CLÁUDIO ARAÚJO A IMUNIDADE INATA NA INSUFICIÊNCIA …

Universidade de Aveiro

Ano 2012

Departamento de Biologia

CLAacuteUDIO ARAUacuteJO DOS REIS

A IMUNIDADE INATA NA INSUFICIEcircNCIA CARDIacuteACA PAPEL DOS MONOacuteCITOS


Ano 2012




Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessaacuterios agrave obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Biologia Molecular e Celular realizada sob a orientaccedilatildeo cientiacutefica do Professor Doutor Joatildeo Tiago de Sousa Pinto Guimaratildees Professor associado da Faculdade de Medicina da Universidade do Porto e coorientaccedilatildeo da Professora Doutora Maria da Conceiccedilatildeo Lopes Vieira dos Santos Professora associada com agregaccedilatildeo da Universidade de Aveiro

o juacuteri

Presidente Prof Doutora Maria de Lourdes Gomes Pereira professor associado com agregaccedilatildeo da Universidade de Aveiro

Prof Doutor Andreacute Miguel Afonso de Sousa Moreira professor auxiliar convidado da Faculdade de Medicina da Universidade do Porto

Prof Doutor Joatildeo Tiago de Sousa Pinto Guimaratildees professor associado da Faculdade de Medicina da Universidade do Porto

Prof Doutora Maria da Conceiccedilatildeo Lopes Vieira dos Santos professor associado com agregaccedilatildeo da Universidade de Aveiro

Agradecimentos

Ao meu orientador Professor Doutor Joatildeo Tiago Guimaratildees por ter contribuiacutedo na minha formaccedilatildeo profissional e pessoal Agradeccedilo a orientaccedilatildeo prestada a confianccedila depositada e a leitura criacutetica da tese Agrave minha coorientadora Professora Doutora Conceiccedilatildeo Santos agradeccedilo a disponibilidade e leitura criacutetica da tese de mestrado Agrave Doutora Cristina Marquecircs pela disponibilidade demonstrada e pelas importantes dicas fornecidas ao longo da realizaccedilatildeo deste trabalho Agrave Conceiccedilatildeo e agrave Soacutenia pelo apoio demonstrado Agrave Alexandra pelo companheirismo e apoio dado durante o mestrado A todos os colegas do Serviccedilo de Patologia Cliacutenica que participaram no meu estudo e me ajudaram a concluir o mestrado Agrave Professora Doutora Elisabete Ramos e agrave Doutora Joana pela disponibilidade e ajuda dada no tratamento estatiacutestico Ao Diogo ao Gustavo e agrave Paula que me ajudaram de diferentes formas no desenvolvimento da tese Agrave minha irmatilde pelo seu apoio constante e pela ajuda preciosa para a conclusatildeo desta tese Aos meus pais que me incentivaram apoiaram e auxiliaram nesta etapa acadeacutemica

palavras-chave

Imunidade inata recetores toll-like insuficiecircncia cardiacuteaca monoacutecitos subpopulaccedilotildees monociacuteticas imunofenoacutetipo

Resumo

Os monoacutecitos desempenham um papel importante na imunidade inata e a ativaccedilatildeo desta eacute mediada pelos recetores Toll-like (TLRs) Os TLRs estatildeo envolvidos no reconhecimento de micro-organismos estranhos pelo sistema imunoloacutegico inato podendo tambeacutem ser ativados por moleacuteculas endogeacutenas Os TLR2 e TLR4 tecircm sido associados agrave ativaccedilatildeo da imunidade inata na insuficiecircncia cardiacuteaca (IC) Os monoacutecitos satildeo populaccedilotildees heterogeacuteneas e compreendem subpopulaccedilotildees com fenoacutetipos distintos que podem ser identificadas pela diferente expressatildeo dos antigeacutenios CD14 e CD16 Este estudo tem como objetivo clarificar os mecanismos de ativaccedilatildeo da imunidade inata em doentes com insuficiecircncia cardiacuteaca croacutenica (ICC) utilizando a imunofenotipagem celular por citometria de fluxo Foi colhido sangue perifeacuterico a 15 doentes com ICC e a 12 controlos saudaacuteveis Estudou-se por citometria de fluxo o fenoacutetipo celular dos monoacutecitos (FSC SSC TLR2 TLR4 CD4 CD11b CD14 CD16 CD36 CD45 CD64 HLA-Dr e IREM-2) dos neutroacutefilos (FSC SSC CD10 CD11b CD13 CD15 CD16 e CD45) e dos linfoacutecitos (CD3 CD4 CD8 CD16 CD19 e CD56) As trecircs subpopulaccedilotildees monociacuteticas identificadas (CD14

+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim

CD16+) apresentaram diferenccedilas fenotiacutepicas dos antigeacutenios celulares

estudados A subpopulaccedilatildeo CD14+CD16

+ foi a que expressou com maior

intensidade vaacuterios antigeacutenios de ativaccedilatildeo e os recetores TLR2 e TLR4 Os doentes com ICC apresentaram um aumento ligeiro da percentagem dos monoacutecitos CD14

