Diagnostic de laboratoire des parasitoses sanguicoles et...
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Diagnostic de laboratoire des parasitoses
sanguicoles et tissulaires-1
Recherche de parasites sanguinoles et tissulaires :
plasmodium, leishmanies ,toxoplasme, trypanosomes et
microfilaires
Examen à l’état frais
Frottis mince et goutte épaisse: confection, fixation et
coloration Technique de leuco-concentration
4 EMME ANNEE PHARMACIE- PARASITOLOGIE
Plan
Introduction
Diagnostic de laboratoire de paludisme: frottis sanguin , goutte
épaisse, autres techniques ,(diagnostic différentiel avec les babesioses)
Diagnostic de laboratoire de leishmaniose viscérale:
Leucocytoconcentration++
Diagnostic de laboratoire Toxoplasmose
Diagnostic de laboratoire des trypanosomoses africaines et
trypanosomose américaine
Diagnostic de laboratoire des filarioses sanguinoles
Les parasitoses sanguicoles et tissulaires sont dues a des parasites
passant une partie ou la totalité de leur vie dans le sang et les tissus
de l’homme ou elles vont devoir être identifiées et quantifiées.
Introduction
Leur mise en évidence ou leur diagnostic de certitude est le premier
objectif vers lequel doit tendre toute technique biologique
diagnostique et pronostique.
Le diagnostic parasitologie doit permettre d’identifier
l’espèce parasitaire en cause, son stade de développement, et le nombre
de parasites (parasitemie) chiffre indispensable a l’évaluation
pronostique et au suivi thérapeutique.
les principaux parasites sanguinoles et tissulaires humains:
Protozoaires : plasmodium , babesies, les toxoplasmes, les
leishmanies ,les trypanosomes africains et sud américains,
Nématodes tropicaux : les microfilaires de certaines filaires.
Diagnostic du Paludisme
La première endémie parasitaire mondiale.
Chaque année 400 millions d’accès palustres et plus de deux
millions de morts
Le diagnostic du paludisme est une urgence
(délai de résultat inférieur à 2 heures).
biologique:
Anémie hemolytique
Thrombopénie,
Signes d'orientation
Clinique:
« Toute fièvre au retour d’une zone d’endémie est un paludisme jusqu’
à preuve du contraire »
Signes digestifs (embarras gastrique)
La prise d’une chimioprophylaxie antipalustre n’exclue pas le
diagnostic du paludisme.
Diagnostic biologique de certitude = Dg parasitologique direct
C’est l’observation de Plasmodium dans les globules rouges sur un
prélèvement de sang
On utilise la technique du frottis et de la goutte épaisse qui sont des
examens de référence.
Prélèvement
Le prélèvement doit être réalisé
Au moment des pics fébriles
Avant toute thérapeutique
Asepsie rigoureuse
Il se fait:
Soit par prélèvement capillaire au bout du doigt, lobe de l’oreille
ou talon (enfant) avec confection immédiate du frottis et de la
goutte épaisse(on jette la 1ere goutte car riche en lymphe)
Soit par ponction veineuse avec prélèvement dans un tube
contenant un anticoagulant ( EDTA)
Le frottis doit être fait immédiatement, sinon il faut conserver le
prélèvement à 4°c (maximum pendant une nuit car le parasite peut
évoluer et même donner des formes atypiques)
Déposer une goutte de sang à un centimètre environ du bord droit
d’une lame de verre bien dégraissée
Mettre en contact la goutte avec le petit bord d’une lame ou d’ une
lamelle (l’angle formé à droite étant de 45° environ) et laisser le
sang repartit régulièrement par capillarité le long du bord de la
lame(ou lamelle)
Etaler le sang en couche mono-érythrocytaire d’un geste rapide
et régulier en maintenant la lame selon un angle de 45°
1-Technique
Tenir les bords de l’extrémité gauche de la lame entre le pouce et
l’index de la main gauche.
Frottis sanguin mince (FS)
Sécher le frottis immédiatement en agitant la lame à l’aire par des
mouvements d’éventails vifs ou en la plaçant devant un ventilateur
(pas de séchage à la chaleur ou prés d’une source de chaleur)
NB: pour obtenir un frottis très mince , il faut
une lamelle mince
Un angle faible égale ou inferieure à 45°
Faire au minimum 3 frottis voir 5
Technique de confection
d’un frottis mince.
