Diagnóstico Prenatal con DNA Fetal en Sangre Materna

Interno: Cristián Gálvez ArayaDocente Coordinador: Dr. Juan Quezada

Docente Guía: Dr. Carlos SaavedraInternado de Gineco-Obstetricia

Universidad de ValparaísoCampus San Felipe

25-07-2012

Tabla de Contenidos Introducción.

Generalidades DNA Fetal.

Investigaciones Recientes: Usos.- DNA Fetal en Orina materna.- Determinación del Sexo fetal.- Determinación del Grupo Rh.- DNA fetal y Parto Pretérmino.- DNA fetal y Anomalías Cromosómicas.- DNA fetal y Preeclampsia/RCIU.- Otras Patologías Estudiadas.

Conclusiones.

Bibliografía.

1. IntroducciónDiagnóstico Prenatal:

Técnicas No Invasivas:- Ultrasonido.- RNM.

Técnicas Mínimamente Invasivas:- DNA Fetal Libre.- Diagnóstico Genético Preimplantacional.

Técnicas Invasivas:- Biopsia de Vellosidades Coriales.- Amniocentesis.- Cordocentesis.

S.L. Collins et Col., Prenatal diagnosis: Types and techniques, Early human development 88, 3-8, 2012.

Más Gestantes > 35 años

Avances Genética Molecular

1. Introducción

Anormalidad Ultrasonido

PROCEDIMIENTO INVASIVO

1. Introducción

Complicaciones Métodos Invasivos:

- Metrorragia (1 a 40 %)

- Aborto Espontáneo (0,5 a 5 %)

- Infección

- Incompatibilidad Rh en la Madre

- Ruptura de Membranas

*** Poseen una “ventana de tiempo”

1. Introducción

Células Fetales en Sangre Materna (`70) :

Enriquecimiento – Purificación – Análisis Genético (DNA).

Células Trofoblásticas: Desde vellosidades coriónicas, 4-5 semanas de gestación. Prop: 1 cada 10 linfocitos maternos.

Limitación: Atrapadas en pulmones, Discrepancia genética trofoblasto/embrión.

Linfocitos: Desde 7-8 semanas de gestación. Prop: 1/800-60.000

Limitación: Persisten hasta más de 5 años post término.

Eritroblastos: Los más fáciles de identificar (Hb fetal), V ½ 90 días en sangre materna. 50% del total de Eritroblastos en sangre.

Reproducción Humana, J.Remonhí, Instituto Valenciano de Infertilidad, Editorial McGraw-Hill 2º Edición, año 2002.

2. Generalidades DNA FetalVentajas DNA Fetal (‘90) vs Células Fetales:

Se encuentra en mayor proporción para un mismo volumen de sangre.

No se obtienen falsos positivos por persistencia de embarazos anteriores.

Se requieren menos pasos en su procesamiento.

Limitaciones:- Exceso de DNA libre derivado de la madre.- DNA libre fetal es mucho más fragmentado que el materno.

Técnica: PCR Cuantitativa en Tiempo Real.

(Método de elección)S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link fetal genetics to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.

2. Generalidades DNA FetalOrigen del DNA libre fetal:

Placenta (desaparición post alumbramiento, RNAm genes expresión placentaria, característica estructural de la placenta).*****

Destrucción de células hematopoyéticas fetales (extensa apoptosis en sangre materna).

Invasión Trofoblástica (14 días postconcepción).

Difusión directa del Líquido Amniótico.

S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link fetal genetics to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.

2. Generalidades DNA Fetal

El DNA posee una vida media muy corta, suceso que reafirma la hipótesis de la

existencia de una fuente contínua de su producción durante el embarazo.

DNA fetal corresponde al 3% del total de DNA libre en sangre materna en estadíos

tempranos, y al 6% en el término del embarazo

Fermín González et Cols, Diagnóstico prenatal genético no invasivo: reflexión bioética, Cuad. Bioét., 22, 2011.