+CD16

+ e uma diminuiccedilatildeo dos monoacutecitos CD14

+CD16

- A

subpopulaccedilatildeo CD14dim

CD16+ apresentou uma diminuiccedilatildeo significativa da sua

percentagem com o aumento da gravidade da ICC Na maioria das subpopulaccedilotildees o TLR2 e o TLR4 tiveram uma tendecircncia de aumento da sua expressatildeo nos doentes com ICC do que nos controlos Os monoacutecitos CD14

dimCD16

+ apresentaram uma diminuiccedilatildeo significativa da expressatildeo do

TLR2 nos doentes com ICC relativamente ao grupo controlo A expressatildeo diferencial do TLR2 e do TLR4 nos subtipos de monoacutecitos poderaacute contribuir para o desenvolvimento e progressatildeo da IC A existecircncia de subpopulaccedilotildees monociacuteticas com fenoacutetipos e funccedilotildees distintas poderaacute fornecer informaccedilotildees valiosas da patogeacutenese da IC

Keywords

Innate immunity toll-like receptors heart failure monocytes monocytes subpopulations immunophenotype

Abstract Monocytes play an important role in innate immunity and these are activated by the Toll-like receptores (TLRs) TLRs are able to recognise foreign microorganisms via the innate immune system and these can also be activated by endogenous molecules TLR2 and TLR4 have been associated with activation the innate immunity in heart failure (HF) Monocytes are heterogenous populations which are subdivided into distinct phenotypes and can be identified by the different expression of CD14 and CD16 antigens This studyacutes main objective is to clarify the activation mechanisms of innate immunity in patients with chronic heart failure (CHF) using the cellular immunophenotyping by flow cytometry Peripheral blood was taken from 15 patients with CHF and was used also 12 health controls The cellular phenotypes of the monocytes were studied using flow cytometry (TLR2 TLR4 CD4 CD11b CD14 CD16 CD36 CD45 CD64 HLA-Dr IREM-2 FSC and SSC) in neutrophils (CD10 CD11b CD13 CD15 CD16 CD45 FSC e SSC) and in lymphocytes (CD3 CD4 CD8 CD16 CD19 e CD56) The three monocytic subpopulations identified (CD14

+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim

CD16+) revealed phenotypic differences of the cellular antigens The

CD14+CD16

+ subpopulation expressed greater intensity of several activation

antigens as well TLR2 and TLR4 receptors Patients with CHF showed a slight increase in monocyte percentage CD14

+CD16

+ and a decrease in CD14

+CD16

-

monocytes The CD14dim

CD16+

subpopulation showed a significant decrease of its percentage with increasing severity of CHF In most subpopulations TLR2 and TLR4 had a trend of increased expression in patients with CHF than controls In patients with CHF CD14

dimCD16

+ monocytes showed a significant

decrease in expression of TLR2 than the control group Different expression of TLR2 and TLR4 in the subtypes of monocytes may contribute to the development and progression of HF The existence of monocytic subpopulations with distinct phenotypes and functions can provide valuable information of the pathogenesis of HF

A Imunidade Inata na Insuficiecircncia Cardiacuteaca Papel dos Monoacutecitos

i

Iacutendice

Abreviaturas iv

1 Introduccedilatildeo 1

11 Imunidade inata 3

111 Recetores ldquoToll-likerdquo 4

1111 Vias de sinalizaccedilatildeo do TLR 5

112 Inflamaccedilatildeo 7

113 Modelo de alarme da imunidade inata 9

12 Insuficiecircncia Cardiacuteaca 10

13 Imunidade inata na insuficiecircncia cardiacuteaca 12

131 Expressatildeo dos TLR2 e TLR4 13

14 Caracterizaccedilatildeo fenotiacutepica dos monoacutecitos 14

15 Objetivos 19

2 Material e Meacutetodos 21

21 Participantes 23

22 Obtenccedilatildeo e preparaccedilatildeo das amostras 23

23 Determinaccedilatildeo dos paracircmetros laboratoriais gerais 24

24 Expressatildeo do TLR2 e TLR4 por citometria de fluxo 25

25 Estudo fenotiacutepico dos monoacutecitos linfoacutecitos e neutroacutefilos por citometria de fluxo 26

26 Estatiacutestica 28

3 Resultados 29

31 Caracterizaccedilatildeo da amostra 31

32 Anaacutelise fenotiacutepica dos leucoacutecitos 33

33 Anaacutelise fenotiacutepica dos monoacutecitos 36

34 Anaacutelise da expressatildeo do TLR2 e TLR4 41

35 Anaacutelise fenotiacutepica dos linfoacutecitos 45

36 Anaacutelise fenotiacutepica dos neutroacutefilos 48

4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63

6 Referecircncias Bibliograacuteficas 67

7 Anexos 77


ii

Iacutendice de figuras

Figura 1 ndash Vias de sinalizaccedilatildeo dos diferentes tipos de TLRs 7

Figura 2 ndash A sinalizaccedilatildeo dos TLRs promove a inflamaccedilatildeo 8

Figura 3 ndash Maturaccedilatildeo dos monoacutecitos na medula oacutesssea 16

Figura 4 ndash Paracircmetros analiacuteticos nos doentes com ICC de acordo com a