Frottis trop long
et trop épais.
La goutte de sang
a été trop grosse.
Frottis trop long et
trop épais. La goutte
de sang est trop
grosse, et la lamelle
trop large.
Frottis effiloché.
Mauvais contact
de la lamelle
sur la lame.
Bon frottis
Fixation au May Grunwald
Recouvrir complètement la lame par le MG
Laisser agir 1minute (sans laisser sécher la lame , pour cela il faut soit
ajouter du MG, soit mieux mettre la lame dans une boite de pétrie
fermée)
NB: la fixation se fait au méthanol pendant 3 à 5mn pour la coloration
GIEMSA
2- Coloration du frottis
La technique la plus utilisée est celle de May Grunwald qui
comporte plusieurs temps :
Coloration au May Grunwald (MG) :
- ajouter sur le MG autant de gouttes d’eau distillée que de MG
Bien mélanger en inclinant le portoir ou se trouve la lame dans
différents sens . Laisser agir 3 minutes
NB: le pH du colorant doit être voisin de 7 (ph acide :frottis pale, ph
alcalin: tout est bleu , ceux qui empêchent la mise en évidence des
parasites).
D) Lecture: au microscope optique G100,on commence par la queue
-Coloration au Giemsa
Rejeter le May Grunwald qui recouvre la lame sans laver
Recouvrir immédiatement la lame par la solution de Giemsa (1/10 à
1/20 )préparée extemporanément (Giemsa: 1 ml, eau tamponnée qsp :
10 ml) . Laisser agir 20 à 45minutes
Laver à l’eau du robinet sur jet continu(sans verser le colorant)
Laisser sécher à la température du laboratoire à l’abris des poussières
Réalisation simple
Économique(matériel rudimentaire)
Technique rapide (diagnostic d’urgence<1h) /GE
Diagnostic de certitude, dg d’espèce, dg de stade parasitaire
visualisation de l’aspect et taille de globule rouge
3) Avantages
Peu sensible (problème pour les parasitémies faibles)
Lecture prolongée (au moins 30 minutes)
4) Inconvénients
Résultats
Principales caractéristiques différentielles des différentes espèces plasmodiales sur un frottis
sanguin
NOM P.Falciparum P.malariae P.vivax P.Ovale
Diametre et
Trophozoites
bracelet
Anneau
Forme amoeboide
D=normalnormochrome
Filet à papillons
Tachesde
Maurer
anneau anneau
hémozoine
Écharpe équatoriale
D=réduit D=augmenté D=augmenté
Granulations de Schuffner
schizonte
n’existe pasdans le sang circulant sauf cas Exceptionnelles (24--32elements)
Prérosace
Rosace(marguerite:6-8elements)
Rosace(16-24elements)
gamétocytes
G.Femelle
NB:
10-12 élements
Trophozoites Schizontes Gamétocytes
polyparasitisme
Plasmodium falciparum
Frottis monotone, polyparasitisme .
Parasite surtout les GR jeunes sans changement de taille ni de forme
Anneau
Taches de
Maurer
bracelets
polyparasitisme
Filet à
papillon
Rosace 24 à 32
éléments(rarement retrouvé dans le sang
périphérique )
Plasmodium falciparum: trophozoïtesen anneau (Frottis monotone),Taches de Maurer
Plasmodium falciparum. Frottis. Une hématie parasitée par cinq trophozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100
Gamétocyte femelle de P. falciparum
Forme en banane ou en cigare
Trophozoites Schizontes Gamétocytes
2-Plasmodium vivax
Frottis panaché, granulations de Schuffner,
GR parasités: augmentation de taille, pas de modification de forme
anneau Granulations
de Schuffner
Forme
amoeboideRosace 16 à
24 éléments
Plasmodium vivax. Frottis. Trois hématies avec granulations de Schüffner parasitées, dont deux voisines, avec des trophozoïtes de forme amiboïde. Coloration M.G.G. Obj. 100.
Plasmodium vivax. Frottis. Corps amiboïde dans une hématie de très grandeTaille caractéristique de P. vivax.
