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DESHIDRATACION
• TM PATRICIA TOLEDO RODRIGUEZ
Objetivo
eliminación completa del agua de la muestra para que se pueda embeber adecuadamente en los medios de inclusión no hidrosolubles posteriores.
• Puede realizarse con cualquier agente capaz de absorber agua de los tejidos.
Características:
1.No debe alterar las estructuras tisulares
2.Debe poder mezclarse con el reactivo intermediario o agente aclarante.
3.Rápido
Características:
1. Producir un endurecimiento aceptable
2. Lo mínimo de peligrosidad intrínsica (vapores)
3.Mínimo riesgo de incendio/explosión
Uso graduaciones crecientes
• Serie de graduación creciente
• Volumen y número de baños del agente deshidratante
• Baños múltiples
• Tiempo de deshidratación
• Empleo de agentes accesorios: sulfato de cobre anhidro, óxido de calcio y resinas humectantes.
• Se recomienda comprobar el grado de pureza de los alcoholes absolutos (100%)
Se pueden utilizar
1. ALCOHOL ETILICO
2. Alcohol metílico
3. Acetona
4. Alcohol Isopropílico
5. Dioxano
6. Alcohol Butilico
7. Tetrahidrofurano
ALCOHOL ETILICO
Es el más usado, excelente deshidratante, muy inflamable y de mayor precio que el OH metílico. Para abaratar se usa etanol (OH desnaturalizado con metanol)
CHCHCHCH3333CHCHCHCH2222OHOHOHOH
USO
1.Graduación creciente
2. Paulatina
3. Se recomienda: 70%-95%-100%
4. Chequear pureza de los reactivos
5. Controlar saturación de los mismos
ALCOHOL METILICOALCOHOL METILICOALCOHOL METILICOALCOHOL METILICO
funciona igual que el alcohol etílico . Inflamable y tóxico.
ACETONAACETONAACETONAACETONA
muy volátil y de rápida acción.
ALCOHOL ISOPROPILICO O ISOPROPANOL
líquido transparente, inflamable de olor intenso y miscible con
agua. Es incompatible con inclusión con celoidina y provoca
menor endurecimiento de las muestras que el alcohol etílico.
CH3CH (OH)CH3)
Solventes Universales
DioxanoDioxanoDioxanoDioxano
• miscible con la parafina
TETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANOTETRAHIDROFURANO
miscible con agua, alcoholes de baja graduación, éter, cloroformo, tolueno, xileno y parafinas. Es de rápida acción y no causa retracción excesiva de los tejidos.
Solventes Universales
Alcohol Butilico
miscible con la parafina.
CHCHCHCH3333CHCHCHCH2222CHCHCHCH2222CHCHCHCH2222OHOHOHOH
BATERIA DESHIDRATACION
FIJADOR OH 70°OH 95°
OH 100° OH 100°
Aclaramiento
OBJETIVO
• Se trata de un proceso por el cual se consigue la sustitución del agente deshidratante por una sustancia miscible con el medio de inclusión que va a utilizarse.
• El agente aclarante es un líquido, donde pueda disolverse el medio de inclusión y, de éste modo, penetrar en el tejido.
• No es un objetivo aclarar la muestra a pesar del nombre
La elección de cual agente usar depende
1. Rapidez para eliminar el deshidratante
2. Acciones nocivas sobre los tejidos y células
3. Adecuación del aclarante sobre el deshidratante
1. Adecuación del aclarante sobre el medio de inclusión
2. Toxicidad
3. Peligrosidad
4. costo
BATERIA DE ACLARAMIENTO
• Se realizan baños sucesivos de duración variable en función de las características del agente y del volumen de la muestra. En el En el En el En el aclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay diluciaclaramiento no hay dilucióóóón del n del n del n del agente. agente. agente. agente. Pueden realizarse pasos intermediarios a aclaramiento de 1:1 , 1:2 con el deshidratante puro.
