Diagnóstico Laboratorial da Sífilis. Agente Etiológico: Causada pelo espiroqueta Treponema...
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Diagnóstico Diagnóstico Laboratorial da SífilisLaboratorial da Sífilis
Agente EtiológicoAgente Etiológico::
Causada pelo espiroqueta Causada pelo espiroqueta TreponemaTreponema pallidumpallidum subespécie subespécie pallidumpallidum, Bactéria , Bactéria não cultivável não cultivável in vitro.in vitro.
Imunidade humoralImunidade humoral após infecção pelo após infecção pelo T. T. pallidumpallidum – – produção de anticorpos como IgM, IgG, IgA e IgE.produção de anticorpos como IgM, IgG, IgA e IgE.
IgM IgM - presente na sífilis recente, fase de latência.- presente na sífilis recente, fase de latência.
IgG IgG - resposta secundária do hospedeiro ao processo - resposta secundária do hospedeiro ao processo infeccioso.infeccioso.
Pode ser observada em todas as fases da doença.Pode ser observada em todas as fases da doença.
Detectadas durante toda a vida do paciente.Detectadas durante toda a vida do paciente.
Aspectos imunológicos da infecção Aspectos imunológicos da infecção sifilíticasifilítica
Após aparecimento do cancro Após aparecimento do cancro – Pesq Anticorpo– Pesq Anticorpo
- 5 a 10 dias positiva-se o - 5 a 10 dias positiva-se o FTA-Abs;FTA-Abs;
- 10 a 20 dias positiva-se o - 10 a 20 dias positiva-se o ELISA e TPHA;ELISA e TPHA;
- ao redor de 20 dias o VDRL.- ao redor de 20 dias o VDRL.
Diagnóstico Imunológico da SífilisDiagnóstico Imunológico da Sífilis
Fase primária – pesquisa direta do agenteFase primária – pesquisa direta do agente
Diagnóstico da sífilisDiagnóstico da sífilis
Pesquisa direta do agente etiológicoPesquisa direta do agente etiológico
Material das lesões primárias e secundárias Material das lesões primárias e secundárias suspeitas suspeitas
Cutâneo mucosaCutâneo mucosa BiópsiaBiópsia NecrópsiaNecrópsia PlacentaPlacenta Cordão umbilicalCordão umbilical
Diagnóstico da sífilisDiagnóstico da sífilis
Pesquisa direta do agente Pesquisa direta do agente etiológicoetiológico
Microscopia óptica em campo Microscopia óptica em campo escuroescuro: exame do exsudato da lesão, : exame do exsudato da lesão, observando a fresco o espiroqueta.observando a fresco o espiroqueta.Sensibilidade -74 a 86 %Sensibilidade -74 a 86 %Especificidade-até 97%Especificidade-até 97%
Desvantagem: requer treinamento Desvantagem: requer treinamento adequado do técnico para analisar a adequado do técnico para analisar a motilidade e a morfologia do motilidade e a morfologia do T. T. pallidum.pallidum.
Diagnóstico da sífilisDiagnóstico da sífilis
Pesquisa direta do agente Pesquisa direta do agente etiológicoetiológico
Imunofluorescência diretaImunofluorescência direta:: Ac Ac anti-anti-T.pallidum T.pallidum produzidos em produzidos em coelhos e conjugados à FITC, coelhos e conjugados à FITC, adicionado ao esfregaço do adicionado ao esfregaço do exsudato da lesão, fixado em exsudato da lesão, fixado em lâmina.lâmina.
Sensibilidade-73-100%Sensibilidade-73-100%
Especificidade- 89-100%Especificidade- 89-100%
Diagnóstico da sífilisDiagnóstico da sífilis
Pesquisa direta do agente Pesquisa direta do agente etiológicoetiológico
Sensibilidade- irá variar de acordo com a coleta das espécimes, condição da lesão, tempo de evolução- carga bacteriana- se tratamento específico anterior.
