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Diagnosi Genetica Preimpianto

delle Patologie Mitocondriali

D. Zuccarello

Daniela.zuccarello@unipd.it

Roma, 28 maggio 2016

Università degli Studi - Azienda Ospedaliera Padova

UOC di GENETICA CLINICA ED EPIDEMIOLOGICA

La diagnosi genetica pre-impianto (PGD) è la forma

più precoce di diagnosi pre-natale

Consente di conoscere la costituzione genetica Consente di conoscere la costituzione genetica

degli embrioni PRIMA del loro trasferimento in degli embrioni PRIMA del loro trasferimento in

uteroutero

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Opzioni riproduttive per coppie a rischio genetico

- Roulette riproduttiva

- Diagnosi prenatale

e aborto terapeutico

- Eterologa

- Adozione

- No figli

- SOLUZIONE: PGD

Diagnosi Genetica Pre-impianto:

APPLICABILITA’APPLICABILITA’

La diagnosi pre-impianto puo’ essere applicata a coppie infertili portatrici di :

� Malattie monogeniche a trasmissione:

� autosomica recessiva (Fibrosi Cistica, Beta Talassemia, SMA, etc.)

� legata al cromosoma X (Sindrome X-Fragile, Distrofia Muscolare, etc..)

� autosomica dominante (CMT, Distrofia Miotonica, etc..)

� Traslocazioni cromosomiche bilanciate:

� Reciproche

� Robertsoniane

� Altre indicazioni:

� Età materna superiore a 38 anni

� Ripetuti falliti impianti / poliabortività

� Fattore maschile grave

PGS

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Diagnosi Genetica Pre-impianto:

APPLICABILITA’APPLICABILITA’

Indicazioni possibili ma controverse :

� Malattie mitocondriali (mtDNA)

� HLA matching

� Patologie a insorgenza tardiva

� Suscettibilità oncologica

MALATTIE MITOCONDRIALI MALATTIE MITOCONDRIALI

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ETEROPLASMIAETEROPLASMIA

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DEFECT OF DEFECT OF mtDNAmtDNA MAINTENANCEMAINTENANCE

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COPPIA INFERTILE CON MALATTIA GENETICA

CICLO DI PMA CON FECONDAZIONE E SVILUPPO IN VITRO FINO AL 5° GIORNO

PRELIEVO CELLULE TROFOBLASTO e CONGELAMENTO EMBRIONI

ANALISI GENETICA

COMUNICAZIONE DEI RISULTATI E TRASFERT DEGLI EMBRIONI

CONSULENZA GENETICA, GINECOLOGICA E ANDROLOGICAP

GD

Ginecologia Embriologia

Genetica

Multidisciplinareità della PGD

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Tecniche di PGDTecniche di PGD

•• 1^ Polar Body1^ Polar Body

•• Cleavage Stage Embryos (day 3)Cleavage Stage Embryos (day 3)

•• Blastocyst (day 5)Blastocyst (day 5)

PCGDPCGD

PGDPGD

PGDPGD GOLD STANDARD

Day3Day5

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Day 5

Analisi del solo trofoblasto!!

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The mutation load determined in blastomeres accurately reflects the mutation load in the embryo

and the mutation levels in a blastomere reliably predict the mutant load of the future child

9 pz at day-3

- Malattie a insorgenza tardiva: bambino “sano” alla nascita

- Biopsia a day-3: diminuzione potenziale impianto

- Livello “safe” di eteroplasia: 5% ?

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Nuclear genome transfer

To avoid any possible confusion with the process of cloning, it is important to stress

that all products of meiosis (pronuclei and polar bodies) are genetically unique.