Trophozoite jeune dans une grande hématie ,granulations de Schuffner
P.Vivax : forme amoeboide
Plasmodium vivax. Frottis. Gamétocyte mâle microgamétocyte.Cytoplasme violet-bleu, pigment granuleux dispersé. Coloration M.G.G. Obj. 100.
Plasmodium vivax. Frottis. Corps en rosace contenant 24 mérozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100
Corps en rosace éclatée liberant des mérozoites
Corps en rosace P ,vivax
Trophozoites Schizontes Gamétocytes
3-Plasmodium ovale
Frottis panaché, granulations de Scuffner
GR parasités: augmentation de taille et modification de
forme: ovalisés ou frangés
anneau Granulations de Schuffner Rosace 10 à 12
éléments
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale frangée à une extrémité,avec granulations de Schüffner et contenant un trophozoïte. Coloration M.G.G.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie de forme ovale, une autre triangulairefrangée aux 2 extrémités avec de nombreuses granulations de Schüffner et contenant chacuneun trophozoïte. Coloration M.G.G.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie d’assez grande taille avec granulationsde Schüffner contenant 2 trophozoïtes. Coloration M.G.G. Obj. 100
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale à extrémité pointue, une autre ovale avec de nombreuses granulations de Schüffner, contenant chacuneun trophozoïte. Coloration M.G.G. Obj. 100.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale pointue à une extrémité contenantun schizonte à 3 noyaux. Nombreux grains de pigment et granulations de Schüffner.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovale avec granulations de Schüffneret pigment contenant un schizonte à 2 noyaux. Coloration M.G.G. Obj. 100
Plasmodium ovale. Frottis. Hématie d’assez grande taille contenantun gamétocyte de coloration bleu pale-rosé. Coloration M.G.G. Obj.
Plasmodium ovale. Frottis. Hématie arrondie d’assez grande taille contenantun gamétocyte avec noyau excentré, cytoplasme bleu et des grains de pigment dispersés.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie ovalisée contenant un gamétocyteavec noyau excentré, cytoplasme bleu, gros grains de pigment. Une deuxième hématie contientun trophozoïte avec des granulations de Schüffner. Coloration M.G.G. Obj. 100.
Plasmodium ovale. Frottis. Une hématie de taille normale arrondie
contenant un très jeune gamétocyte et des granulatins de Schüffner. Une autre hématie
d’assez grande taille contenant un jeune gamétocyte, granulations de Schüffner et pigment
Hématie frangée,Rosace à 8 noyaux P ovale
Trophozoites Schizontes Gamétocytes
hémozoine
Plasmodium malariae
Frottis panaché
Parasite les GR agés, de taille normale ou diminuée
anneau Écharpe
équatorielRosace 6 à 8
éléments
P malariae hemogregariniforme
Plasmodium malariae. Frottis. Dans deux hématies de taillesurbnormale, trophozoïtes âgés en bande équatoriale avec pigment abondant.Coloration M.G.G.
Schizonte en bande équatoriale de P. malariae
Plasmodium malariae. Frottis. Hématie de taille subnormale. Schizonteà 3 noyaux, pigment abondant. Coloration M.G.G
Plasmodium malariae. Frottis. Hématie de taille normale.Schizonte mûr corps en rosace à 8 noyaux. Gros amas de pigment central.Coloration M.G.G. Obj.
Plasmodium malariae. Frottis. Deux gamétocytes occupant presque toute L’hématie de taille surbnormale. Coloration M.G.G. Obj. 100
• Parasite des primates qu’on considérait encore récemment comme
exceptionnel chez l’homme
• Fréquent en Malaisie, Thaïlande, Myanmar, Philippines et
Singapour
• Un parasite à cycle court, de 24 heures seulement, parfois
responsable de très fortes parasitémies et de pronostic sévère.
Plasmodium knowlesi
Plasmodium knowlesi
Principe: c’est une technique de concentration qui permet d'examiner
une grande quantité de sang dans une petite surface.
La goutte épaisse
Technique de la goutte épaisse
1-Dépôt du sang: déposer une grosse goutte de sang au milieu
de lame (2fois le volume utilisé pour un frottis).
