フローサイトメーター

CyFlow Cube 6／Cube 8

R&I事業本部　事業企画部　細胞計測事業推進課

http://www.sysmex-fcm.jp

*外観、仕様等については改良のため予告なしに変更することがあります。

CyFlow Cube 6

CyFlow Cube 8

G1601030_1412_1601Ⅲ

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CyFlow Cube 6／Cube 8は豊富なレーザーオプションがあり、カスタマイズが可能な、コンパクトでコストパフォーマンスに優れたフローサイトメーターです。PCモニターがビルトインされた小型タイプで、スペースの限られた研究室、実験室でも場所を取らずにすっきりと設置できます。起動時のセットアップ、終了時のメンテナンスは自動ポップアップされる指示に従うだけで完了。初めてフローサイトメーターを使用されるお客様やアグロサイエンス分野で研究をされている方でも、難しい操作を必要とせず、ご利用いただけます。

コストパフォーマンス 自由度。

幅広いオプションから用途に合わせてカスタマイズが可能。

アナライザー

フローサイトメーター

A

B

＋

フィルターもレーザーも豊富なオプションから自由に選択できます。

CyFlow Cube 8 with up to 8 optical parameters-6 colors

CyFlow Cube Sorter with up to 5 optical parameters

Excitation flexbility : up to 4 light sources simultaneously[available wavelengths see table below]

CyFlow Cube 8 Sorterは煩わしい設定をすることなく簡単に、目的細胞を高い純度で回収できるセルソーターです。最大の特徴はピエゾ素子を用いた独自のソーティング原理を採用したことです。ドロップレットを形成する従来方式とは異なり、細胞へのダメージを最小限に抑えられるため、細胞の形態やバイタリティーに影響を与えず、ダメージを受けやすい細胞や、プロトプラストのような壊れやすいものでもソーティング可能です。さらに、完全閉鎖型流路系を実現し、エアロゾルの発生がなく安全かつ安定して使用できます。目的細胞集団をゲーティングし、ソートボタンをクリックするだけで簡単にスタートしますので、設定の煩雑さもありません。

ソーティング原理（ピエゾ方式）ピエゾ素子の微細な振動により、目的となる細胞や粒子の流れる方向を変え、回収方向へと導きます。

レーザー光

廃液へピエゾ素子

細胞回収へ

CyFlow Cube 8は、ソーティングコントロールユニットを

搭載することで、CyFlow Cube 8 Sorterへ

アップグレードできます。

Sorting control unit

ダメージからの解放。

独自のピエゾ方式を採用。高純度のダメージレス・ソーティングを実現しました。

セルソーター

フローサイトメーター

CyFlow Cube 8 SorterCyFlow Cube 6／Cube 8

CyFlow Cube 8 Sorter

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CyFlow Cube 6／Cube 8には細胞絶対数カウント機能（TVAC:True Volumetric Absolute Counting）が標準装備されています。従来から行われているビーズを使った間接的な絶対数カウントは、ビーズの凝集や濃度調整などの面から問題が生じることがあります。TVACシステムはコスト面でも気になるリファレンスビーズを使用することなく、搭載されている２本の電極を用いることで正確に、一定量（200 µL）のサンプル量を測定し細胞数をカウントすることができます。また、ソフトウエア上で測定したいサンプル量を入力するだけで希望のサンプル量の測定も可能です。

主な特長

・絶対細胞カウント：CV≦ 2%（VC electrodes）・リファレンスビーズの必要なし ⇒ 低コスト・ビーズ調整にかかる時間をセーブ

細胞分析の精度と正確さを保証

STOP電極に達するまで測定

STARTとSTOP電極によりきっかり200 µL測定

測定量は自分で指定する

リージョン中の測定細胞数を指定する

細胞絶対数カウント機能

フローサイトメーター

Precision &Accuracy

Analyze all

VC electrodes

VC of volume

Cell in Region

マニュアル測定以外に4つの測定モードがあります。多様な測定モード

Measure:Flow speed

Measure:Volume : 200 µLFlow speed

Measure:Flow speed

Clear data

Clear data

Clear data

Measure:Flow speed

End Criteria:Stop Electrode

End Criteria:Stop Electrode

End Criteria:Stop ElectrodeVolume

End Criteria:Stop ElectrodeVolume

End Criteria:Start Electrode

End Criteria:Volume

End Criteria:Volume

pre-Measure:Flow speed

pre-Measure:Flow speed

pre-Measure:Flow speed

TVAC : True Volumetric Absolute Counting

Computer Controlled Motor

c : particle concentrationn : counted number of cells／particlesv：given volume

Digital Velocity Meter Syringe Pump Start

Stop

Sample Tube

Flow Cuvette

Start Count Stop

Laser beam

c= nv

ミネラル飲料水中のバクテリア検出ミネラルウォーターを、SYBR Green I およびPIにて染色し、細胞絶対数カウントモード（VC electrodes）により、ミネラルウォーター中のバクテリア数を測定した。（CyFlow Cube 6／Cube 8による2カラー解析）

