desinfectantes y antisepticos

qwertyuiopasdfghjklzxcvbnmq

wertyuiopasdfghjklzxcvbnmqw

ertyuiopasdfghjklzxcvbnmqwe

rtyuiopasdfghjklzxcvbnmqwert

yuiopasdfghjklzxcvbnmqwerty

uiopasdfghjklzxcvbnmqwertyui

opasdfghjklzxcvbnmqwertyuio

pasdfghjklzxcvbnmqwertyuiop

asdfghjklzxcvbnmqwertyuiopa

sdfghjklzxcvbnmqwertyuiopas

dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasg

dfghjklzxcvbnmqwertyuiopasd

fghjklzxcvbnmqwertyuiopasdfg

hjklzxcvbnmqwertyuiopasdfghj

klzxcvbnmqwertyuiopasdlfghjk

lzxcvbnmqwertyuiopasdfghjklz

xcvbnmqwertyuiopasdfghjklzx

CURSO: Laboratorio de Microbiología

DOCENTE: Mblgo. Carlos Azañero Díaz

GRUPO: ¨D¨

ALUMNA: Aburto Rodríguez Ruddy

UNIVERSIDAD NACIONAL DEL SANTA FACULTAD DE INGENIERÍA

E.A.P. INGENIERÍA AGROINDUSTRIAL

Control microbiano:

acción de los agentes

físicos y químicos

Microbiología General

1 Control Microbiano: Acción de los Agentes Físicos y Químicos

I. INTRODUCCIÓN

A pesar de que todavía no existe un documento legal que exija el control

microbiológico de superficies, cada vez más se toma en cuenta que se tiene que

verificar un plan de limpieza y desinfección. Así, los programas de limpieza y

desinfección se diseñan con el objetivo de reducir, y en algunos casos, eliminar la

carga bacteriana y restos de materia orgánica e inorgánica de las superficies. De

esta forma, se pretende minimizar el riesgo de contaminación cruzada para

garantizar un producto seguro y de calidad.

Actualmente, un factor a considerar en el diseño del plan de higienización es la

eliminación de unas estructuras denominadas biofilms, las cuales, no se habían

tenido en consideración hasta que no se han desarrollado sistemas que permiten

realizar su detección.

Tanto es así que en los últimos años ha ido creciendo el interés en la investigación,

desarrollo y/o mejora de técnicas rápidas, fiables y sencillas para evaluar la

contaminación de superficies. Sin embargo, el conocimiento acerca de su validez

en el uso industrial práctico es todavía escaso. Hay técnicas tradicionales y rápidas

para evaluar la contaminación microbiológica en superficies y la formación de

biofilms en condiciones experimentales, especialmente organismos alterantes y

patógenos como L. monocytogenesy posteriormente y con la experiencia adquirida

por los años, se ha llevado estudios de monitorización y estableciente de límites

críticos en las diferentes industrias.

Además, el trabajo de décadas de microbiólogos hace que destaque la importancia

de aislar los microorganismos del ambiente industrial y las posibilidades y

perspectivas de futuro para utilizar las técnicas descritas en el ambiente industrial

como herramientas de verificación de la limpieza y control de superficies.



II. OBJETIVO

Demostrar e interpretar el efecto de la temperatura, pH y concentración de

glucosa y NaCl sobre el crecimiento microbiano.

Demostrar y comparar el efecto germicida de algunos antisépticos y

desinfectantes de uso corriente.

III. MATERIALES

Material biológico

Cultivos puros bacterianos:Saccharomyces serevisiae, Bacillus subtilis,

Escherichia coli, Staphylococcus aureus.

Material de Laboratorio

Cultivo puro de Escherichia coli, Proteus vulgaris, Salmonella y Klebsiella

Tubos de ensayo con agar TSI, medio SIM

Tubos de ensayo con Agar citrato de Simmons

Tubos de ensayo con caldo común

Tubos de ensayo con caldo RMVP

Prueba de citocromo oxidasa 1

Reactivo de Kovacs

Rojo de metilo (pH 4)



IV. procedimiento:

1. Efecto de la temperatura y tiempo de exposición sobre el crecimiento de

microorganismos.

En dos tubos con caldo común, sembramos por suspensión cultivos

puros de Escherichia coli y Bacillus subtilis.

Sometimos los tubos anteriores previamente rotulados a 60 °C y 100 °C

por 10 minutos.

Incubamos a 37 °C por 12horas.

Transcurrido el tiempo de incubación, observamos si hubo o no

crecimiento en cada uno de los tubos.

