Cromatografía en papel
21
Cromatografía en papel Quinto Semestre Química Biológica Universidad Galileo
-
Upload
andrea-diaz -
Category
Science
-
view
264 -
download
3
Transcript of Cromatografía en papel
Cromatografía
en papelQuinto Semestre
Química Biológica
Universidad Galileo
ANTECEDENTES
Las experiencias en cromatografía se
remontan a 1850, cuando Runge
describió para el análisis de mezclas de
colorantes, aplicando gotas de
colorantes en papel y notando la
separación en diferentes colores.
ANTECEDENTES
Sin embargo, el crédito del
descubrimiento de la cromatografía se la
da al botánico Tswett, quien en 1906
efectuó la separación de pigmentos
vegetales en un tubo conteniendo
material adsorbente solido finamente
dividido,.
Se basa en….
En el coeficiente de partición liquido-
liquido de los compuestos.
CROMATOGRAFÍA EN PAPEL
Fue desarrollada por Martin en 1944.
Consiste en colocar en tiras de papel
como soporte de una fase estacionaria
acuosa mientras una fase móvil orgánica
se desplaza en la tira. Se utilizan gotas de
la sustancia a separar cerca del punto
donde partirá el desplazamiento de la
fase orgánica
CROMATOGRAFÍA
BIDIMENSIONAL
Es una variante de considerable poder de separación, ya que se emplean dos diferentes solventes aplicados secuencialmente para desplazar un solo compuesto.
La gota del compuesto (generalmente un aminoácido o un péptido) se “revela” como una mancha en papel. Y el material revelador es usualmente ninhidrina o permanganato de potasio.
CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA
Utiliza el mismo principio de la cromatografía en papel, el soporte utilizado es silica gel o celulosa colocadas en una hoja de vidrio o plástico en forma de capas muy finas.
En la cromatografla de capa fina, un adsorbente está depositado formando una delgada capa sobre una placa de vidrio, papel de aluminio u otros materiales, por la que ascienden, arrastradas por un disolvente (eluyente), una o más sustancias que se pretenden separar o identificar.
RELACIÓN DE FRENTES La relación de la distancia recorrida por
el compuesto entre la distancia que recorre el frente del solvente desde el sitio de aplicación se conoce como valor Rf (relación de frentes)
El Rf es una constante importante para propósitos de identificación.
RF=(distancia recorrida por el compuesto)
(distancia recorrida por el disolvente)
RELACIÓN DE FRENTES
Naturalmente, los valores de RF para un
determinado compuesto varían
ampliamente con los cambios de
disolvente.
El valor de RF para un compuesto dado
depende de su estructura y es una
constante física de éste, lo mismo que lo
es su punto de fusión.
DISOLVENTES DE ELECCIÓN
Cuanto mayor es la polaridad de los
compuestos, más intensamente se ven éstos
atraídos por el adsorbente. Se puede
establecer el orden aproximado de
polaridad:
ácidos carboxílicos < aminas < alcoholes y
tioles < aldehídos, cetonas y ésteres <
halogenuros de alquilo y arilo <
hidrocarburosno saturados < hidrocarburos
saturados
La polaridad del disolvente influye asimismo en la velocidad de ascensión del soluto a lo largo de la capa de adsorbente. A mayor polaridad del disolvente, mayor grado de ascensión del soluto por la placa, pudiéndose establecer un orden orientativo de polaridad creciente de los disolventes:éter de petróleo < tetracloruro de carbono < ciclohexano < éter etílico < acetona < benceno < acetato de etilo < cloroformo < etanol < metanol < agua < piridina < ácido acético
DISOLVENTES DE ELECCIÓN
MATERIALESBata, guantes.
Tubos capilares
Frasco con tapadera hermética
2 tiras de papel filtro de 3 x 8 cm
Regla , lápiz y tijera
Cloroformo
Hojas de remolacha
Mortero con pistilo
PROCEDIMIENTO
Paso no. 1
Macerar las hojas de remolacha en el
mortero con pistilo hasta extraer el
pigmento color purpura fuerte que estas
contienen.
Paso no. 2
Cortar dos tiras de papel filtro de 3 x 8cm.
Hacer una marca con lápiz a 1cm de la
parte inferior.
Paso no. 3
Con la ayuda de un capilar de vidrio
colocar una gota de la mezcla sobre la
línea trazada en el cromatofolio. Dejarla
secar y repetir el procedimiento 10 veces
Paso no. 4
Dejar secar las placas. Colocar en el
frasco aproximadamente 15mL de
cloroformo, tapar bien para que los
vapores ocupen la atmosfera del frasco y
evitar que se escapen.
Paso no. 5
Colocar las placas de papel con la muestra
dentro del frasco con cloroformo, dejar que el
eluyente suba por capilaridad.
Paso no. 6
Cuando el nivel de disolvente se
situé a unos pocos milímetros de la
parte superior del cromatofolio,
extraer éste y dejarlo secar al aire.
Marcar con un lápiz el nivel que ha
alcanzado el disolvente.
Paso no. 7 Medir la distancia a la que llego cada
mancha y calcular el Rf.
