Cromatografia de Liquidos de Alta Resolucion
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CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS DE
ALTA RESOLUCION (HPLC)
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La cromatografía engloba a un conjunto de técnicas de análisis basadas en la separación de componentes de una mezcla y su posterior detección.
Las técnicas cromatografías son muy variadas, pero en todas ellas hay una fase móvil que consiste en un fluido (gas, líquido, o fluido supercrítico) que arrastra a la muestra con un flujo constante de presión proporcionado por una bomba, hasta llegar al punto donde es introducida la muestra.
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CROMATOGRAFIA DE LIQUIDOS (HPLC)
El termino cromatografía de líquidos es sinónimo de cromatografía liquida de alta presión y de cromatografía liquida de alta resolución.
De esta manera, decimos que es una técnica de separación basada en una fase estacionaria y una fase móvil liquida.
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CARACTERISTICAS
Fase estacionaria: la separaciones se logran por procesos de participación, absorción e intercambio iónico, según el tipo de fase estacionaria empleada.
tipos de fase estacionaria:
* sílice modificada
* micropelas de polímero
Columna cromatografía : incluye columnas de acero inoxidable, de acero inoxidable con recubrimiento interno y poliméricas, rellenas con una fase estacionaria.
Fase móvil: es un disolvente o mezcla de disolventes
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Aparato: un cromatografo de liquido consta de un recipiente que contiene la fase móvil.
* una bomba
* un inyector
* una columna cromatografíca
* un detector
* un dispositivo de recolección de datos
Elución en gradiente: también conocido como programación de disolvente a la técnica de cambiar continuamente la composición del disolvente durante la cromatografía.
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INTERPRETACION DE CROMATOGRAMAS Cromatograma: es una representación grafica del detector,
concentración del analito en el efluente u otra cantidad usada como una medida de concentración del efluente en función del volumen de efluente o del tiempo.
Características del cromatograma
* volumen de residencia (D): es el volumen entre el punto en el que se encuentra los eluyentes y la entrada de la columna.
* tiempo muerto (tM): es el tiempo requerido para la elución de un componente no retenido.
* volumen muerto (VM): es el volumen de fase móvil requerido para eluir un componente no retenido.
* No. De platos teóricos (N): N es una medida de eficiencia de la columna.
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* pico: es la porción del cromatograma que registra la respuesta del detector cuando un componente individual eluye de la columna.
* relación pico/valle(p/v): se puede emplear como un criterio de aptitud del sistema en una prueba de sustancias relacionadas cuando no se logra la separación entre dos picos en la línea de base.
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* retención relativa (r): es el cociente entre el tiempo de retención ajustado de un componente y el otro usado con referencia obtenido a condiciones idénticas.
* tiempo de retención relativo(RRT): conocido como tiempo relativo n ajustado.
* factor de retención (k): conocido como factor de capacidad (k´).
* tiempo de retención (tR): es el tiempo transcurrido entre la inyección de la muestra y la aparición de la respuesta máxima.
*
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* resolución (RS): es la separación de dos componentes en una mezcla.
* factor de separación (α): es la retención relativa calculada por dos picos adyacentes por convención.
* factor de simetría (AS ): conocido también como factor de asimetría.
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REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS USP 37 FEUM 10 ED. HPLC (IS Analitica) http://chem-fuuast.weebly.com/
uploads/1/2/8/9/12894433/shimadzu_hplc_standard_operation_procedure_by_dr._sana_mustafa.pdf