2. Efecto del pH, concentración de NaCl y concentración de glucosa sobre el

crecimiento de microorganismos.

Sembramos por suspensión cultivos purosde Escherichia

coli,Staphylococcus aureusy Saccharomyces serevisiaeen tubos de

ensayos con caldo común a pH 7 y a pH 9, en tubos de ensayo con

caldo común con NaCl a 1%, 6.5% y 15% y en tubos con caldo común

de glucosa al 10%, 20% y 30%.



Incubamos todos los tubos a 37 °C por 12 horas.

Transcurrido el tiempo de incubación observamos si hubo o no

crecimiento en cada uno de los tubos.

3. Acción de agentes químicos y orgánicos (Desinfectantes y/o Antisépticos) :

Preparar una suspensión turbia del cultivo puro bacteriano Escherichia

coli(Gram -) en un frasco de penicilina con SSF estéril.

Coger una a dos asadas del cultivo puro y disolver en la SSF, hasta

obtener una ligera turbidez.

Empapa un hisopo de la suspensión bacteriana antes realizada. Antes

de sacar del hisopo escurrir lo sobrante presionando el hisopo dentro

de las paredes del frasco.

Sembrar por estría en superficie toda la placa Petri con agar común.

Con ayuda de una pinza previamente esterilizada por flameado coger

un disco de papel filtro y embeber con alcohol a 70% y colocarlo dentro

de la placa Petri con agar común previamente sembrada. Repetir lo

anterior con formol, hipoclorito, detergente y yodo. Colocar los discos

embebidos con cada una de las sustancias químicas en forma

equidistante.



Repetir todo lo anterior con cultivo puro deStaphylococcus aureus

(Gram +).

Rotular e Incubar las placas a 37 °C por 12 horas.

V. RESULTADOS:

1. Agar Efecto de la temperatura y tiempo de exposición sobre el crecimiento de microorganismos. Muestraa 60°C:

Muestra a 100°C:

Muestras de Bacillus subtilis (1) y E. coli (2):

1: (+++) Se observa mayor turbidez, prueba

positiva

2: (++) Turbidez, prueba positiva.

1 2

Muestras de Bacillus subtilis (1) y E. coli (2):

La turbidez es indicar de crecimiento bacteriano.

1: Prueba negativa.

2: Prueba negativa.

1 2



Concentración de glucosa:

Turbidez indicador de crecimiento.

10%: (-) turbidez, reacción negativa.



2. Efecto del pH, concentración de NaCl y concentración de glucosa sobre el crecimiento de microorganismos.

Concentración de Glucosa en cultivo puro de Saccharomyces serevisiae:

Concentración de Glucosa en cultivo puro de Escherichia coli:

Concentración de Glucosa en cultivo puro deStaphylococcus aureus:

Concentración de NaCl en cultivo puro de Escherichia coli:



1%: (++) turbidez, reacción positiva.


1%

15%






10%

20%

30%

10%

20%

30%



10%: (+++) turbidez, reacción positiva.

20%: (+) turbidez, reacción positiva.

30%:(+) turbidez, reacción positiva.

30%

20%

10%






6,5%: (-) turbidez, reacción negativa.


Muestras de Desinfectantes y/o Antisépticos:

Detergente (D): (-)no inhibe el crecimiento.

Yodo (I): (+) inhibe el crecimiento microbiano.

Alcohol (A):(-)no inhibe el crecimiento microbiano.

Formol (F): (++++) inhibe el crecimiento microbiano.

Legía: (++)inhibe el crecimiento microbiano.

Concentración de NaCl en cultivo puro de Staphylococcus aureus:

Concentración de NaCl en cultivo puro de Saccharomyces serevisiae:

3. Acción de agentes químicos y orgánicos (Desinfectantes y/o Antisépticos):

Muestra de cultivo puro deEscherichia coli:

Muestra de cultivo puro deStaphylococcus aureus:




6,5%: (+) turbidez, reacción positiva.


1%

6,5%

15%

6,5%

1%

15%

Muestras de Desinfectantes y/o Antisépticos:

Detergente (D): (-)no inhibe el crecimiento.

Yodo (Y): (-) inhibe el crecimiento microbiano.

Alcohol (A):(-)no inhibe el crecimiento microbiano.

Formol (F): (+++) inhibe el crecimiento microbiano.

Legía: (+)inhibe el crecimiento microbiano.