AGENTES ACLARANTES
1. Xileno (Dimetil benceno)
2. Tolueno (metil benceno)
3. Benceno
4. Cloroformo
5. Tetracloruro de carbono
6.Dioxano
XILENO
• VENTAJAS• No disuelve celoidina• Agente aclarante más rápido• Endurece poco los tejidos (relativo)
XILENO
• VENTAJAS
• Se elimina fácilmente del medio de inclusión
• Punto óptimo de clarificación fácil de apreciar
• USO RUTINARIO
XILENO
• DESVENTAJAS• Es tóxico• Solo aclara desde alcohol absoluto• Tiende a volver blanquecinos los tejidos
• Endurece si se sobrepasa el tiempo óptimo
• Tiende a acidificación
TOLUENO
• VENTAJAS• Es rápido• Endurece menos que el xileno y no blanquea los tejidos
• Puede conservar una muestra por más de 12 horas sin alteraciones
TOLUENO
• VENTAJAS
• Punto óptimo de clarificación fácil de apreciar
• USO RUTINARIO• MAS LENTA PENETRACION QUE XILOL
TOLUENO
• DESVENTAJAS• Es tóxico• Solo aclara a partir del alcohol abs.• Tiende a la acidificación
BENCENO
• VENTAJAS
• Es relativamente rápido• Endurece poco y no blanquea• Causa una retracción mínima• Se elimina fácilmente
BENCENO
• DESVENTAJAS
• Muy tóxico• Altamente inflamable
CLOROFORMO
• VENTAJAS• No afecta al tejido• Es lento• Muy útil en tejidos fibrosos, muestras descalcificadas, pieles, etc
CLOROFORMO
• DESVENTAJAS• El punto de aclaramiento es difícil de apreciar
• El tejido tiende a flotar• Es muy difícil de eliminar para la parafina
• Olor poco agradable
Tetracloruro de carbono
• VENTAJAS
• No es inflamable• No afecta al tejido• Más barato que cloroformo• Uso en piezas duras
Tetracloruro de carbono
• DESVENTAJA• Muy tóxico• Lento• Difícil identificar punto de aclaramiento
• Demora cerca de 15 horas
Dioxano
• VENTAJAS• Es también un deshidratante• Miscible con la parafina• Se puede utilizar como deshidratante y aclarante
Dioxano
Desventajasincompatible con los fijadores que tienen dicromato
Indice de deshidratación menor que los alcoholes
Debe eliminar el agua acumulada después de cada inclusión
con cloruro cálcico
Inodoro Muy tóxico (se exige su uso bajo campana)
PROTOCOLO
• PROCEDIMIENTO LENTO1.OH 70% 2H
2.OH 95% 2H
3.OH 100% 2H
4.OH 100% 1H
5.X I 2H
6.X II 2H
7.X III 1H
PROTOCOLO
• PROCEDIMIENTO RAPIDO1.OH 70% 30 MIN
2.OH 100% 30 MIN
3.OH 100% 30 MIN
4.OH 100% 30 MIN
5.X I 15 MIN
6.X II 30 MIN
IMPORTANTE
• Las muestras pueden permanecer por largos períodos de tiempo en:
1.Lavado post fijación (correcta fijación)
2.OH de baja graduación ***
CONTROL DE SATURACION
CONTROL DE SATURACION
CONTROL DE SATURACION
RETORTA DE PROCESADOR
INTERIOR DE RETORTA
ESTACIONES
IMPREGNACION E INCLUSION
DEFINICION
• Es el proceso de tiene por objeto rellenar o infiltrar completamente la muestra con el medio que se va a utilizar para la imbibición del tejido. El fundamento del proceso radica en la ocupación completa con el medio de los espacios intra y extraceculares inicialmente llenos con agua
MEDIOS DE INCLUSION
HIDROFILOSHIDROFILOSHIDROFILOSHIDROFILOS
AGARAGARAGARAGARGELATINAGELATINAGELATINAGELATINAPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLPOLIETILENGLICOLRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS ACRILICASRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIRESINAS EPOXIOCTOCTOCTOCT
HIDROFOBOSHIDROFOBOSHIDROFOBOSHIDROFOBOS
PARAFINAPARAFINAPARAFINAPARAFINAPARAPLASTPARAPLASTPARAPLASTPARAPLASTRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASRESINAS SINTETICASCELOIDINACELOIDINACELOIDINACELOIDINANITROCELULOSASNITROCELULOSASNITROCELULOSASNITROCELULOSAS
MEDIOS HIDROFILOS
• Agar y gelatina: la inclusión no requiere de deshidratación y aclarantes, se realiza una inclusión con concentraciones crecientes del medio. Puede endurecerse el taco obtenido con formalina cálcica , hecho que facilita el corte.
• OCT: son marcas comerciales.
MEDIOS HIDROFILOS
• Resinas Sintéticas: ha reemplazado el uso de la gelatina
MEDIOS HIDROFOBOS
• Celoidina: nitrocelulosa purificada de baja viscosidad, se utiliza en muestras de dureza heterogénea, por ejemplo globo ocular, se usa en estudios neurohistológicos, pues la celoidina provoca pocas retracción y compresión del tejido, favoreciendo los estudios de poblaciones celulares
MEDIOS HIDROFOBOS
• PARAFINAS: mezcla de hidrocarburos saturados de cadena larga que se obtiene como un subproducto incoloro e inodoro de la industria petroquímica. A temperatura ambiente es sólida. Existen diferentes tipos de parafina, variando en punto de fisión (40 a 70°c).
PARAFINAS
• Las nueva generación de parafina tienen incluidos polímeros plásticos, y se conocen comercialmente con nombres tales como Paraplast, paraplast plus, paraplast X-extra, histosec, histowax, etc.
PARAFINAS
• Cortes mas uniformes y menor efecto compresor sobre el bloque de tejido a t. ambiente
• Aumento de dureza y homogeneidad del bloque
IMPORTANTE
• CALIDAD INTRA HOSPITALARIA
• CONTROL DIARIO CON TERMOMETRO EXTERNO DE LAS TEMPERATURAS DE
TODAS LAS PARAFINAS.
INCLUSION Y ORIENTACION DE LAS MUESTRAS
CONTENEDOR DE MUESTRAS
HOJA DE CONTROL/REGISTRO
PINZAS
CASSETTES DE INCLUSION
DIFICULTALES
DIFICULTALES
Piel
Cono, borde marcado.
Piel
Piel
Piel
Cono, limite marcado
Piel
Piel.
Vesícula.
Vesícula.
Mama
Mama.
Mama.
Material mucoso.
Material disgregado.
Material disgregado.
Cono.
Cono.
Cono.
Cono.
Incluir por área de obtención de corte, área mayor.
Incluir por área mayor.
Muestra endoscópica, teñida con eosina.
Muestra endoscópica, teñida con eosina.
Muestra endoscópica teñida con hematoxilina.
Cinco muestras endoscópicas.
Cuatro muestras endoscópicas.
Cuatro muestras endoscópicas.