Diagnóstico da sífilisDiagnóstico da sífilis
Pesquisa direta do agente Pesquisa direta do agente etiológicoetiológico
Estudo histológicoEstudo histológico
PCR_ testes para amplificação de PCR_ testes para amplificação de ácidos nucleicos com reação em ácidos nucleicos com reação em cadeia de polimerasecadeia de polimerase
Sensibilidade-91%Sensibilidade-91%
Diagnóstico da SífilisDiagnóstico da Sífilis
Detecção de anticorpos circulantes anti- Detecção de anticorpos circulantes anti- T. pallidumT. pallidumTestes sorológicosTestes sorológicos
Testes não treponêmicosTestes não treponêmicosNão são antígenos específicos.Não são antígenos específicos.Importantes para monitoramento do tratamento Importantes para monitoramento do tratamento e evolução da doença.e evolução da doença.Ex: VDRL e RPREx: VDRL e RPR
Testes treponêmicosTestes treponêmicos- Importantes para o diagnóstico da - Importantes para o diagnóstico da doençadoença- Aparecem mais precocemente e - Aparecem mais precocemente e persistem por vários anos- após persistem por vários anos- após tratamento.tratamento.Ex: FTA ABS; ELISA-QUIMIOL. e Ex: FTA ABS; ELISA-QUIMIOL. e TPHATPHA
Testes não TreponêmicosTestes não TreponêmicosVDRL VDRL ((VVeneral eneral DDisease isease RResearch esearch LLaboratory)aboratory) RPRRPR ( (Rapid apid PPlasma lasma RReagin)eagin) Detectam anticorpos da classe Detectam anticorpos da classe IgG e IgMIgG e IgM LimitaçõesLimitações
reações falso-positivas- reações reações falso-positivas- reações cruzadas: tuberculose, hepatite, cruzadas: tuberculose, hepatite, endocardite bacteriana, sarmpo, endocardite bacteriana, sarmpo, varicela, flilariose, Hansen,malária, varicela, flilariose, Hansen,malária, lupus.lupus. reações falso-negativas reações falso-negativas →→ efeito de efeito de prozona- quantidade em excesso de prozona- quantidade em excesso de anticorpo anticardiolipina- inibi a anticorpo anticardiolipina- inibi a floculação.floculação. Necessidade de efetuar diluição.Necessidade de efetuar diluição.
Técnica Manual e de Técnica Manual e de interpretação subjetivainterpretação subjetiva
Testes não TreponêmicosTestes não Treponêmicos
Reação de floculaçãoReação de floculação
– – Utiliza como Ag cardiolipina, colesterol e lecitinaUtiliza como Ag cardiolipina, colesterol e lecitina
Ag Ag →→ Ac: forma grumos; Ac: forma grumos;
Toda amostra reagente no teste qualitativo Toda amostra reagente no teste qualitativo deve ser testada quantitativamente para deve ser testada quantitativamente para determinar o título de Acs.determinar o título de Acs.
Testes TreponêmicosTestes Treponêmicos
Testes classicamente utilizados:Testes classicamente utilizados:
FTA-AbsFTA-Abs (teste de imunofluorescência indireta);(teste de imunofluorescência indireta);
TPHATPHA (teste de hemaglutinação para (teste de hemaglutinação para T. pallidumT. pallidum););
ELISAELISA (ensaioimuoenzimático) Quimioluminescência(ensaioimuoenzimático) Quimioluminescência
Maior especificidade e sensibilidade quando Maior especificidade e sensibilidade quando comparados aos testes não treponêmicos.comparados aos testes não treponêmicos.
Testes TreponêmicosTestes Treponêmicos
FTA-AbsFTA-Abs Baseia-se na técnica de Baseia-se na técnica de imunofluorescência indireta imunofluorescência indireta (IFI)humana (IFI)humana Os anticorpos anti treponema Os anticorpos anti treponema presentes no soro ligam-se ao antigeno presentes no soro ligam-se ao antigeno fixado na lâmina e são revelados por fixado na lâmina e são revelados por uma antigamaglobulina humana uma antigamaglobulina humana marcada com isotiocianato de marcada com isotiocianato de fluoresceinafluoresceina
Teste TreponêmicoTeste Treponêmico
ELISAELISA – Emprega diferentes tipos de antígenos e conjugados– Emprega diferentes tipos de antígenos e conjugados
QuimioluninescênciaQuimioluninescência ( Anti-Trep ) é um ELISA ( Anti-Trep ) é um ELISA
Possibilita a detecção de anticorpos Possibilita a detecção de anticorpos específicos das classes IgG e IgMespecíficos das classes IgG e IgM
- Método ELISA- Método ELISA- Reagentes prontos para uso- Reagentes prontos para uso- Fácil procedimento técnico- Fácil procedimento técnico- Fácil leitura de resultados- Fácil leitura de resultados
- Realização de diversas amostras em uma - Realização de diversas amostras em uma única rotina Leitura objetivaúnica rotina Leitura objetiva
VANTAGENSVANTAGENS →→
Testes TreponêmicosTestes Treponêmicos
TPHATPHA..
