Cultivo de microorganismos


Para estudiar a los microorganismos

se han diseñado diversos métodos

que permiten cultivarlos en

condiciones artificiales, donde se

controlan las condiciones

experimentales y se tiene un sólo

tipo de microorganismo.


• Cultivar un microorganismo significa

promover intencionalmente su

desarrollo en medios de cultivo y

condiciones de laboratorio controladas.

• Cultivo: Población de microorganismos

desarrollada en un medio.

Cultivo puro o axénico

• Es aquel en el que

existe un solo tipo

de microorganismo.

Cultivo mixto • Es aquel que

presenta una

mezcla (más de 2

especies) de

microorganismos

Cultivo tipo o cepa de

referencia

• Es el que contiene un genero y especie conocida de microorganismo debido a que esta perfectamente caracterizado. Son proporcionados por laboratorios públicos o privados (ATCC, CECT,DSMZ) y se emplea como control en diversos ensayos (validación de medios, control de equipo, pruebas de susceptibilidad a antibióticos, etc).

Colecciones microbianas

• http://www.cect.org/

• http://www.atcc.org/

• http://www.cbs.knaw

.nl/

• http://www.dsmz.de/

• http://www.jcm.riken.

go.jp/

Definiciones

• Técnica aséptica: conjunto de

procedimientos realizados para prevenir

o evitar la contaminación del material

estéril.

Medios Líquidos

• Inoculación

Pipetas serológicas

Asas bacteriológicas

Pipeta Pasteur

Hisopo

• Desarrollo

Superficie o a través

de todo el tubo

• Ventajas

Agitación

Homogenización

• Desventajas

No se detecta

contaminación

Medio líquido

Siembra en medio sólido

• Obtención de

colonias aisladas a

partir de una mezcla

de microorganismos

Colonia: acumulo de microorganismos visibles a simple vista,

que provienen de una sóla célula o acumulo de células que

comparten las mismas características fenotípicas y

genotípicas

FORMA

Características macroscópicas

ELEVACIÓN


BORDES



TEXTURA

cremosa

membranosa

Viscosa

Butirosa

COLOR

Circunscrito a la colonia

Difunde al medio

Medio sólido (agar inclinado)

• Se emplea para

conservar

microorganismos.

• La inoculación

puede ser por estría

recta o estría

ondulada

Medio semisólido

• Se emplea para ver

la movilidad de los

microorganismos.

• La forma de

inoculación es por

es por picadura

Condiciones para el desarrollo

de los microorganismos

• Temperatura

• Requerimientos de oxígeno

• pH

• Concentración de solutos

Temperatura

• La temperatura es uno de los parámetros ambientales más importantes que condicionan el crecimiento y la supervivencia de los microorganismos.

• La temperatura afecta a la velocidad de crecimiento de los microorganismos. Cada bacteria muestra una curva característica de tasa de crecimiento en función de la temperatura, donde podemos distinguir tres puntos característicos llamados temperaturas cardinales.

Temperaturas cardinales

Clasificación en base a su

temperatura óptima de crecimiento

Temperatura

• Psicrófilos:microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento es <15°C.

• Psicrotolerantes:Microorganimos que crecen a 0°C pero cuya temperatura óptima de crecimiento es de 20-30°C. (bacterias, algas , hongos, protozoarios).

Mesófilos

• Microorganismos cuya temperatura óptima es de 35°C. Pueden desarrollar en un intervalo entre 15-42°C.

• Se encuentran en animales de sangre caliente acuáticos o terrestres.

Termófilos

Son microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento es > 65°C, se desarrollan en un intervalo de 45-80°C.

Se encuentran en aguas termales.

Hipertermófilos

• Son microorganismos cuya temperatura óptima de crecimiento es >80°C

• Microorganismos que se encuentran en Geisers, chimeneas submarinas, etc.

Requerimientos de oxígeno

• Los microorganismos muestran

una gran diversidad en cuanto a su

capacidad para utilizar el oxígeno

libre (O2) durante la respiración

celular.

Requerimientos de oxígeno

• Aerobios (21% O2 o más)

• Microaerofilicos (2-10 % O2)

• Anaerobios facultativos

• Anaerobios aerotolerantes

• Anaerobios estrictos

Microorganismos aerobios

• Necesitan el oxígeno atmosférico para poder crecer.

• Emplean el oxígeno como último aceptor de electrones durante la respiración

• Ejemplos: Bacillus, Pseudomonas, Micrococcus, etc

Microorganismos microaerofílicos

• Requieren poca cantidad de oxígeno para su desarrollo (2-10 % O2).

• Un exceso de oxígeno bloquea la actividad de sus enzimas y provoca la muerte de los microorganismos.

• Ejemplo: Campylobacter jejuni, Neisseria, Mycobacterium, etc

Microorganismos anaerobios

facultativos• Estos microorganismos

crecen en tanto en presencia como en ausencia de oxígeno, empleándolo durante la respiración aerobia.

• En ambientes carentes de oxígeno realizan respiración anaerobia utilizando NO3 y SO4como aceptores finales de electrones.

• Ejemplos: Las enterobacterias


aerotolerantes• Son microorganismos

que crecen en presencia de oxígeno, pero no lo utilizan para su desarrollo. Emplean compuestos orgánicos como aceptores de electrones.

• Fermentan los carbohidratos a ácido láctico

• Ejemplo Lactobacillus, Streptococcus.


estrictos

• No crecen en presencia de oxígeno, este resulta letal para su desarrollo.

• La presencia de oxígeno genera la acumulación de sustancias tóxicas como el ión superóxido (O2

-).

• Carecen de enzimas para descomponer este ión.

Equipo para crear condiciones

anaerobicas

Especies reactivas de oxígeno

2O2- + 2H+ H2O2 + O2

Superóxido

dismutasa

2H2O2 2H2O + O2

catalasa

H2O2 +NADH + H+ 2H2O peroxidasa

Enzimas destoxificantes

2O2- + 2H+ + cit c reducido H2O2 + cit c oxidado

Superóxido reductasa

En ausencia de estas enzimas, cantidades pequeñas de

oxígeno resultan letales para los microorganismos

anaerobios. Ejemplo: Clostridium,

Enzimas destoxificantes

Los anaerobios aerotolerantes utilizan una enzima libre de

Mn2+ para convertir:

2O2- H2O2 + O2

pH

ClasificaciónpH

externoEjemplo

Acidófilos 1.0 - 5.0

Bacterias lácticas.

Lactobacillus,

Helicobacter

Neutrófilos 5.5 - 8.5

La mayoría de las

bacterias

Micrococcus,

Bacillus, Serratia,

etc

Alcalófilos 9.0 - 10.0 Vibrio

Concentración de solutos

(NaCl)

• Halotolerantes S.

aureus (1-7.5 %)

• Halofilos Vibrio

cholerae (3.0 %)

• Halofilos extremos

(>10 %)

Concentración de solutos

carbohidratosPlasmólisis Plasmóptisis

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