Diagnostique des Bactéries Gram Négatives dImportance Médicale.
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Diagnostique des Bactéries Gram Négatives d’Importance
Médicale
Bactérie Gram Négatives Representatives
• Cocci Gram-negative– Neisseria gonorrhoea;
– Neisseria meningitis
• Bacilles Gram-negatifs– Famille Enterobacteriaceae
• Escherichia coli, Salmonella enterica, Shigella, Klebsiella spp, Proteus spp
– Famille Pseudomonaceae• Pseudomonas spp
– Autres• Morganella morganii
-Flore naturelle du tractus intestinal - Anaérobies facultatif- Oxydase negative- Fermentent le glucose
- Résidents naturels des sols et des eaux-Aérobies strictes- Oxydase positive- Non-fermenteurs
- Flore naturelle des membranes muqueuses des tractus respiratoires et génitaux- Anaérobies facultatifs- Oxydase positive- Fermentent le glucose
Identification des Gram -Oxydase
PseudomonaceaeNeisseriaceae
Fermentation du glucose
PseudomonaceaeNeisseriaceaeEnterobacterEscherichiaKlebsiella
SerratiaProteusSalmonellaShigella
+ -
+-+
Fermentation du lactoseMcConkey-
EnterobacteriaceaeMorganella
Respiration aérobie
Identification des Gram - Lactose +Indole
Escherichia
Citrate (-)
EnterobacterKlebsiella
Enterobacter Klebsiella
+ -
-+
Citrate (+)
Motilité
Quelle est la source de C?
Tryptophane
Quelle est la source de C?
Citrate
Identification des Gram - Lactose -H2S
ProteusSalmonella
Uréase
ShigellaSerratia
Serratia Shigella
+ -
-+
Citrate &Acide de sucrose
Proteus Salmonella
-+
Quelle est la source de C?
CystéineQuelle est la source de N?
Urée, donc protéine utilisé
Test Métaboliques pour l’Identification des Gram -
• MacConkey– Milieu sélectif et différentiel– Prévient la croissance de Gram +– Fermentation du lactose (colonies rose,
non-fermenteurs sont incolorées)
Test Métaboliques pour l’Identification des Gram - (Suite)
• TSI– Trois sucres
• Glucose (limitant)
• Sucrose
• Lactose
– Protéines• Cystéine
– Indicateur• Phénol rouge
Combine de sources de C sont possible?
Qu`est-ce qui est arrivé ici?
#1. Utilise toujours le glucose en 1ier = source de C préféré!
#2. Choisissent entre lactose, sucrose, protéine.
#3.Si protéine utilisé Rxn alkaline(orange) Si sucre utilisé Rxn acidique (jaune)Si utilisé aérobie jaune en haut.Si utilisé anaérobie jaune en bas.
Test Métaboliques pour l’Identification des Gram - (Suite)
• SIM– Milieu semi-solide
• Permet de visualiser la motilité
– Métabolisme de la cystéine
CystéineH2S; H2S+ FeSO4 Précipité noir
– Métabolisme du tryptophane
(A) TryptophaneIndole+NH4 + Pyruvate
(B) Indole+Réactif de Kovac Rouge
Non-inoculé
Non-motile
H2S et motile
Indole+ -
Nom du réactif utilisé?
Quel utilise le tryptophane?
Test Métaboliques pour l’Identification des Gram - (Suite)
• Citrate– Source de carbone unique:
• Citrate
• Indicateur– Bromthymol bleu
• Utilisation du citrate génère des produits alcalins– Change du vert au bleu
Seulement 1 source de carbone possible.
Quel produit change la couleur à bleu?
E. coli = (-)Enterobacter and Klebsiella = (+)
Multi Test: Enteropluri-test
• Tubes de tests métaboliques multiples– Utilisation d’un inoculum constant
– Rapide
– Lecture peut être automatisé
– Préparations et inconsistances normalisé
Quel famille bactérienne est testé?
Enterobacteriaceae
PERCER DES TROUS ICI
Voir le vidéo au lien suivants:
http://www.youtube.com/watch?feature=player_detailpage&v=l5qHyr1FULE
Extra:
https://www.youtube.com/watch?v=wWj5LvLSHD8