classe funcional NYHA 32

Figura 5 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da identificaccedilatildeo dos eventos a serem

excluiacutedos da anaacutelise 33

Figura 6 ndash Identificaccedilatildeo das populaccedilotildees leucocitaacuterias numa amostra de sangue

perifeacuterico normal 34

Figura 7 ndash Definiccedilatildeo das subpopulaccedilotildees monociacuteticas (CD14+CD16-

CD14+CD16+ e CD14dimCD16+) no dot-plot CD14 versus CD16 36

Figura 8 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da intensidade de expressatildeo dos marcadores

celulares estudados nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas comparando um

exemplo de um caso tiacutepico do grupo controlo com um caso tiacutepico do grupo de

doentes com ICC 39

Figura 9 ndash Diagramas de caixa apresentado a IMF dos marcadores celulares

nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas no grupo de doentes e no grupo de controlo

41

Figura 10 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da intensidade de expressatildeo dos TLR2 e

TLR4 nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas comparando um exemplo de um caso

tiacutepico do grupo controlo com um caso tiacutepico do grupo de doentes com ICC 43

Figura 11 ndash Diagramas de caixa apresentando a IMF entre o grupo de doentes

e o grupo controlo 44

Figura 12 ndash Diagramas de caixa apresentando a IMF entre os grupos classe

de NYHA I e classe de NYHA IIIII 45

Figura 13 ndash Anaacutelise sequencial para o estudo das populaccedilotildees linfocitaacuterias 46

Figura 14 ndash Anaacutelise dos neutroacutefilos 48


iii

Iacutendice de tabelas

Tabela 1 ndash Classificaccedilatildeo da Insuficiecircncia Cardiacuteaca da New York Heart

Association 12

Tabela 2 ndash Antigeacutenios expressos pelos monoacutecitos com denominaccedilatildeo CD (do

inglecircs cluster of differentiation) 15

Tabela 3 ndash Funccedilotildees das subpopulaccedilotildees monociacuteticas 18

Tabela 4 ndash Painel de anticorpos e respetivos fluorocromos utilizados 27

Tabela 5 ndash Caracteriacutesticas cliacutenicas dos doentes com ICC 31

Tabela 6 ndash Anaacutelise dos tipos de leucoacutecitos nos participantes do estudo 35

Tabela 7 ndash Percentagem das subpopulaccedilotildees monociacuteticas nos grupos de

doentes e controlos 37

Tabela 8 ndash Percentagem das subpopulaccedilotildees monociacuteticas nos doentes com

ICC conforme a classe de NYHA 37

Tabela 9 ndash Anaacutelise comparativa das populaccedilotildees linfocitaacuterias 47

Tabela 10 ndash Anaacutelise comparativa dos paracircmetros celulares estudados nos

neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas

ADN ndash Aacutecido desoxirribonucleico

ARN ndash Aacutecido ribonucleico

APC - Aloficocianina (do inglecircs allophycocyanin)

AP1 - Do inglecircs activator protein 1

BNP - Peacuteptido natriureacutetico do tipo B (do inglecircs B-type natriuretic peptide)

CD - Do inglecircs cluster of differentiation

CHSJ - Centro Hospitalar do Satildeo Joatildeo

DAMPs - Padrotildees moleculares associados ao dano (do inglecircs damage-

associated molecular patterns)

ECM - Matriz extracelular

EDTA-K3 - Aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico-tripotaacutessico

EPICA - Epidemiologia da Insuficiecircncia Cardiacuteaca e Aprendizagem

FSC ndash Do inglecircs Foward Angle Light Scatter

FITC - Isotiocianato de fluoresceiacutena (do inglecircs fluorescein isothiocyanate)

HLA ndash Antigeacutenio leucocitaacuterio humano (do inglecircs human leukocyte antigen)

HSP ndash Proteiacutena choque teacutermico (do inglecircs heat shock protein)

H7 ndash Do inglecircs hilite7

IC - Insuficiecircncia cardiacuteaca

ICC - Insuficiecircncia cardiacuteaca croacutenica

ICA - Insuficiecircncia cardiacuteaca aguda


v

ICAM - Moleacutecula de adesatildeo intracelular (do inglecircs intracellular adhesion

molecule)

