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Diagnóstico de laboratorio en Enfermedad Inflamatoria Intestinal
XIV Jornada de la Sociedad Médica de Laboratorio Clínico
22 de noviembre 2016
BQ. Carolina Valenzuela [email protected]
Jefe Sección InmunologíaLaboratorio Nacional y de Referencia InmunologíaSubdepto. Enfermedades No Transmisibles
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Enfermedad inflamatoria intestinal
• Es una alteración inflamatoria, recurrente y crónica del tracto digestivo
• Principales formas de EII son la CU y la EC
• La CU y EC varían en la zona que afectan, la extensión de la inflamación, la lesión tisular resultante y los síntomas asociados
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Inflamación superficial continua y se limita al colon (intestino grueso)
Inflamación transmural (todas las capas del tejido intestinal), irregular (entremezcla con áreas de tejido sano) y se puede presentar en cualquier parte del tracto digestivo (desde la boca hasta el ano)
CU EC
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CUEC
Diarrea
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EII: Colitis ulcerosa y Enfermedad de Crohn
• Alternan brotes con períodos de remisión, lo que implica una sintomatología intermitente a lo largo del tiempo. Retraso en el diagnóstico
• Son de limitada eficacia terapéutica (control de la inflamación y efectos de brotes)
• Deterioro en la calidad de vida del paciente
• Asociada a un aumento de riesgo a cáncer colorrectal
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Patogénesis EII : multifactorial
Susceptibilidad genética del huésped
Factoresambientales
Alteración de la regulación del SI
Disfunción de la barreraintestinal
EII
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Bacterias penetran la barrera epitelial
Montaje de respuesta inflamatoria con un deterioro en la limpieza (“clearence”)
Quiebre de la homeostasis
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Susceptibilidad genética del huésped
- Genes asociados a EII, comunes e
individuales a CU y EC.
- Están asociados a la homeostasis
intestinal:
-función de barrera intestinal
-restitución epitelial
-defensa microbiana
-regulación de la inmunidad innata
-generación de ROS
-autofagia
-regulación de la inmunidad adaptativa
-vías metabólicas
- En general el riesgo de las variantes para
desarrollar EII es pequeño
- EII podría ocurrir cuando múltiples variantes
genéticas estén presentes
- EII podría ocurrir cuando se presenten
factores ambientales en individuos
genéticamente susceptibles
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factores ambientales
- Flora comensal (bacterias, virus, hongos)
- Patógenos
- Antibióticos
- Dieta
- Tabaco
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alteración de la regulación de la RI
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• Diagnóstico diferencial con otras patologías:infecciones bacterianas, virales, parásitos,e.celíaca, s.intestino irritable, etc
• Evaluar condición del paciente: estadonutricional, anemia, alteraciones de laabsorción, etc
Laboratorio en EII
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Laboratorio en EII
• Orientación diagnóstica hacia CU ó EC:anticuerpos que presentan solapamiento; noson lo suficientemente sensibles y específicosen una u otra condición
• Evaluar proceso inflamatorio
• Evaluar respuesta al tratamiento
ANCA en suero
ASCA en suero
PCR
CALPROTECTINA fecal
LACTOFERRINA fecal
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Anticuerpos dirigidos contra antígenos localizados en el citoplasma de los neutrófilos y monocitos
Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilosANCA clase IgG
Granulos específicos:
-Lisozima
-Lactoferrina
Granulos azurofilos:
-Mieloperoxidasa (MPO)
-Proteinasa 3 (PR-3)
-Proteina bactericida incrementadora
de la permeabilidad (BPI)
-Elastasa
-Catepsina G
Citoplasma:
-Calprotectina
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• Vasculitis de vasos pequeños (VAA)
• Enfermedades Inflamatorias Intestinales (Colitis ulcerosa y Enf. de Crohn)
• Hepatitis autoinmune
• Conectivopatías
ANCA clase IgG
relación con patologías
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ANCA clase IgG
relación con patologías
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C.Ulcerosa: 40 - 80%
E.Crohn : 5 - 42%
Anticuerpos anticitoplasma de neutrófilos ANCA clase IgG
Métodos: IFI en neutrófilos humanos (etanol-formalina)ELISA placa recubierta con proteínas específicas de neutrófilos
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c-ANCA
Resultan del artefacto de la fijación con etanol:
El patron p-anca ocurre solo cuando los neutrofilos sonfijados en etanol, el cual permeabiliza la membrana delos granulos citoplasmáticos y permite que lamieloperoxidasa (ag. principal del p-anca; altamentecatiónica) se una a la membrana nuclear la cual tienecarga negativa por el DNA.
p-ANCA
Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177
ANCA clase IgGIFI : placa neutrófilos fijados en etanol
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• Cuando los neutrófilos son fijados en formalina, el patrón p-anca se observa como c-anca, ya que éste reduce la atracción de la mieloperoxidasa hacia el DNA, con lo que permanece en el citoplasma.
Reumatol Clin. 2010;6(3):173–177
ANCA clase IgGIFI : confirmación de p-ANCA en placa formalina
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Formato “panel ANCA” (detección de IgG anti-…)
1. PROTEINASA 3
2. LACTOFERRINA
3. MIELOPEROXIDASA
4. ELASTASA
5. CATEPSINA G
6. BPI (Proteina bactericida incrementadora de la permeabilidad)
ELISAespecificidades ANCA clase IgG
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• A fines de los años 80 se describe el hallazgo de anticuerpos contra S.cerevisiae en el suero de pacientes con EC
• El método ELISA, considera Acs. dirigidos contra el manano (tipo de carbohidrato derivado de la pared celular)
• Aproximadamente 2/3 de los pacientes EC con ASCA IgG+, también lo son para ASCA IgA
• Sólo hasta un 19% de los pacientes EC son ASCA IgA+
Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae
ASCA clase IgG-IgA
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Anticuerpos anti Saccharomyces cerevisiae
ASCA clase IgG-IgA
E.Crohn : 29 - 80%
C.Ulcerosa: 0 – 29%
Método : ELISA placa recubierta con mananos de S.cerevisiae
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• Proteína ubicada en el citoplasma principalmente en neutrófilos, con propiedades antimicrobianas, estable, resistente a la proteólisis bacteriana
• De secreción extracelular en células estimuladas ó liberada cuando hay daño o muerte celular inflamación en el intestino
• Se detecta en heces
• El nivel de cuantificación se correlaciona directamente con la intensidad de la reacción inflamatoria
Calprotectina fecal
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• Almacenamiento muestra
• Mantener la muestra recolectada no más de 5 días a 2-8 ° CAlternativamente, almacenar a -20 °C
• Extracción muestra (sistema estandarizado)
• Obtención sobrenadante
• Ensayar calprotectina inmediatamente
• Almacenar a 2-8 ° C hasta 5 días ó a -20 ° C hasta 4 meses.
Calprotectina fecal
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• Detección por método ELISA.
• Es inespecífica. Puede estar aumentada en muchassituaciones: EII, gastroenteritis infecciosa, enterocolitisnecrosante, carcinoma colo-rectal.
• En desordenes funcionales como SII donde no hay daño enmucosa, pero sí presenta diarrea y dolor abdominal, su niveles normal
Calprotectina fecal
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• En pacientes diagnosticados EII, es útil para evaluar la respuesta al tratamiento
Calprotectina fecal
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