2-Défibrination : pour empêcher la coagulation, avec le coin d'une
autre lame ou avec la pointe d’un vaccinostyle, étaler régulièrement le
sang sur une surface de 1 cm de diamètre, en tournant régulièrement
de façon homogène et en grattant un peu la surface du verre pour
favoriser l’adhérence pendant 2 minutes.
3-Sécher 24h à temperature ambiante ou 2h à 37°c .
Ne jamais fixer à la chaleur ou à l'alcool responsable d’une
fixation des hématies.
Coloration de la goutte épaisse
Déshémoglobinisaton (Lyse des GR et libération de l’Hb):recouvrir
abondamment la goutte épaisse avec de l’eau distillée
Laisser agir pendant 5 à 10 minutes jusqu'à décoloration complète, les
parasites, restent intacts sur la lame.
Coloration au Giemsa pendant 20 à 45 minutes
Laver à l'eau du robinet
Sécher à l'air.
Avantages:
très Sensible (détecte des parasitémies plus faibles)
Inconvénients:
Ne permet pas de faire le diagnostic des espèces plasmodiales
(sauf dans certains cas : elle peut montrer les gametocytes de
plasmodium falciparum, ou rosaces de P)
Lente
N’est pas recommandable si elle n’est pas associée au frottis
sanguin car la lecture est retardée de 12h et l’interprétation est
plus délicate
Goutte épaisse positive palsmodium sp
Goutte épaisse positive palsmodium falciparum
Goutte épaisse Plasmodium malariae
Réaliser d’abord le frottis puis
la goutte épaisse
Fixer d’abord le frottis au méthanol
Hémolyser la GE sans que l’eau ne
touche le frottis
Colorer la lame par le procédé
de coloration en série
Association goutte épaisse et frottis sanguin.
Autres techniques
Quantitative Buffy Coat (QBC): technique de concentration la plus
sensible- Équipement sophistiqué
Tests de diagnostic rapide (TDR) :Rapide - Seulement une aide au
diagnostic (La recherche d’antigènes spécifiques sur bandelettes)
PCR: uniquement pour laboratoires spécialisés - Coûteux
Sérologie: très utile pour certaines situations particulières(enquête
epidemiologique , suivi du traitement ,transfusion sanguine,..)
La méthode de référence pour le diagnostic du paludisme
demeure encore l'examen microscopique d'un frottis-goutte
épaisse coloré par le Giemsa.
Les TDR peuvent aider dans le dépistage
La PCR est très performante mais n’est pas accessibles à tous
Babésioses
Comme pour le paludisme, le diagnostic parasitologique est effectue
sur frottis de sang fixé et coloré au MGG.
Le polyparasitisme est fréquent et Babesia n’a pas de pigment parasitaire
Ils peuvent être confondus avec les formes des plasmodies en
particulier les trophozoites de Plasmodium falciparum.
Dg ≠Paludisme: absence d’hémozoїne dans le cytoplasme,
absence de schizontes et de gametocytes
.
On peut rechercher des anticorps specifiques par
immunofluorescence indirecte et amplifier par PCR des séquences
spécifiques d’ADN
Diagnostic de leishmaniose viscérale
Le diagnostic est évoqué a partir d’arguments :
- Epidemiologiques: les foyers sont localises dans le pourtour
de la Mediterranee, au Moyen-Orient, en Afrique de
l’Est, en Inde et sur le continent sud americain ;
- Cliniques associes a une triade classique : fievre folle,
hepatosplenomegalie et paleur avec une pancytopenie progressive.
Diagnostic biologique direct
C’est la recherche des leishmanies dans les cellules du systeme reticulo
histio macrophagique
Frottis de moelle osseuse colore au MGG:
Forme amastigote de Leishmania sp (formes ovoïdes de 2 a 6 μm de
diamètre, renfermant un noyau et un kinetoplaste)
Spécificité: 100%
Cependant,
Geste invasive, douloureuse
la lecture est longue et fastidieuse.
Formes amastigotes de leishmania sp sur un frottis de moelle chez un enfant
atteint de leishmaniose viscerale.