2. Generalidades DNA FetalClearance de DNA fetal:

Bastantes grupos han investigado, la mayoría de los cuales resolvieron una rápida eliminación post término (*). Sería detectable hasta 48 hrs. post parto.

Los pocos trabajos que han mostrado persistencia, incluso años posterior al término, no obtuvieron falsos positivos relacionados a dicho DNA al estudiar grupo sanguíneo y sexo fetal (**).

(*) Benachi A et Cols. Fetal DNA in maternal serum: does it persist after pregnancy? Hum Genet 2003; 113: 76–79. / Johnson-Hopson CN et Cols. Evidence against the longterm persistence of fetal DNA in maternal plasma after pregnancy. Hum Genet 2002; 111: 575.(**) Costa JM et Cols. [First trimester fetal sex determination in maternal serum using real-time PCR.] [Article in French] Gynecol Obstet Fertil 2002; 30: 953–957. / Finning KM et Cols. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion 2002; 42: 1079–1085.

2. Generalidades DNA FetalRNAm Fetal en Sangre Materna (2000):

- Sorprendentemente permanece estable las muestras.

- Desde la 4º semana de gestación (RNAm del lactógeno placentario y de la sub beta HCG).

- Nuevamente, la placenta parece ser la principal fuente.

- Hay una correlación entre niveles de RNAm y la cantidad de proteínas en sangre materna.

- Resultados han tomado mayor fuerza gracias al desarrollo de la tecnología Microarray (1995).

2. Generalidades DNA Fetal

3. Investigaciones Recientes: Usos.

3.1. DNA Fetal en Orina materna.

S. Illane et Cols, Detection of cell-free fetal DNA in maternal urine, Prenatal Diagnosis; 26: 1216–1218, 2006.

“Cell-free fetal DNA either was not present or

did not amplify in maternal urine”

3.2. Determinación del Sexo fetal.

Young-Ho Yang et Cols, Noninvasive Prenatal Diagnosis using Cell-Free Fetal DNA in Maternal Plasma: Clinical Applications, Journal of Genetic Medicine, 8:1-16, 2011.


S. Illanes et Cols., Early detection of cell-free fetal DNA in maternal plasma, Early Human Development 83, 563–566, 2007.


- La determinación del sexo fetal es fiable a partir de 7 semanas de gestación, pero las señales masculinas puede ser detectado tan pronto como 2 semanas postconception.

- Enorme impacto en la práctica clínica para el manejo de los trastornos genéticos ligados a X, e incluso se ha utilizado para guiar la terapia fetal en casos prenatales en riesgo de deficiencia de 21-alfa hidroxilasa.

3.3. Determinación del Grupo Rh.


3.3. Determinación del Grupo Rh.- Amniocentesis implica un riesgo de 17% de

hemorragia feto-materna (sensibilización).

- Expectativas:

a) Realización de esta prueba a todas las mujeres Rh (-)

para administrar anti-D sólo a aquellas con un feto

positivo.

b) Pruebas para otros antígenos de grupos sanguíneos.

3.5. DNA fetal y Parto Pretérmino.

S. Illanes et Cols, Free fetal DNA levels in patients at risk of preterm labour, Prenatal Diagnosis: 31: 1082–1085, 2011.

3.6. DNA fetal Y Anomalías Cromosómicas.

Sinuhe Hahn et Cols, Determination of fetal chromosome aberrations from fetal DNA in maternal blood: has the challenge finally been met?, Expert reviews in molecular medicine, 13, 2011.

3.6. DNA fetal y Anomalías Cromosómicas.

Andrew B. Sparks et Cols, Noninvasive prenatal detection and selective analysis of cell-free DNA obtained from maternal blood: evaluation for trisomy 21 and trisomy 18, AJOG, 206, 319, 2012.

3.7. DNA fetal y Preeclampsia/RCIU

S. Illanes et Cols., Increased free fetal DNA levels in early pregnancy plasma of women who subsequently develop preeclampsia and intrauterine growth restriction, Prenatal Diagnosis; 29: 1118–1122, 2009.