Baseia-se na aglutinação dos Acs treponêmicos Baseia-se na aglutinação dos Acs treponêmicos do soro com hemácias de aves, previamente do soro com hemácias de aves, previamente sensibilizadas com Ag de sensibilizadas com Ag de T.pallidum.T.pallidum.
Possibilidade de execução Possibilidade de execução de grande número de de grande número de
amostras e facilidade de amostras e facilidade de leitura visualleitura visual
VANTAGENVANTAGENSS
→→
FasesFases
TestesTestes
PrimáriPrimáriaa
SecundáSecundáriaria
LatentLatentee
TerciárTerciáriaia
VDRLVDRL 78% 78% (74-(74-87%)87%)
100%100% 95%95%(71-(71-
100%)100%)
71%71%(37-(37-94%)94%)
FTAFTA 84%84%(93-(93-
100%)100%)
100%100% 100%100% 96%96%
TPHATPHA 84%84%(84-(84-
100%)100%)
100%100% 100%100% 96%96%
Percentual de positividade nos testes em relação as fases da doença
Fonte: Curso Básico de Vigilância Epidemiológica. MS, PNDST/AIDS, 2006.
Critérios de Avaliação após TratamentoCritérios de Avaliação após Tratamento
Sífilis primária Sífilis primária
Sífilis secundária Sífilis secundária
Sífilis com mais de um Sífilis com mais de um ano de duraçãoano de duração
VDRL – não reagente VDRL – não reagente cerca de 12 a 18 cerca de 12 a 18 meses em 90% a 95% meses em 90% a 95% dos casosdos casos
VDRL – não VDRL – não reagente cerca reagente cerca de 6 a 12 mesesde 6 a 12 meses
O título pode cair O título pode cair ou permanecer ou permanecer estável, ou até estável, ou até negativarnegativar
Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de acordo com Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de acordo com o tratamentoo tratamento
Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de acordo com o tratamentoacordo com o tratamento
Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de Evolução dos Ac nos testes Sorológicos de acordo com o tratamentoacordo com o tratamento
Evolução dos anticorpos em RN e na sífilis Evolução dos anticorpos em RN e na sífilis congênitacongênita
Evolução dos anticorpos em RN e na sífilis Evolução dos anticorpos em RN e na sífilis congênitacongênita
Algoritmo de testes laboratoriais –sífilisAlgoritmo de testes laboratoriais –sífilisPortaria CCD –24/09/2010 Portaria CCD –24/09/2010
-Recomenda o uso do -Recomenda o uso do algoritmo convencional de algoritmo convencional de testes laboratoriais para o testes laboratoriais para o imunodiagnóstico da sífilis imunodiagnóstico da sífilis em laboratórios com baixa em laboratórios com baixa demanda de exames para demanda de exames para sífilissífilis -Recomenda a introdução de -Recomenda a introdução de
um algoritmo alternativo de um algoritmo alternativo de testes laboratoriais para o testes laboratoriais para o imunodiagnóstico da sífilis imunodiagnóstico da sífilis em laboratórios com elevada em laboratórios com elevada demanda de exames para demanda de exames para sífilissífilis--Revoga a Nota Técnica CCD - 04/2007 -Nº238, Seção I, Revoga a Nota Técnica CCD - 04/2007 -Nº238, Seção I,
p.50, publicada no D.O. em 19/12/2007p.50, publicada no D.O. em 19/12/2007
Portaria CCD -25- de 18/07/2011
ALGORITIMO CONVENCIONALALGORITIMO CONVENCIONAL
Nota 1: Nota 1: Em caso de Em caso de suspeita clínica e/ou suspeita clínica e/ou epidemiológica de epidemiológica de infecção pelo TP, infecção pelo TP, solicitar nova coleta solicitar nova coleta de amostra de amostra apósapós21 21 ((3030)dias.)dias.
Nota 2:Nota 2:Em caso de Em caso de suspeita clínica e/ou suspeita clínica e/ou epidemiológica de epidemiológica de infecção pelo TP, infecção pelo TP, solicitar nova coleta solicitar nova coleta de amostra de amostra em atéem até21 21 ((3030)dias.)dias.
-Teste treponêmico -Teste treponêmico (qual/is) (qual/is) indeterminado, se indeterminado, se possível realizar possível realizar FTA-AbsFTA-Abs
VDRLVDRL
TPHATPHA
ALGORITIMO ALTERNATIVOALGORITIMO ALTERNATIVO
Nota 1: Nota 1: Em caso de suspeita Em caso de suspeita clínica e/ou epidemiológica de clínica e/ou epidemiológica de infecção pelo TP, solicitar infecção pelo TP, solicitar nova coleta de amostra nova coleta de amostra apósapós21(21(3030) dias.) dias.