Les prélèvements sanguins ou de moelle peuvent être mis en culture
sur milieux specifiques (NNN (Novy-Mac Neal-Nicolle),milieu de
Schneider,…
Incubation 22-28°C
Examen de la culture: 1x/semaine
Souvent se positive la 1ère semaine
4 semaines avant de rendre un résultat négatif
Si culture positive: Promastigotes mobiles de Leishmania sp
forme allongée de 20 à 25 micron de taille, avec un noyau central, un
kinétoplaste et un flagelle libre.
Culture
Promastigotes de leishmania sp
Promastigotes de leishmania sp
En revanche, la technique de leucocytoconcentration donne des
résultats meilleurs que ceux de la culture et du medullogramme.
Inconvénients de la culture
Longue, fastidieuse, Contaminations bactériennes et fongiques
leucocytoconcentration (LCC)
Principe: technique qui permet de concentrer les parasites sanguins
sur la plus petite surface possible d’une lame et à éliminer les
globules rouges et les plaquettes.
A partir d’un prélèvement fait sur tube citraté (l’heparine
lèse les leishmanies)
1-Hémolyse :
- Dans un tube conique pour centrifugation, hémolyser 0,5 ml de sang
en le mélangeant avec 2,5 ml de la solution hémolysante
- Homogénéiser soigneusement le mélange par agitation au « vortex ».
-Laisser hémolyser et veiller à obtenir une hémolyse parfaite
L’hémolyse parfaite est obtenue en 10 à 20 mn lorsque le sang prend
un aspect « laqué ».
Méthode (technique)
2-Leucoconcentration :
-Concentrer les leucocytes et les parasites par une première
centrifugation de 10 minutes à 2500 tours par mn.
-Jeter le surnageant
La solution hémolysante (saponine)
Saponine :1ml
Formol:12,5ml
Glycerine:2,5ml
quantité suffisante Pour 500ml d’eau
Filtrer la solution obtenue 3fois et la conserver à température (-20°)
3-Etalement des frottis sur lame porte-objet :
-Reprendre le culot dans 100 µl d’eau salée à 0,9%.
-Homogénéiser soigneusement par agitation au « vortex ».
-Centrifuger une deuxième fois pendant 10 mn à 2000 tours par
mn.
-Jeter le surnageant.
-Confectionner des frottis à partir du culot de centrifugation sur
deux lames porte-objet.
4-Coloration :
Sécher les lames et réaliser une coloration, après fixation au
méthanol, par le Giemsa dilué au 1/10ème et soigneusement filtrés.
la coloration se fait pendant 30 à 45 mn et est immédiatement suivi
par un rinçage à l’eau de robinet.
5-Lecture :
Sécher les lames, et lire au microscope optique au G x100.
a
amastigotes de leishmania sp
Diagnostic indirect (séro immunologique) : recherche des
anticorps spécifiques dans le sérum du malade.
Plusieurs techniques peuvent être utilisées : ELISA, IFI,
western blot,…
Autres techniques
Biologie moléculaire: recherche d’ADN parasitaire par PCR
Diagnostic biologique de toxoplasmose
Chez le sujet immunocompétent
Du fait d’un passage de courte durée dans le sang, la recherche de
toxoplasme est souvent infructueuse et n’est pas réalisée, sauf dans
le cas de toxoplasmose congénitale ( suivi sérologique chez la
femme enceinte)
Chez le sujet immunodéprimé
La recherche directe du parasite dans le sang, LCR,, LBA, moelle
osseuse,. ponction ganglionnaire, biopsie cérébrale,…)
Frottis coloré:(lecture difficile): tachyzoites de T gondii (forme de
croissant asymétrique ou d'un arc, de 5 à 8 μm de long / 2 à 4 μm.
Biologie moléculaire: recherche de l’ADN toxoplasmique
Inoculation aux souris
Sérologie: souvent difficile à interpréter; IgM: en général absentes.