IgG - Imunoglobulina G

IKK - Do inglecircs inhibitor of NF-кB (IкB) kinases

IL ndash Interleucina

IRAKs - Do inglecircs IL-1 receptor-associated kinases

IRF3 - Do inglecircs IFN-regulatory factor 3

LPS - Lipopolissacariacutedeo

LBP - Proteiacutena de ligaccedilatildeo ao LPS

MyD88 - Do inglecircs myeloid differentiation primary response protein 88

MALTIRAP - Do inglecircs adaptador My88-likeTIR domain-containing adaptor

protein

MAPK - Do inglecircs mitogen-activated protein kinases

MCP - Proteiacutena quimiotaacutetica de monoacutecitos (do inglecircs monocyte chemotactic

protein)

MMPs - Metaloproteiacutenases da matriz

MHC-II - Complexo major de histocompatibilidade ndash classe II (do inglecircs major

histocompatibility complex- class II)

NK ndash Do inglecircs Natural killer

NF-кB - Fator nuclear kappa B (do inglecircs nuclear factor-кB)

NYHA ndash Do inglecircs New York Heart Association

PPRs - Recetores de reconhecimento de componentes moleculares de

padrotildees claacutessicos (do inglecircs pattern recognition receptor)


vi

PAMPs ndash Padrotildees moleculares associados aos agentes patogeacutenicos (do inglecircs

pathogen-associated molecular patterns)

PerCP-CyTM55 - Proteiacutena Peridinina Clorofila-CianinaTM55 (do inglecircs peridinin

chlorophyll protein-cyaninTM55)

PE - Ficoeritrina (do inglecircs phycoerythrin)

PC7 - Ficoeritrina cianina 7 (do inglecircs phycoerythrin cyanin 7)

ROS - Espeacutecies reativas de oxigeacutenio (do inglecircs reactive oxygen species)

RIP1 - Do inglecircs receptor-interacting protein 1

SSC ndash Do inglecircs Side Angle Light Scatter

SPSS ndash Do inglecircs Statistical Package for Social Sciences

TLRs - Recetores ldquoToll-like (do inglecircs Toll-like receptors)

TIR - Do inglecircs TollIL-1 Receptor

TRIF - Do inglecircs TIR-domain-containing adaptor inducing interferon b

TRAM - Do inglecircs TRIF-related adaptor molecule

TAK1 - Do inglecircs transforming growth factor-β-activated kinase 1

TRAF6 - Do inglecircs tumour-necrosis factor-receptor-associated factor 6

TNF-α - Fator de necrose tumoral-α

TA - Temperatura ambiente

VIH - Viacuterus da imunodeficiecircncia humana

VCAM - Moleacutecula de adesatildeo celular vascular (do inglecircs vascular cell adhesion

molecule)

1 Introduccedilatildeo


3


O sistema imunoloacutegico compreende todos os mecanismos de defesa

que um organismo dispotildee para se proteger de micro-organismos ou de

macromoleacuteculas (proteiacutenas ou polissacariacutedeos) que lhe sejam estranhos Este

sistema divide-se em dois tipos de respostas inter-relacionadas e

funcionalmente definidas a resposta imunoloacutegica inata com uma especificidade

de largo espectro e a resposta imunoloacutegica adaptativa com especificidade

restrita (12)

11 Imunidade inata

A imunidade inata eacute a primeira linha de defesa do nosso organismo

contra infeccedilotildees e a sua ativaccedilatildeo estimula a resposta imunoloacutegica adaptativa

(13) Enquanto a imunidade adaptativa assenta em respostas antigeacutenio-

especiacuteficas com potencial para a memoacuteria imunoloacutegica a resposta imunoloacutegica

inata eacute imediata e similar contra uma grande variedade de agentes

patogeacutenicos natildeo possuindo memoacuteria imunoloacutegica Este tipo de imunidade

caracteriza-se pela sua curta duraccedilatildeo natildeo requerendo uma exposiccedilatildeo preacutevia

ao agente infecioso nem se alterando mediante exposiccedilatildeo imunoloacutegica

repetida ao mesmo agente infecioso (23)

Os primeiros mecanismos de defesa inata do hospedeiro consistem num

conjunto de barreiras fiacutesicas e quiacutemicas representadas pela pele e mucosas e

pelas substacircncias antimicrobianas produzidas nesses locais Havendo

passagem do micro-organismo atraveacutes destas barreiras inicia-se um conjunto

de eventos com o objetivo de eliminar o micro-organismo invasor Assim a

maioria das accedilotildees da resposta imunoloacutegica compreendem a fagocitose

mediada pelo complemento de agentes patogeacutenicos a produccedilatildeo de

mediadores e citocinas para recrutar novas ceacutelulas fagociacuteticas a secreccedilatildeo de

interferatildeo com a finalidade de induzir respostas no hospedeiro e a ativaccedilatildeo das

ceacutelulas ldquonatural killerrdquo (NK) (124)

Para impedir a entrada de micro-organismos infeciosos o sistema

imunoloacutegico inato desenvolveu uma seacuterie de recetores de reconhecimento de