VI. DISCUSIÓN:

En Agar Efecto de la Temperatura y Tiempo de exposición sobre el crecimiento de

microorganismos. La temperatura es un factor ambiental importante en el

control de crecimiento microbiano. Las temperaturas cardinales o fundamentales

definen las temperaturas mínima, óptima y máxima a las que crece cada

microorganismo. Los microorganismos pueden agruparse según los márgenes de

temperatura requerida. Los organismos cuyas temperaturas óptimas de

crecimiento se sitúan entre los 45 a 80ºC se llaman termófilas. Estos organismos

que habitan en ambientes calientes, como fuentes termales en ebullición. Los

termófilos producen macromoléculas termoestables.Brook, Bioquímica de los

Microorganismos Pág. 157

Los mesófilos se encuentran en animales de sangre caliente y en medios

acuáticos y terrestres de latitudes templadas y tropicales. El E. coli, es un típico

mesófilo, se han definido con precisión las temperaturas cardinales o

fundamentales. La temperatura óptima de E. coli en un medio complejo es 39ºC,

la máxima es 48ºC y la mínima es 8ºC estos valores son susceptibles de pequeñas

variaciones debidas a diferentes cepas y, en general, las temperaturas máxima y

mínima suelen ser respectivamente mayores y menores cuando se usan medios

complejos en vez de medios definidos.Brook, Bioquímica de los




La Concentración de Glucosa,tiene que ver con la actividad de agua que llega a ser

limitada por un organismo cuando aumenta la concentración de soluto disuelta en

el medio. El agua difunde desde una región con una alta concentración de agua

(baja concentración de solutos) hasta una región con menor concentración de

agua (mayor concentración de solutos) por el proceso denominado ósmosis. En la

mayoría de los casos, el citoplasma de una célula tiene una concentración de

solutos mayor que el medio, por lo que el agua tiende a entrar dentro de la célula,

diciéndose entonces que existe un balance de agua positivo. Sin embargo, cuando

una célula está en un medio con baja actividad de agua, existe una tendencia del

agua a salir de la célula. Entonces podemos decir que los organismos capaces de

crecer en ambientes con alta concentración de azucares (como es el caso de la

glucosa) se denominan osmófilos, son organismos que pueden crecer en

ambientes muy secos (por falta de agua).Brook, Bioquímica de los


La Concentración de NaCl, en la naturaleza, los efectos de osmóticos tiene interés

principalmente en hábitat con altas concentraciones de sales. Los microorganismos

marinos tienen una dependencia específica del ion sodio además de tener un

crecimientoóptimo el valor de actividad de agua propio del agua del mar. Tales

microorganismos se les llama halófilos (requieren algo de NaCl), hay los halófilos

discretos (1-6% de NaCl) y los halófilos moderados (6-15% de NaCl). Los

organismos halotolerantes pueden soportar alguna reducción de aw del medio,

pero generalmente crecen mejor en ausencia de solutos añadidos. Por el contrario,

los organismos se desarrollan con muy baja actividad de agua, y estos son de gran

interés desde el punto de vista aplicado en la industria alimentaria, donde solutos

como la sal y la sacarosa se empleanen frecuentemente como conservadores para

inhibir el crecimiento microbiano. Los organismoscapaces de crecer en ambientes

muy salinos se les llama halófilos extremos y, según las especies, requieren 15-30%

de NaCl para su crecimiento óptimo.Brook, Bioquímica de los Microorganismos

Pág. 160



Acción de agentes Desinfectantes y/o Antisépticos;a menudo se emplean

compuestos químicos para controlar el crecimiento microbiano. Los

antisépticosson aquellos agentes químicos que matan inhiben el crecimiento

microbiano y pueden aplicarse en tejidos vivos dada su escasa toxicidad para los

tejidos. La mayoría de los compuestos que se encuentran en esta categoría se

utilizan para el lavado de manos, para tratar heridas superficiales y en algunos

casos antisépticos también son desinfectantes eficaces. Los desinfectantes son

productos químicos que matan microorganismos y se usan en objetos inanimados.

Los agentes esterilizantes son desinfectantes que, en condiciones apropiadas,

matan todos los tipos de vida microbiana, y se usan para esterilizar objetos

inanimados y superficies. Los desinfectantes químicos, frecuentemente llamados

microbicidas, tienen una gran aplicación en los casos enlos que no se puede usar el

calor o la radiación en la esterilización. La eficiencia de un agente químico

antimicrobiano se cuantifica determinando la concentración mínima necesaria

para inhibir completamente el crecimiento bacteriano.



