100% 100% 100% 100% 100% 97.7%/ 100%

Assays basierend auf AQP4 transfizierten HEK293 Zellen zeigten die

besten Sensitivitäten!

CBA-E eignet sich sehr gut als Test für die Routinediagnostik!

EUROIMMUN

Serum:

Hu, Yo, Ri, Ma, CV2, Amphiphysin, Recoverin, SOX1,

Zic4, Tr, PCA-2, ANNA-3 Intrazelluläre-Antigene

Laboranforderung: Serum oder Liquor?

AQP4 Oberflächen-Antigen

EUROIMMUN

Zusammenfassung

o Diagnostikstrategie:

klassische PNS Antikörper

IIFT (Gewebe) und Immunblot

Antikörper gegen AQP4

IIFT (RC-IIFT (oder Gewebe))

o Untersuchungsmaterial:

Serum (klassische PNS Ak, AQP4)

Liquor und Serum (GAD)

EUROIMMUN

Zusammenfassung

o Antineuronale Ak können mit verschiedenen neurologischen

Syndromen assoziiert sein

o Ak gegen „klassische“ intrazelluläre Antigene sind oft das erste

Anzeichen eines zugrundeliegenden Tumors

o Serologische Differenzierung prognostisch schlechterer NMO von

klassischer MS mittels Anti-AQP4

EUROIMMUN

Danke für Ihre Aufmerksamkeit