4

componentes moleculares de padrotildees claacutessicos (PPRs do inglecircs pattern

recognition receptors) que tecircm a capacidade de reconhecer estruturas

moleculares conservadas e produzidas pelos agentes patogeacutenicos (PAMPs do

inglecircs pathogen-associated molecular patterns) nomeadamente liacutepidos

lipoproteiacutenas proteiacutenas e aacutecidos nucleicos Os PAMPs satildeo partilhados por

grupos de agentes patogeacutenicos mas ao mesmo tempo natildeo estatildeo presentes no

hospedeiro permitindo ao sistema imunoloacutegico inato distinguir moleacuteculas

proacuteprias de estruturas natildeo especiacuteficas associadas aos mesmos (56)

[Exemplos tiacutepicos de PAMPs no anexo 1]

111 Recetores ldquoToll-likerdquo

Os recetores ldquoToll-likerdquo (TLRs do inglecircs Toll-like receptors) satildeo um

exemplo de PPRs e compreendem uma famiacutelia de recetores de proteiacutenas

presentes nas ceacutelulas fagociacuteticas (neutroacutefilos ceacutelulas dendriacuteticas monoacutecitos e

macroacutefagos) bem como por outros tipos de ceacutelulas (ceacutelulas epiteliais

fibroblastos etc) (78) Estes recetores satildeo o principal mecanismo pelo qual o

hospedeiro reconhecendo os seus PAMPs deteta que haacute um microinvasor

presente Nos mamiacuteferos os recetores ldquoToll-likerdquo satildeo homoacutelogos dos recetores

ldquoTollrdquo da Drosophila tendo sido identificados 13 tipos de TLRs que reconhecem

PAMPs distintos Estes recetores dividem-se em dois grupos de recetores de

membrana os TLRs 1 2 4 5 6 10 12 13 e os TLRs 3 7 8 9 localizados

respetivamente na membrana da superfiacutecie celular e na membrana

endossoacutemica (19)

Os TLRs ativados vatildeo controlar a iniciaccedilatildeo manutenccedilatildeo e finalizaccedilatildeo da

defesa inata do hospedeiro A ativaccedilatildeo do TLR induz a produccedilatildeo de citocinas

proinflamatorias (fator de necrose tumoral-α (TNF-α) a interleucina-1 (IL-1) e a

IL-6) e moleacuteculas antimicrobianas que ativam componentes da imunidade

celular Estes tambeacutem induzem a expressatildeo de moleacuteculas coestimuladoras nas

ceacutelulas dendriacuteticas essenciais para a ativaccedilatildeo da resposta imunoloacutegica

adaptativa (91214)

Os TLRs satildeo proteiacutenas transmembranares que conteacutem domiacutenios

extracelulares compostos por regiotildees ricas em leucina que interagem com os


5

PAMPs e uma porccedilatildeo intracelular com um domiacutenio TIR (do inglecircs TollIL-1

Receptor) que eacute um moacutedulo conservado de sinalizaccedilatildeo intracelular (110)

1111 Vias de sinalizaccedilatildeo do TLR

Os diferentes tipos de TLRs reagem com PAMPs especiacuteficos ativando

assim vias de sinalizaccedilatildeo especiacuteficas e conduzindo a respostas

antimicrobianas distintas (1112) A via de sinalizaccedilatildeo que eacute utilizada depende

em grande parte de moleacuteculas adaptadoras citoplasmaacuteticas que estatildeo

presentes para se associarem ao domiacutenio intracitoplasmaacutetico do TLR A MyD88

(do inglecircs myeloid differentiation primary response protein 88) eacute a moleacutecula

adaptadora mais utilizada pelos TLRs podendo-se associar a todos os tipos de

TLR exceto ao TLR3 Outras moleacuteculas adaptadoras utilizadas na cascata de

sinalizaccedilatildeo do TLR incluem a MALTIRAP (do inglecircs adaptador My88-likeTIR

domain-containing adaptor protein) TRIF (do inglecircs TIR-domain-containing

adaptor inducing interferon b) e a TRAM (do inglecircs TRIF-related adaptor

molecule) (11314) A existecircncia de diferentes tipos de moleacuteculas adaptadoras

que contecircm o domiacutenio TIR revelou diferenccedilas nas vias de transduccedilatildeo do sinal

de cada um dos TLRs (12)

A ligaccedilatildeo de um PAMP ao respetivo TLR provoca uma alteraccedilatildeo

conformacional deste iniciando uma cascata de sinalizaccedilatildeo intracelular

culminando no desenvolvimento de uma resposta imunoloacutegica (1)

As vias de sinalizaccedilatildeo dos TLRs podem ser divididas em dependentes

da MyD88 e independentes da MyD88 (figura 1) (9)

Via dependente da MYD88

Todos os TLRs ateacute agora caracterizados com a exceccedilatildeo do TLR3

utilizam a via dependente da proteiacutena adaptadora MyD88 A via dependente da

MyD88 atraveacutes dos TLRs 1 2 4 e 6 requer ainda a proteiacutena adaptadora TIRAP

para iniciar o processo de sinalizaccedilatildeo A estimulaccedilatildeo do TLR por um ligando

recruta a MyD88 ateacute ao recetor atraveacutes do seu domiacutenio TIR que interage com

o domiacutenio TIR do TLR Esta ligaccedilatildeo provoca o recrutamento sequencial da