IgG: réponses diverses: titres faibles, élevés stables, ( des IgG)
Western Blot: production locale d'anticorps dans le LCR, HA
Trophozoites de toxoplasma gondii
Diagnostic prénatal : proposé en cas de séroconversion maternelle
Amniocentèse: réalisée à partir de 18 Semaines , au moins 4
semaines après la date présumée de l’infection maternelle
prélever 15 – 20 ml de liquide amniotique: inoculation à la souris,
PCR, Western blot
Toxoplasmose congénitale :
Sérologie de contrôle 10j après la naissance
Sérologie tous les mois puis tous les 2 mois durant la première année
Diagnostic néonatal: tout NN de mère contaminée en cours de grosse
Prélèvement de placenta : inoculation à la souris, PCR
Prélèvement de sang de la mère et de l’enfant : western blot ou ELIFA
Calcul de la charge immunitaire de la mère et de l’enfant
CI =
IgG spécifiques (en UI / ml) x 1000
IgG totales (en g / l)
Toxoplasmose oculaire
Sérologie: mise en évidence d’une synthèse locale des anticorps
spécifiques (IgG , IgM) dans l’Humeur Aqueuse (HA),.
Comparaison de la charge immunitaire de l’ Humeur aqueuse
avec celle du sérum = Coefficient Desmonts.
Comparaison du profil immunologique sérum / HA = analyse
comparée des spécificités des anticorps par Western Blot
PCR: recherche du parasite dans l’ HA
Les Trypanosomoses
Trypanosomoses africaines
Les trypanosomoseses humaines africaines sont provoquées
par deux sous-espèces Trypanosoma brucei gambiense
et Trypanosoma brucei rhodesiense.
Elles sont déterminées par la présence de trypanosomes dans le
systeme lymphatico-sanguin et nerveux, transmis par la
piqure d’une mouche du genre Glossina.
Diagnostic
Il est évoqué :
par le contexte epidemiologique : séjour en Afrique équatoriale
par les signes cliniques en particulier, une fièvre , des adénopathies
cervicales et sous claviculaires, une splenomegalie et en
cas de diagnostic tardif, tout signe neurologique (sensitifs,
psychiques, du sommeil ou moteurs), qui signe alors le
passage du parasite du systeme lymphatico-sanguin vers
le liquide cephalo rachidien.
Le diagnostic biologique
Est sanguin en première période lymphatico-sanguine et fonde sur
l’analyse du LCR en phase neurologique
Il doit par ailleurs permettre de préciser le stade de développement de
la maladie et l’eventuel passage des parasites du sang circulant vers le
LCR (phase meningo-encephalitique).
Plusieurs techniques d’examen ou d’enrichissement sont utilisees :
Examen direct entre lame et lamelle : les trypanosomes
ondulent entre les hématies
Frottis et goutte épaisse colores au MGG :
Trypomastigote ; forme allongée, 15 à 20 µm, noyau central,
kinétoplaste postérieur, membrane ondulante et flagelle libre à partir
de l'extrémité antérieure;
Forme mince, petit kinetoplaste
Centrifugation du sang en tubes capillaires
Les trypanosomes sont localises a la limite de séparation des globules
rouges et du plasma, visibles au microscope(X10 )
En cas de negativite, le recours aux ponctions ganglionnaires et aux
techniques serologiques sont necessaires (immunofluorescence
indirecte : IFI).
leuco concentration si l’hemolyse a été provoquée par l’eau
distillée ou saponine : les trypanosomes sont encore vivants.
En revanche, si l’hemolyse a ete provoquée par le formol: les
trypanosomes très fragiles sont tues, mais sont mieux conserves
les cultures et inoculation aux animaux sont peu pratiquées etdangereuses
Forme épimastigote : forme allongée, de 15 à 20 µm, noyau central,
kinétoplaste proche du noyau, flagelle libre à partir de l'extrémité
antérieure(culture)
Plus tardivement, apparaissent : anemie, hyperleucocytose,
monocytose, et surtout plasmocytose (cellule de Mott) et
protidémie forte quasi pathognomonique de la trypanosomose (les
IgM sont 4 fois supérieures a la normale).
les trypanosomes sont a rechercher dans le LCR ou l’apparition
d’IgM, signe d’atteinte neurologique.
Trypanosomose américaine
La trypanosomose américaine, ou maladie de Chagas, est provoquée
par Trypanosoma cruzi, parasite du sang et des tissus, transmis par les
déjections d’insectes hématophages de la famille des reduvides
Le diagnostic est évoqué
sur des arguments épidémiologiques( continent sud américain, Mexique
sud de l’Argentine) et des arguments cliniques aigus: (œdème
bipalpebral, unilateral (signe de Romana), fièvre irrégulière) et
chroniques (lésions musculaires, atteinte myocardique et digestive,
megaorganes).