12000

10000

8000

6000

4000

2000

00　　　2000　　 4000　　 6000　　8000 10000　 12000

Dead

Live

実測値

理論値FL-1

R=0.99987

細胞絶対数カウントを用いたビーズ測定BD TruCOUNT Tubes （BD社 Cat.#340334, 54900 beads/tube）を、メーカーの指示書に従い、PBS（1mL）に懸濁したものを原液として、5、 10、 50および100倍希釈のビーズ含溶液を準備した。細胞絶対数カウントモード（VC electrodes）にて測定し、測定結果を理論値と比較した。（CyFlow Cube 6／Cube 8）

FL-2

TruCOUNTビーズ

上記は1mL中のバクテリア数を示す

Total events

Live

Dead

100550

66345

34205

上記のFlow speed、Volumeは、ご自身で数字を入力することができます。

102　　　 103　　　 104

104

103

102

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CyFlow Cube 6／Cube 8のオプションとして、サンプルローディングシステムCyFlow Robby Autoloading Stationがあります。Autoloading Stationを装備することで、3つのタイプのサンプルローディングが可能になります。マルチタイタープレートでは、48-wellおよび96-wellからのサンプリングが可能で、最大同時にプレート2枚を測定できます。さらに、専用のチューブラックを使用することで、最大120本のチューブを連続測定可能です。最大120本のチューブを専用ラックにセットし、そのローディングを自動で行います。これにより実験および検査の作業効率を高めることができます。

実験・検査の作業効率が向上CyFlow Cube 6／Cube 8はWindowsベースのCyViewソフトウエアにより制御されています。 CyViewはデータ取得およびデータ解析（オンライン、オフライン）が可能です。オンラインだけでなく、オフラインでの蛍光補正も可能です。また、CyViewはイムノフェノタイピング、細胞周期、DNA定量、微生物、プロイディー解析など幅広いアプリケーションに対応した解析を可能にしています。取得されたデータはすべてFCSフォーマットで保存されるため、他のFCS解析ソフトウエアでのインポートも簡単に行えます。

初めてお使いの方でも安心な直観的ソフトウェア

自動サンプルローディングシステム

フローサイトメーター

CyFlow Robby 6／Robby 8 Autoloading Station

ソフトウェア

フローサイトメーター

CyView

3種類のローディングタイプが可能

48-well 96-well チューブラックリージョンごとのイベント数や統計データ

File Operator：一目で分かるアイコン操作

操作パネル：ワークプロセスはこの順番で

Instrument settings：一目で分かるタブ表示

結果表示

操作、エラーメッセージなどを表示　

リアルタイム表示（流速、データメモリ）

想定したサンプルの量および時間を表示

サンプル、シース液、廃液の量、状態を表示

※本体購入後でもAutoloading Stationを装備できます。このローダー装備システムにおいても通常のシングルポートからのサンプルロードが可能です。（ソフトウェア上での切替による）

●　flow cytometry standard file format （FCS 3.0） for storage of original and evaluated data●　64—4096 channels resolution for 1P histograms●　64/64—4096/4096 channels for 2P dotplots●　linear | 3-decade logarithmic | 4-decade logarithmic scale （selectable）●　compensation and XML configurations can be stored separately or included in the FCS file●　connection to well plate/sample tube autoloader●　multitube panel system with automated acquisition●　automated data transfer to laboratory information systems （LIS）●　support of 3rd party flow cytometry software （on request）

CyView Software Specifications

CyFlow Robby 8 Autoloading Station

CyFlow Robby 6 Autoloading Station

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アプリケーションデータ

フローサイトメーター

CyFlow Cube 6／Cube 8

Agrosciences | Breeding | Aquaculture

_ Bioreactor Process Optimisation _ Particle Counting _ Pharmaceutical Industry _ Quality Control in Cosmetics _ Research _ Detection of Ploidy Level _ Plant Genome Size

_ DNA Analysis _ Detection of Apomixis and _ Reproduction Behavior _ Aneuploids and Allopolyploids _ Detection of Hybrids _ Polysomy _ Polysomaty and Plant Chimera Analysis