6

famiacutelia de quinases as IRAKs (do inglecircs IL-1 receptor-associated kinases) 4 1

e 2 A fosforilaccedilatildeo da IRAK1 pela IRAK4 resulta no recrutamento da TRAF6 (do

inglecircs tumour-necrosis factor-receptor-associated factor 6) resultando em duas

vias de sinalizaccedilatildeo uma leva agrave ativaccedilatildeo dos fatores de transcriccedilatildeo AP1 (do

inglecircs activator protein 1) atraveacutes da ativaccedilatildeo do MAPK (do inglecircs mitogen-

activated protein kinases) a outra ativa o TAK1 (do inglecircs transforming growth

factor-β-activated kinase 1) potenciando a atividade do complexo IKK (do inglecircs

inhibitor of NF-кB (IкB) kinases) que quando ativado induz a fosforilaccedilatildeo e

degradaccedilatildeo subsequente de IkappaB ocorrendo a formaccedilatildeo do NF-кB (do

inglecircs nuclear factor-кB) O NF-kB desloca-se do citoplasma para o nuacutecleo da

ceacutelula e aiacute induz a transcriccedilatildeo de diferentes genes requeridos para a resposta

inflamatoacuteria (91415)

Via independente da MyD88

Esta via envolve as moleacuteculas adaptadoras TRIF ou TRAM Os TLR3 e

TLR4 iniciam a via dependente de TRIF para induzir a produccedilatildeo de citocinas e

interferatildeo tipo I A via dependente de TRIF ativa o NF-кB atraveacutes de duas vias

independentes numa delas o domiacutenio terminal N da TRIF interage com a

TRAF6 na outra via atraveacutes do domiacutenio terminal C da TRIF interage com RIP1

(do inglecircs receptor-interacting protein 1) e ativa a TAK1 A via dependente da

TRIF tambeacutem induz a siacutentese do interferatildeo β (IFN-β) atraveacutes do IRF3 (do inglecircs

IFN-regulatory factor 3) O IRF3 eacute fosforilado e ativado pelas quinases IKK -

TBK1 e IKKi - levando agrave produccedilatildeo de interferotildees e moleacuteculas coestimulatoacuterias

A TRAF3 atua como uma ponte entre a TRIF e TBK1 (91415)


7

Figura 1 ndash Vias de sinalizaccedilatildeo dos diferentes tipos de TLRs Figura adaptada de

Kumar et al (15)

112 Inflamaccedilatildeo

A principal funccedilatildeo dos TLRs consiste na iniciaccedilatildeo da resposta

imunoloacutegica inata e a inflamaccedilatildeo eacute o ponto chave desta resposta A inflamaccedilatildeo

eacute um mecanismo de defesa do organismo contra agressotildees e propicia a

acumulaccedilatildeo e a ativaccedilatildeo de ceacutelulas fagociacuteticas no local da lesatildeo o que

contribui para a eliminaccedilatildeo do agente inflamatoacuterio Eacute tambeacutem essencial para a

reparaccedilatildeo dos tecidos e para o estabelecimento da imunidade especiacutefica

(313)

Os principais tipos de ceacutelulas fagociacuteticas satildeo os neutroacutefilos monoacutecitos e

macroacutefagos Os primeiros circulam no sangue perifeacuterico mas a maior parte

(cerca de 90) encontra-se marginada ao longo do revestimento endotelial dos

vasos Os monoacutecitos correspondem a 5-10 dos leucoacutecitos que circulam no

sangue perifeacuterico onde permanecem entre 1 a 3 dias Numa fase posterior


8

migram para os tecidos e datildeo origem a diferentes tipos de macroacutefagos e

ceacutelulas dendriacuteticas (16-18)

A ativaccedilatildeo dos TLRs induz os macroacutefagos a produzirem citocinas

inflamatoacuterias Estas atuam nas ceacutelulas imunoloacutegicas atraveacutes da sua ligaccedilatildeo a

recetores especiacuteficos na superfiacutecie celular provocando efeitos locais e

sisteacutemicos Estas vatildeo promover a inflamaccedilatildeo no local da infeccedilatildeo devido ao

aumento da permeabilidade vascular provocando o fluxo de ceacutelulas fagociacuteticas

e moleacuteculas plasmaacuteticas para o foco inflamatoacuterio As ceacutelulas fagociacuteticas aderem

agrave superfiacutecie do endoteacutelio vascular e migram para o local da inflamaccedilatildeo por

diapedese Esta migraccedilatildeo eacute facilitada pela existecircncia ou pelo aparecimento de

moleacuteculas de adesatildeo celular tanto nas ceacutelulas fagociacuteticas como nas ceacutelulas

endoteliais induzidas por fatores gerados no local da inflamaccedilatildeo As citocinas

tambeacutem induzem as ceacutelulas fagociacuteticas a libertarem peacuteptidos antimicrobianos

pequenas moleacuteculas como leucotrienos (mediadores lipiacutedicos da inflamaccedilatildeo) e

espeacutecies reativas de oxigeacutenio (ROS do inglecircs reactive oxygen species) (figura