VII. CONCLUSIÓN:

En Agar Efecto de la Temperatura y Tiempo de exposición sobre el crecimiento

de microorganismos, Bacillus subtilis (1) y E. coli (2)se evidenció que a

temperaturas menores de 60°C podemos esperar que haya crecimiento

microbiano, pero a mayores o iguales que 100°C el crecimiento no se da, ya

que son bacterias:(1) termófila y (2)mesófila.

La Concentración de Glucosa,esta prueba se realiza para definir su capacidad

de osmotoleranciapuesto que crecimiento microbianose evidencia cuando hay

presencia de turbidez en la muestra; en el caso del cultivo puro de

Saccharomyces serevisiae la menor concentración de glucosa (10%) facilita el

crecimiento microbiano, en cambio los cultivos puros de Escherichia coliy

Staphylococcus aureusno tienen capacidad de osmotolerancia con la glucosa.

La Concentración de NaCl,el crecimiento de los halófilos requiere al menos

algo de NaCl, pero el óptimo varía con el microorganismo; en el caso de las

bacterias estudiadas (Saccharomyces serevisiae, Escherichia coliy

Staphylococcus aureus)hay mayor crecimiento cuando la concentración de

NaCl es menor (1%) por lo cual se puede decir que son halófilas discretas.

Acción de agentes Desinfectantes y/o Antisépticos, tiene que ver con la

inhibición del crecimiento microbiano; lo cual en la práctica se observó que el

formol tiene mayor efectividad de desinfección y lo opuesto es con el alcohol y

detergente.



VIII. CUESTIONARIO:

1. ¿Qué diferencia hay en cuanto al uso de la ebullición, la tyndalización y la pasteurización para el control microbiano?

2. ¿Cuál es la relación entre la temperatura y el tiempo sometido para

lograr la muerte de los microorganismos?

Para todos los microorganismos existe una temperatura máxima de

crecimiento por encima de la cual mueren.

A temperaturas altas casi todas las moléculas pierden su estructura y su

función, por el proceso denominado “desnaturalización”.

Ebullición Tyndalización Pasteurización

Temperatura

100ºC, tiempo

variable, virus y

toxinas pueden ser

muy resistentes(ej.

Virus de Hepatitis B

requiere 1 h a 100

ºC).

Usos: desinfección

de instrumentos.

Preparación de

conservas (pH<4.5

o baja aw), capazde

lograr esterilidad

comercial de

algunos productos

en los que no

puede crecer el C.

botulinum

Temperatura 100

ºC por 30 minutos

a un periodo de 3

días sucesivos.

Proceso

discontinuo con

períodos de

incubación

intercalados.

Usos:

esterilización de

productos de baja

resistencia

térmica, cuando

no existe otra

opción.

LHT (low

temperature holding)

a 30 minutos a

62.8ºC.

HTST (high

temperature short

time) a 15 segundos

a 71.6ºC

Destruye patógenos

(Salmonella,

Campylobacter,Lister

ia) y reduce flora de

deterioro

Usos: lácteos, jugos

de fruta, vinos,

cervezas



El tiempo para que una fracción determinada de estas células muera es

independiente de la concentración inicial.

El tipo de calor también es importante: el calor húmedo tiene mayor

poder de penetración que el calor seco y produce una reproducción más

rápida de organismos vivos a una temperatura determinada.

Según la fig. la muerte por desnaturalización es una función exponencial,

de primer orden, y ocurre más rápidamente cuando mayor es la

temperatura, significa que a cualquier tipo de tasa de muerte es

proporcional a la concentración de microorganismos a ese tiempo.

3. ¿Cuál de los agentes químicos usados logran un efecto bactericida y/o

bacteriostático?

El formol (disolución acuosa al 40 % de aldehído fórmico).

4. Elabore una tabla e indique según el grado de inhibición si fue alto,

medio y/o bajo por parte dela gente químico usado sobre un

determinado microorganismo.

Agente químico Grado de inhibición

Alcohol Bajo

Detergente Bajo

Formol Alto



Legía Medio

Yodo Medio

IX. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS:

MIDIGAN/ PARKERA/ MARTINKO, Broock – Biología de los Microorganismos,

Editorial Mc Graw Hill,10ma Edición, Impreso en España 1998, Capitulo 5, 6 y

24, Páginas:162, 108, 797-809.

http://www.higiene.edu.uy/cefa/2008/morfologiayestructurabacteriana.pdf

http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap16.htm

http://www.seimc.org/documentos/protocolos/microbiologia/cap16.htm

desinfectantes y antisepticos

Education

Transcript of desinfectantes y antisepticos