La recherche du parasite se fait au niveau du sang, On utilise les mêmes
techniques que pour les trypanosomes africains.(examen direct ,frottis,
goutte épaisse, leuco-concentration,..)
a la phase aigue les examens sont positifs dans 90 % des cas, et
seulement 5 % a la phase chronique.
A la coloration au MGG: Trypanosoma cruzi (trypomastigote):15 a 25
μm kinetoplaste , beaucoup plus volumineux que celui de
Trypanosoma brucei.
Trypanosoma cruzi (trypomastigote):
Trypanosoma cruzi (trypomastigote)
la sérologie est indispensable (IFI, ELISA, hemagglutination passive)
En cas de négativité après répétition des examens
Le xénodiagnostic : c’est la recherche de trypanosomes dans les
dejections de réduves 20 jours après qu'elles aient piqué un malade.
exceptionnellement pratiqué
Filarioses sanguicoles
diagnostic des microfilaires sanguicoles
Les filaires sanguinoles :
Loa loa
Wuchereria bancrofti
Brugia malayi
séjour en zone d’endémie , hyper éosinophilie
signes cliniques sont très différents selon les espèces:
la loase: œdème allergique, migrateur, fugace( oedeme de
Calabar), localise préférentiellement aux membres supérieurs ou la
spectaculaire reptation de la filaire adulte sous la conjonctive de
l’œil.
Signes d’orientation
les filarioses lymphatiques:(Wuchereria bancrofti, Brugia malayi),
Lymphangite aigue et chroniques
Sclérose et éléphantiasis des membres.
Recherche et identification des microfilaires
Prélèvement de sang
Les microfilaires apparaissent dans le sang selon une périodicité qu’il
faut respecter pour optimiser le rendement diagnostique :
Loa loa : le jour, entre 10 h et 16 h
W. bancrofti: la nuit, entre 22 h et 4 h (sauf la variete pacifica, a
n’importe quel moment),
B. malayi : la nuit, entre 22 h et 4 h
Techniques de mise en évidence
Examen direct: goutte de 10 μL de sang frais, entre lame et
lamelle permettant de voir facilement la microfilaire entre les
globules rouges (Gx 10 )
Microfilaire de Loa loa.
Le frottis sanguin ou la GE colorés au MGG:
facilite le diagnostic d’espèce.
Les critères morphologiques d’identification sont en particulier:
la taille des microfilaires
la présence ou non d’une gaine plus ou moins coloree au Giemsa,
la forme de l’extrémité postérieure plus ou moins effilée,
l’extremite céphalique grande ou petite,
la présence plus ou moins terminale des noyaux somatiquex
Microfilaires Loa loa Wuchereria
bancrofti
Brugia malayi
Critères
Taille 300 um 300 um 250 um
Présence d’une
gaine plus ou
moins colorée
Gaine courte mal
colorée
Gaine courte bien
colorée
Gaine longue bien
colorée
L’espace
céphalique Court Court Long
l’extrémité
postérieure
(caudale)
Effilée contenant des
noyaux terminaux
Effilée contenant
des noyaux
subterminaux
2renflements
,1subterminal et
1terminal contenant
chacun un noyau
Microilaire de Loa loa : frottis sanguin
Frottis de sang: microfilaire de Loa loa
Microfilaire Wuchereria bancrofti Goutte épaisse.
Microfilaires Wuchereria bancrofti300 µm
Goutte épaisse: microfilaire de Wuchereria bancrofti
Microfilaires Brugia malayi. Frottis.
Microfilaire Brugia malayi = 250 um
La technique de leucoconcentration: est très utile en cas
de pauci parasitisme.
Elle conserve la mobilité des microfilaires
Elle permet une mensuration plus précise.
Microfilaire de Loa loa (LCC): 300 um
kit de detection des antigenes circulants specifiques de Wuchereria
bancrofti par immunochromatographie donne de bons résultats.
La sérologie: Les résultats obtenus doivent être interprètes avec
beaucoup de prudence du fait des réactions croisées nombreuses
existant entre les nématodes.