2) Atuando em locais distantes do siacutetio da infeccedilatildeo as citocinas tambeacutem

medeiam efeitos sisteacutemicos como a produccedilatildeo de proteiacutenas de fase aguda pelo

fiacutegado a febre a leucocitose e a vasodilataccedilatildeo generalizada (2713)

Figura 2 ndash A sinalizaccedilatildeo dos TLRs promove a inflamaccedilatildeo Figura adaptada de

Moresco et al (13)


9

Os macroacutefagos para aleacutem de produzirem citocinas fagocitam e

destroem os micro-organismos estranhos e removem os restos celulares e

resiacuteduos provenientes de tecidos lesados sendo essenciais para a reparaccedilatildeo

tecidual Como ceacutelulas apresentadoras de antigeacutenios os macroacutefagos

processam e apresentam os antigeacutenios aos linfoacutecitos T com a finalidade de

ativar uma resposta imunoloacutegica adaptativa apropriada Apoacutes a fagocitose haacute

um aumento do consumo de oxigeacutenio e ativaccedilatildeo de enzimas que promovem a

produccedilatildeo de compostos de oxigeacutenio reativos vaacuterios intermediaacuterios e os

radicais livres que medeiam a destruiccedilatildeo dos micro-organismos invasores (13)

Em alguns casos o processo inflamatoacuterio agudo natildeo eacute completamente

resolvido levando a uma inflamaccedilatildeo croacutenica A causa baacutesica da inflamaccedilatildeo

croacutenica eacute a persistecircncia do fator etioloacutegico seja o agente infecioso ou entatildeo

restos de micro-organismos corpos estranhos ou produtos de metabolismo

Este tipo de inflamaccedilatildeo acontece quando os macroacutefagos e os linfoacutecitos T satildeo

constantemente ativados levando agrave sua acumulaccedilatildeo nos siacutetios da inflamaccedilatildeo

provocando uma lesatildeo tecidual As citocinas libertadas pelos macroacutefagos

cronicamente ativados estimulam a proliferaccedilatildeo de fibroblastos levando ao

aumento da produccedilatildeo de colageacutenio que culmina na fibrose caracteriacutestica das

inflamaccedilotildees croacutenicas (3)

113 Modelo de alarme da imunidade inata

Estudos recentes sugerem que o sistema imunoloacutegico inato reconhece

sinais de ldquoperigordquo endoacutegenos designados por padrotildees moleculares associados

ao dano (DAMPs do inglecircs damage-associated molecular patterns) O modelo

de alarme da imunidade sugerido por Matzinger propotildee que a presenccedila de

PAMPs natildeo ativa necessariamente uma resposta imunoloacutegica a natildeo ser que

exista uma lesatildeo tecidual no hospedeiro (91419) Este modelo defende que o

sistema imunoloacutegico eacute ativado por sinais de ldquodanordquo ou ldquoalarmerdquo endoacutegenos

originados por ceacutelulas mortas danificadas ou sujeitas a stress que satildeo

reconhecidos pelos TLRs da imunidade inata mesmo na ausecircncia de uma

infeccedilatildeo (2021)

Os DAMPs correspondem a mudanccedilas nas porccedilotildees lipiacutedicas gluciacutedicas


10

que se expressam na superfiacutecie celular ou ainda pela presenccedila de proteiacutenas

normalmente inexistentes na membrana celular externa (19) Como exemplos

destas moleacuteculas (anexo 1) referem-se o aacutecido uacuterico cristalino as proteiacutenas de

choque teacutermico 60 70 e 96 (produtos de ceacutelulas sujeitas a stress) os

fragmentos de aacutecido hialuroacutenico e a fibronectina (produtos de lesatildeo tecidual)

(202223)

O reconhecimento e ativaccedilatildeo dos TLRs por moleacuteculas derivadas de uma

lesatildeo tecidual podem ser uma importante explicaccedilatildeo para a compreensatildeo da

relaccedilatildeo entre a imunidade inata e as doenccedilas cardiovasculares Trabalhos

recentes indicam que os TLRs tecircm um papel importante no desenvolvimento e

progressatildeo da insuficiecircncia cardiacuteaca (924)

12 Insuficiecircncia Cardiacuteaca

A insuficiecircncia cardiacuteaca (IC) eacute um dos principais problemas de sauacutede

puacuteblica para a maioria dos paiacuteses desenvolvidos tendo um grande impacto

socioeconoacutemico relacionado sobretudo com os gastos em hospitalizaccedilatildeo

medicamentaccedilatildeo e meios de intervenccedilatildeo mas tambeacutem por estarem impliacutecitas

consequecircncias indiretas como a reduccedilatildeo da qualidade de vida e a perda de

produtividade (2526)