_ Gender Determination _ Cell Type Identification in Natural _ Populations _ Sperm Cell Counting _ Sperm Cell Viability _ Sperm Cell Function

幅広いアプリケーションに対応

_ Immunology_ HIV/AIDS_ Leukemia_ Lymphoma 　_ Hematology_ Pathology

_ Cell Sorting _ Cell Cycle Analysis _ Cell Proliferation_ Cytokines _ Platelet Counting _ Leukocyte Depletion

_ Viability_ Live/Dead Analysis _ Cell Counting_ Viability _ Live/Dead Analysis _ Cell Cycle Analysis _ Quality Control

_ Toxicology _ Quality Control in Dairy Industry & Milk Products _ Fermentation Process Control _ Detection of Microorganisms : Yeast/Bacteria/Viruses_ Biomonitoring_ Marine Biology & Algae

Medical Diagnostics | Research Microbiology | Industry Food & Beverage Industry

_ Cancer Research_ DNA Analysis _ Stem Cells _ Apoptosis_ Cell Cultures _ Absolute Cell Counting

10 µL中に含まれる細菌数を示す

細菌の生死判定細菌（生菌数107cfu/mLに調整した菌液）をSYBR Green I および PIにて染色、細胞絶対数カウントモード（VC of volume）により測定解析した。（上） 　　　（大腸菌， 　　　　　　　　ATCC29522） （下）　　　　　（黄色ブドウ球菌，　　　　　　　　　　　　　 ATCC29213） （CyFlow Cube 6／Cube 8による2カラー解析）

Live

Dead

event 数

26686

4255

10 µL中に含まれる細菌数を示す

Live

Dead

event 数

15392

10019

105

104

103

101

105

104

103

101

酵母の細胞周期の解析酵母の核酸DNA（RNAはRNase Aで分解させておきます）に結合するPIの量により、細胞周期（G0/G1もしくはG2/M）を解析し、発酵中の酵母の増殖状態などをモニターすることができます。グラフは酵母の増殖曲線のタイムポイントごとの細胞周期解析データを示しています。対数増殖期には分裂している細胞の割合が多くなっていますが、細胞密度が一定に保持される状態に達すると、増殖しない状態の細胞の割合が増えていきます。写真はPIで染色された酵母です。

紙パルプ中の粘着性粒子の解析再生紙や紙パルプからの製紙工程では、さまざまな種類の不均一な粘着性粒子が混入しています（例：製本に使用する糊など）。これらは「ピッチ」と呼ばれ、後のプロセスで断紙や穴あきなどに影響してくるため、ピッチコントロール剤の添加などにより分散、凝結もしくは非粘着化を行う必要があります。

希釈した古紙パルプのサンプルを50 µm のメッシュサイズのCellTricsでフィルトレーションし、粘着性粒子に結合するSticky Control Reagent (Nile Red)で染色の後、CyFlow Cube 6で測定しました。 ピッチ由来の蛍光強度や粒径の分布と粒子数を測定しながら、ピッチコントロール剤の添加量を調節していきます。

101　　　 102　　　 103　　　 104　　　 105

SSC

FSC

FSC

All events

101　　　 102　　　 103　　　 104　　　 105

SSC

All events

101　　　 102　　　 103　　　 104　　　 105

PI

SYBR Green Ⅰ

E.coliDead

Live

E.coli

105

104

103

102

101

102　　　 　 　103　　　 104　　　 105

PI

SYBR Green Ⅰ

S.aureus

S.aureus

Dead

Live

105

104

103

102

101

E. coli Escherichia coliS. aureus Staphylococcus aureus

本データはDr. Sommerより提供されました。参考文献：Sommer, S., Die gläserne Hefe, Das deutsche Weinmagazin, 22 (2007), 28-31

酵母の生死判定Yeast Controlキットを用い、酵母（Saccaromyces cerevis iae）の生死状態の解析を行いました。図のQ1領域は生細胞（Fluorescein Diacetateにより染色される細胞集団）、Q4領域は死細胞（Propidium Iodide（PI）より染色される細胞集団）を表しています。左から右のプロットに移行するにつれ、酵母の生存率は経過時間の影響を受けて低下し、死細胞の割合が増加しています。