Nota 2:Nota 2:Em caso de suspeita Em caso de suspeita clínica e/ou epidemiológica de clínica e/ou epidemiológica de infecção pelo TP, solicitar infecção pelo TP, solicitar nova coleta de amostra nova coleta de amostra em em atéaté21(21(3030) dias.) dias.
Nota 3Nota 3: Pode se tratar de sífilis : Pode se tratar de sífilis latente ou recente, onde os latente ou recente, onde os anticorpos anti-cardiolipina anticorpos anti-cardiolipina estão indetectáveis. Investigar estão indetectáveis. Investigar história de tratamento história de tratamento anterior, pois também pode anterior, pois também pode indicar infecção anterior.indicar infecção anterior.
-Teste treponêmico -Teste treponêmico indeterminado, se possível indeterminado, se possível realizar FTA-Absrealizar FTA-Abs
Anti-trep Anti-trep (quimiol.)(quimiol.)
VDRLVDRL
TPHATPHA
Em caso de suspeita Em caso de suspeita clínica e/ou clínica e/ou
epidemiológica de epidemiológica de infecção pelo TP, infecção pelo TP,
solicitar nova coleta de solicitar nova coleta de amostra amostra apósapós 21 dias21 dias
Não Reag.
Reagente
Resultado NÃO
REAG.
Resultado REAGENT
E
Reagente
Resultado REAGENT
E
Pode se tratar de sífilis Pode se tratar de sífilis latente ou recente, latente ou recente, onde os anticorpos onde os anticorpos
anti-cardiolipina estão anti-cardiolipina estão indetectáveis. indetectáveis.
Investigar história de Investigar história de tratamento anterior, tratamento anterior, pois também pode pois também pode indicar infecção indicar infecção
anterioranterior
Em caso de suspeita Em caso de suspeita clínica e/ou clínica e/ou
epidemiológica de epidemiológica de infecção pelo TP, infecção pelo TP,
solicitar nova coleta de solicitar nova coleta de amostra amostra em até em até 21 21
diasdias
ALGORITIMO ALTERNATIVOALGORITIMO ALTERNATIVO1º Etapa
Anti-Trep
Não Reag.
Reagente
VDRL 2º Etapa
Não Reag.
3º Etapa
TPHA
Resultado NÃO REAGENTE
Indeterminado
FTA-abs
Interpretação da SorologiaInterpretação da Sorologia
ELISA/ TPHA/ELISA/ TPHA/
FTA-AbsFTA-Abs
VDRL/RPRVDRL/RPR InterpretaçãoInterpretação
-- -- Ausência de infecção ou Ausência de infecção ou período de incubaçãoperíodo de incubação
++ ++ Sífilis recente ou préviaSífilis recente ou prévia
++ -- Sífilis primária ou Sífilis primária ou latente. Previamente latente. Previamente tratada ou não tratadatratada ou não tratadaEm caso de suspeita clínica e/ou epidemiológica Em caso de suspeita clínica e/ou epidemiológica de infecção pelo TP, solicitar nova coleta de de infecção pelo TP, solicitar nova coleta de amostra em até21 diasamostra em até21 dias
-- ++ Falso positivo. Falso positivo. Em caso de Em caso de
suspeita clínica e/ou epidemiológica de infecção suspeita clínica e/ou epidemiológica de infecção pelo TP, solicitar nova coleta de amostra em pelo TP, solicitar nova coleta de amostra em
até21 diasaté21 dias
Interpretação Interpretação Diagnóstica é...Diagnóstica é...
Clínica + Epidemiologia + Resultado Clínica + Epidemiologia + Resultado sorológicosorológico
Resultados laboratoriais fornecem subsídios Resultados laboratoriais fornecem subsídios aos diagnósticos clínicos e epidemiológicosaos diagnósticos clínicos e epidemiológicos
Equipes:Equipes:
Agradecimentos...Agradecimentos...
Laboratório Municipal da Laboratório Municipal da Região Sudeste Região Sudeste
Instituto Adolfo LutzInstituto Adolfo LutzCRT EstadualCRT Estadual
Muito Muito obrigadaobrigada!!!!!!
MultiplicadoresMultiplicadores
Maria Aparecida Daher- Maria Aparecida Daher- SudesteSudeste
Glória Ribeiro- Norte- Glória Ribeiro- Norte- LesteLeste
Lourdes Kimico-SulLourdes Kimico-Sul
Maria Lúcia Morita-Centro Maria Lúcia Morita-Centro OesteOeste