Determinación de coliformes
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Determinación de coliformes:Método del NMP.
Determinación de coliformes:Método del NMP.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994.
NORMA OFICIAL MEXICANA NOM-112-SSA1-1994.
M.C. Luis Ramiro Caso Vargas.M.C. Luis Ramiro Caso Vargas.
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ColiformesColiformes
• Estan constituidos por un grupo heterogéneo de bacterias (varios géneros y especies)
• Algunas especies constituyen un problema de salud bastante grave.
• Son organismos “indicadores de contaminación fecal” en el agua.
• Estan constituidos por un grupo heterogéneo de bacterias (varios géneros y especies)
• Algunas especies constituyen un problema de salud bastante grave.
• Son organismos “indicadores de contaminación fecal” en el agua.
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¿Por qué usar coliformes?¿Por qué usar coliformes?
• Buscar por microorganismo específicos lleva mucho tiempo y recursos.
• Los coliformes regularmente se encuentran asociados con fuentes de patógenos que contaminan el agua.
• El análisis de coliformes en agua potable es relativamente sencillo, económico y eficiente.
• Buscar por microorganismo específicos lleva mucho tiempo y recursos.
• Los coliformes regularmente se encuentran asociados con fuentes de patógenos que contaminan el agua.
• El análisis de coliformes en agua potable es relativamente sencillo, económico y eficiente.
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¡La definición es importante!¡La definición es importante!• Bacilos Gram negativos.
• No esporulados.
• Aerobios o anaerobios facultativos.
• fermentan la lactosa a 35 °C con la producción de ácido y gas.
• ¡¡ Todo esto Bajo las condiciones de la norma !!
• Bacilos Gram negativos.
• No esporulados.
• Aerobios o anaerobios facultativos.
• fermentan la lactosa a 35 °C con la producción de ácido y gas.
• ¡¡ Todo esto Bajo las condiciones de la norma !!
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Prueba de coliformes totalesPrueba de coliformes totales
1. Prueba presuntiva• Caldo Lauril Triptosa (CLT).• Caldo Mc. Conkey.• Caldo lactosa.• Medio EC.
2. Prueba confirmativa:• Medio EC.• Medio bilis lactosa (BLVB)
1. Prueba presuntiva• Caldo Lauril Triptosa (CLT).• Caldo Mc. Conkey.• Caldo lactosa.• Medio EC.
2. Prueba confirmativa:• Medio EC.• Medio bilis lactosa (BLVB)
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Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)Día 1 (Prueba presuntiva)
1. Preparación del material.
2. Realizar diluciones seridas de la muestra de agua hasta 10-3 en agua peptonada.
3. Realiazar 5 pases de 1 ml. de cada una de las diluciones (10-1, 10-2, 10-3) a tubos con 9 ml. de caldo Lauril sulfato y campanas Durham.
4. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.
1. Preparación del material.
2. Realizar diluciones seridas de la muestra de agua hasta 10-3 en agua peptonada.
3. Realiazar 5 pases de 1 ml. de cada una de las diluciones (10-1, 10-2, 10-3) a tubos con 9 ml. de caldo Lauril sulfato y campanas Durham.
4. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.
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Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)Día 2 (prueba confirmativa)
1. Realizar pases con alíquotas de 1ml. de cada los 5 tubos por dilución a tubos con medio EC y campanas Durham.
2. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.
1. Realizar pases con alíquotas de 1ml. de cada los 5 tubos por dilución a tubos con medio EC y campanas Durham.
2. Dejar incubando de 24 a 48 hrs. a 35°C.
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Procedimiento:Procedimiento:
Paso 1
Paso 1
Paso 2Paso 2
Realizar dilucionesRealizar dilucioneshasta 10hasta 10-3-3
10-1
10-2
10-3
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
1 2 3 4 5
10-1
10-2
10-3
Sembrar de cada dilución por quintuplicado.
Sembrar de cada dilución por quintuplicado.
1 ml1 ml
1 ml1 ml
1 ml1 ml
1 ml1 ml
1 ml1 ml
1 ml1 mlMuestraMuestra
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Transferir hacia tubos con caldo EC.
Transferir hacia tubos con caldo EC.
Ca
ldo
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Ca
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C.
1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1 1010-1-1
11
11 22 33 44
11 22 33 44
55
55
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Tubo DurhamTubo Durham
Producción de Producción de GasGas
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Análisis de resultadosMNP
Análisis de resultadosMNP
Tubos
Dilución
10-1 10-2 10-3
1 X X
2 X
3 X
4 X X X
5 X X
33 22 11
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¿Qué tanto es tantito? NOM-127-SSA1-1994 -SSA1-1994 ¿Qué tanto es tantito?
NOM-127-SSA1-1994 -SSA1-1994