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Nuclear genome transfer

Nuclear genome transfer

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28 Centri Italiani PGD

NomeCentro Città Regione Tipo di centro

HERA - U.M.R. CT Sicilia Convenzionato

Futura Diagnostica Medica FI Toscana Convenzionato

CENTRO DEMETRA FI Toscana Convenzionato

Centro Florence FI Toscana Convenzionato

HUMANITAS MI Lombardia Convenzionato

Ospedale San Raffaele MI Lombardia Convenzionato

Casa di Cura Città di Udine UD Friuli VG Convenzionato

Centro Andros PA Sicilia Privato

9.baby FAMILY AND FERTILITY CENTER BO Emilia Romagna Privato

Alma Res RM Lazio Privato

ALTAMEDICA (ex artemisia) RM Lazio Privato

ARC STER di mestre VE Veneto Privato

C. M. R. TO Piemonte Privato

Centro di Biologia della Riproduzione PA Sicilia Privato

Centro HERA NA Campania Privato

EUBIOS BZ Trentino Privato

European Hospital RM Lazio Privato

GATJC FERTILITY CENTER - Gioia Tauro RC Calabria Privato

GENERA Marostica VI Veneto Privato

GENERA Napoli NA Campania Privato

GENERA Roma RM Lazio Privato

GENERA Umbertide PG Umbria Privato

LIVET TO Piemonte Privato

MOMO' fertiLIFE BT Puglia Privato

Poliambulatorio Privato GYNEPRO BO Emilia Romagna Privato

SISMER BO Emilia Romagna Privato

Fondazione Ca' Granda Ospedale Maggiore Policlinico MI Lombardia Pubblico

Microcitemico di Cagliari CA Sardegna Pubblico

Centro Pubblico (2)

Centro Privato (19)

Centro Convenzionato (7)

28 Centri Italiani PGD

Status Centri

Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"

Fonte: anno 2015

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PGD-A >150 cicli/Y (3)

PGD-A <150 cicli/Y (15)

PGD >30 cicli/Y (6)

PGD <30 cicli/Y (13)

Centro in attivazione (4)

Dati non forniti (4)

Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015

28 Centri Italiani PGD

Numero cicli

Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"

Fonte: dati forniti dai Centri relativi a PGS/PGD anno 2015

28 Centri Italiani PGD/PGS

Numero cicli

Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"

Cicli PGD (20 Centri)

Totale cicli PMA 2015: 18195

Totale cicli PGD 2015: 295

Percentuale: 1.62% (con picco massimo del 3, 3%)

Cicli PGD-A (18 Centri)

Totale cicli PMA 2015: 16895

Totale cicli PGS 2015: 2053 (età media 38,5 anni)

Percentuale media: 12.5% (con picco massimo del 61%)

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In sede (9)

Service (12)

Non dichiarato (4)

Laboratorio in sede o service

[3 in sede PGS/in service PGD]

Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"

Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015

CGH-array (PGS)

[8 di cui 4 in sede]

qPCR (PGD/PGS)

[9 di cui 2 in sede]

NGS (PGD/PGS)

[8 di cui 3 in sede]

Tecnologie utilizzate

*Più di una tecnica utilizzata per centro

Convegno "Pre-implantation Genetic Diagnosis (PGD) e Non Invasive Prenatal Testing (NIPT): Nuove frontiere in diagnosi prenatale"

SNP-array (trasl)

[9 di cui 1 in sede]

Karyomapping (PGD/PGS)

[1 – altro in attivazione]

Sanger-STR (PGD)

[2 di cui 1 in sede]

Non dichiarato

Fonte: dati forniti dai Centri (24/28) relativi a PGS/PGD anno 2015

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Tavolo di Lavoro congiunto

per la stesura delle Linee Guida Italiane

per la Diagnosi Genetica Preimpianto

�Società scientifche:

�SIGU

�SIFES

�CECOS

�SIERR

�SIOS

�SIAMS

�SIDR

�Avv. G. Baldini (sentenze Legge 40/2004)

�Responsabile Registro Nazionale PMA (e PGD) dell'ISS

Legge 40/2004 e successive modifiche

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Fecondazione

SI - coppie eterosessuali sposate o conviventi in età fertile, infertili

NO - omosessuali, sigle, coniuge post mortem,

coppie oltre i limiti di fertilità, fertili

NO - fecondazione eterologa

TUTELA DEI DIRITTI DELL’EMBRIONE

� Solo 3 ovociti fecondabili

� Obbligo di impianto (revoca fino alla fecondazione)

� Impossibilità di esecuzione diagnosi pre-impianto

� Divieto di crioconservazione embrioni (no dei gameti)

� Divieto di ricerca scientifica (sperimentale) sugli embrioni

Legge 40/2004

Sentenze di riferimento sulla Legge 40/2004

- Tribunale di Cagliari Ordinanza del 09/11/2012

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Sentenze su legge 40/2004

Tribunale di Milano, Tribunale di Firenze, Tar del Lazio:

Possibile effettuare la diagnosi pre-impianto in caso di malattie genetiche (Talassemia)

Sentenza della Corte Costituzionale del 01/04/2009:

- Illegittimo comma 2 art. 14

- Incostituzionale comma 3 art.14

- Possibile inseminare più ovociti e produrre un numero di embrioni superiori a 3

- Possibile trasferire più di 3 embrioni, anche in impianti successivi, e dunque congelare gli embrioni

- Possibile effettuare la diagnosi pre-impianto sull’embrione e congelare gli embrioni patologici da non trasferire

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Mai perdere di vista l’obiettivo…

Grazie!