Por cada unidad (1GE/mL) en la que ffDNA aumenta,la probabilidad de tener PE o RCIU con término antes de las 35 semanas aumenta en 1,67 veces (IC 1,13 a 2,47).

“Incremento en apoptosis de células trofoblásticas”.


Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal DNA leves, clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC Medical Genetics, 10:120, 2009.

3.8 Otras Patologías estudiadas.- Distrofia Muscular.- Fibrosis Quística.- Enfermedad de Huntington.- Talasemia.

DNA fetal constituye una potente herramienta de diagnóstico prenatal no invasivo, especialmente en grupos de riesgos de anomalías cromosómicas y desórdenes ligados a cromosomas sexuales.

No es posible obtener DNA fetal de la orina materna, siendo la mejor alternativa su aislamiento desde una muestra de sangre materna.

Las actuales técnicas de biología molecular permiten adecuados niveles de sensibilidad y especificidad para realizar diagnósticos con el DNA fetal en sangre materna.

DNA fetal está presente desde los 14 días postconcepción y hasta 48 hrs. post término.

4. Conclusiones

4. Conclusiones DNA permite establecer un diagnóstico mínimamente invasivo y

extremadamente precoz del sexo fetal, grupo Rh, anomalías cromosómicas y enfermedades hereditarias.

Examen a través de DNA fetal ya ha sido incorporado a ciertos protocolos de manejo clínico en algunos países desarrollados.

DNA fetal no ha demostrado ser de utilidad para anticipar un probable parto de pretérmino.

DNA fetal en sangre materna aumenta notablemente en gestaciones que posteriormente desarrollan preeclampsia y RCIU.

5. Bibliografía S.L. Collins et Col, Prenatal diagnosis: Types and techniques, Early human

development 88, 3-8, 2012.

S. Illanes et Cols, Cell-Free fetal DNA in maternal plasma: an important advance to link fetal genetics to obstetric ultrasound, Ultrasound Obstet Gynecol 25, 317-322, 2005.

Benachi A et Cols. Fetal DNA in maternal serum: does it persist after pregnancy? Hum Genet 2003; 113: 76–79. / Johnson-Hopson CN et Cols. Evidence against the longterm persistence of fetal DNA in maternal plasma after pregnancy. Hum Genet 2002; 111: 575.

Costa JM et Cols. [First trimester fetal sex determination in maternal serum using real-time PCR.] [Article in French] Gynecol Obstet Fertil 2002; 30: 953–957.

Finning KM et Cols. Prediction of fetal D status from maternal plasma: introduction of a new noninvasive fetal RHD genotyping service. Transfusion 2002; 42: 1079–1085.

Levente Lazar et Cols., Relationship of circulating cell-free DNA leves to cell-free fetal DNA leves, clinical characteristics and laboratory parameters in preeclampsia, BMC Medical Genetics, 10:120, 2009.

Sinuhe Hahn et Cols, Determination of fetal chromosome aberrations from fetal DNA in maternal blood: has the challenge finally been met?, Expert reviews in molecular medicine, 13, 2011.

5. Bibliografía S. Illanes et Cols, Detection of cell-free fetal DNA in maternal urine, Prenatal

Diagnosis; 26: 1216–1218, 2006.

Andrew B. Sparks et Cols, Noninvasive prenatal detection and selective analysis of cell-free DNA obtained from maternal blood: evaluation for trisomy 21 and trisomy 18, AJOG, 206, 319, 2012.


S. Illanes et Cols, Free fetal DNA levels in patients at risk of preterm labour, Prenatal Diagnosis: 31: 1082–1085, 2011.


Reproducción Humana, J.Remonhí, Instituto Valenciano de Infertilidad, Editorial McGraw-Hill 2º Edición, año 2002.

Manual Obstetricia y Ginecología, Pontificia Universidad Católica de Chile, año 2010.

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