Hydrophobicity

6000

4500

3000

1500

0102 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 　103

ピッチ（粘着性粒子）由来と推定される蛍光

サンプルAサンプルBサンプルC

Viability

Mortality Mortality Mortality

Time

Viability Viability

FL1 F

DA

FL3 PL FL3 PL FL3 PL

FL1 F

DA

FL1 F

DA

1000

100

10

1

0.1

1000

100

10

1

0.1

1000

100

10

1

0.10.1 1 10 100 1000 0.1 1 10 100 1000 0.1 1 10 100 1000

9 10

主な仕様

CyFlow Cube 6 CyFlow Cube 8 CyFlow Cube 8 Sorter

＜ 100 MESF（FITC）＜ 50 MESF（PE）

CV ≦ 2%（DNA定量：CV ≦ 1%）0.1 µm

3/4-decade log電極およびシリンジによる細胞絶対数測定が可能

15 µm×100 µm（488 nm使用時）クォーツ製フローセル（350×200 µm）

8（FSC, SSC, 蛍光6）65,536 channels（16 bit）

15,000 events/sec0.1 - 20 µL/sec の間で調整可能

3.5 mL（55×12 mm）（CyFlow Robby Autoloading station使用時は96/48 well plate, チューブが可能）

-

-

AC100-240V（50Hz/60Hz）200VA以下15 - 30℃

20 - 85%（結露しないこと）CyViewソフトウェア

Flow Cytometry Standard（FCS）3.0Intel® CoreTM2 Duo CPU 2.53GHz

2

6（FSC, SSC, 蛍光4）

-

-

幅385×奥行282×高さ287（ディスプレイ開時：530 mm）

約18 kg15 インチTFT液晶

3（＋ UV-LED） 2

5（FSC, SSC, 蛍光3）

完全密閉型ピエゾ方式

300 events/sec（純度 ＞ 99%）

幅500×奥行470×高さ355（ディスプレイ開時：670 mm）

約40 kg19 インチTFT液晶

488 nm（50,100 mW）：固体レーザー638 nm（25 mW）：半導体レーザー640 nm（40 mW）：半導体レーザー405 nm（100 mW）：半導体レーザー355 nm（20,50,100 mW）：半導体レーザー365 nm（～640 mW）：LED375 nm（16 mW）：半導体レーザー532 nm（30,100 mW）：半導体励起固体レーザー561 nm（100 mW）：固体レーザー594 nm（50 mW）：固体 　　　　　　　 （その他のオプションに関してはお問い合わせください）

488 nm（50,100 mW）：固体レーザー638 nm（25,40 mW）：半導体レーザー　　　　 （その他のオプションあり）

蛍光検出感度

蛍光検出分離能最小検出粒子径ダイナミックレンジ細胞カウント光学系搭載可能最大レーザー数

レーザー

ビーム形式光学測定部信号処理系同時取得可能パラメーター（最大）データ解像度流路系サンプル解析速度（最大）フローレート

サンプルチューブ

ソーティングソーティング方法

ソーティング速度/純度

本体・PC

寸法（mm）

重量PCモニター電源消費電力動作環境（temperature）動作環境（humidity）ソフトウェアデータ出力フォーマット処理機構

基本性能

488 nm

638 nm

640 nm

405 nm

561 nm

375 nm

UV-LED 365 mW

Green

Orange

Orange Red

Red Ⅰ

Red Ⅱ

Far Red

Red Ⅰ

Red Ⅱ

Far Red

Blue

Green

Orange Red

Red Ⅰ

Red Ⅱ

Far Red

Orange

Orange Red

Red Ⅰ

Red Ⅱ

Far Red

Blue

Green

Blue

FITCAlexa Fluor 488GFP

PE

PE-Texas RedPl

PE-Cy5PerCP

PerCP-Cy5.5

PE-Cy7

APCAlexa Fluor 647

Alexa Fluor 700

APC-Cy7APC-H7APC-eFluor 780

BV421Pacific BlueeFluor 450

BV510AmCyanFVD eFluor 507ZombieAqua

BV605ZombieYellow

BV650

BV711

BV785

PEmStrawberryDsRed

Alexa Fluor 594mCherryPl7-AAD

PE-Cy5mPlum

PE-Cy5.5

PE-Cy7

Hoechest33342DAPlIndo-1（Ca＋＋ bound）

ZombieAquaIndo-1（Ca＋＋ free）

DAPl

CyFlow Cube 6 CyFlow Cube 8

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蛍光色素モデル別対応表

RepresentativeFL-dyes

StandardfilterLaser

PMT # for FL

1 laser 1 laser2 laser 2 laser 3 light sources

3 4 4 3 4 6 6 6 6 6

●上記はあくまで典型的なカスタマイズの例ですので、その他のカスタマイズに関してはお問い合わせください。●多くのフィルターをご用意しておりますので、お問い合わせください。●CyFlow Cube 8では、最大で3レーザー＋UV-LEDの使用が可能です。ただし蛍光検出器の数は最大6個になります。