O envelhecimento das populaccedilotildees e o prolongamento da esperanccedila

meacutedia de vida dos doentes cardiacuteacos pelas modernas inovaccedilotildees terapecircuticas

levou a um aumento da prevalecircncia de IC (2728) De acordo com o estudo

portuguecircs Epidemiologia da Insuficiecircncia Cardiacuteaca e Aprendizagem (EPICA)

(29) a prevalecircncia de IC eacute de 436 Neste estudo a prevalecircncia de IC

aumenta abruptamente com a idade sendo 136 em indiviacuteduos com idades

compreendidas entre os 25-49 anos e atingindo os 1614 em indiviacuteduos com

mais de 80 anos

Apesar da melhoria na terapecircutica a taxa de mortalidade em doentes

com IC permanece elevada excedendo 50 aos 5 anos (2730) Segundo

estudos europeus 40 dos doentes internados no hospital com IC morrem ou

satildeo readmitidos ao fim de 1 ano (28)


11

A IC eacute uma patologia que ocorre em indiviacuteduos que devido a alguma

anomalia herdada ou adquirida na estrutura eou funccedilatildeo cardiacuteaca prejudica o

funcionamento fisioloacutegico do coraccedilatildeo enquanto suporte da circulaccedilatildeo (3132)

Segundo as normas de orientaccedilatildeo da Sociedade Europeia de

Cardiologia de 2012 (31) a IC eacute definida a niacutevel cliacutenico como uma siacutendrome

que ocorre em indiviacuteduos com sintomas tiacutepicos de IC (como por exemplo

dispneia edema dos tornozelos fadiga) e sinais resultantes de uma anomalia

da estrutura ou da funccedilatildeo cardiacuteaca (aumento da pressatildeo venosa jugular

crepitaccedilotildees pulmonares alteraccedilatildeo do batimento cardiacuteaco no apex)

A doenccedila arterial coronaacuteria eacute a causa mais frequente subjacente agrave IC

afetando cerca de dois terccedilos dos doentes com esta patologia Os restantes

natildeo tecircm uma causa isqueacutemica de disfunccedilatildeo cardiacuteaca podendo ter uma causa

identificada (por exemplo hipertensatildeo arterial diabetes mellitus doenccedila

valvular toxinas do miocaacuterdio ou miocardite) ou natildeo ter nenhuma causa

discerniacutevel (por exemplo cardiomiopatia dilatada idiopaacutetica) (3334)

A insuficiecircncia cardiacuteaca croacutenica (ICC) eacute um estado patoloacutegico

progressivo com sintomas cliacutenicos persistentes Embora menos comum do que

a ICC os doentes podem desenvolver insuficiecircncia cardiacuteaca aguda (ICA) Esta

eacute definida como um iniacutecio raacutepido ou uma mudanccedila cliacutenica dos sinais e sintomas

de IC resultando numa necessidade urgente de tratamento A ICA pode ser um

acontecimento inicial e suacutebito de insuficiecircncia ou uma descompensaccedilatildeo de ICC

(35)

A New York Heart Association (NYHA) classificou a IC em 4 classes de

acordo com a intensidade dos sintomas e a capacidade fiacutesica dos doentes

(tabela 1) Esta classificaccedilatildeo aleacutem de possuir um caraacuteter funcional eacute tambeacutem

uma maneira de avaliar a qualidade de vida do doente relativamente agrave sua

doenccedila (2832)


12

Tabela 1 ndash Classificaccedilatildeo da Insuficiecircncia Cardiacuteaca da New York Heart Association

Classe I Nenhuma limitaccedilatildeo da atividade fiacutesica As atividades fiacutesicas

quotidianas natildeo causam fadiga palpitaccedilotildees ou dispneia

Classe II Limitaccedilatildeo ligeira da atividade fiacutesica Assintomaacutetico em repouso

mas as atividades fiacutesicas quotidianas causam fadiga palpitaccedilotildees ou dispneia

Classe III Limitaccedilatildeo acentuada da atividade fiacutesica Assintomaacutetico em

repouso mas sintomaacutetico para pequenos esforccedilos

Classe IV Sintomaacutetico em repouso com agravamento dos sintomas para o

miacutenimo esforccedilo

Tabela adaptada e traduzida de Dickstein et al (28)

13 Imunidade inata na insuficiecircncia cardiacuteaca

Na uacuteltima deacutecada o papel do sistema imunoloacutegico inato em muitos

processos fisiopatoloacutegicos do coraccedilatildeo tem suscitado uma consideraacutevel atenccedilatildeo

pela comunidade cientiacutefica (1436)

O tecido miocaacuterdico dos mamiacuteferos possui um sistema imunoloacutegico inato

funcional Em resposta a diferentes formas de lesatildeo tecidual os mioacutecitos

cardiacuteacos desencadeiam uma resposta imunoloacutegica inata pela produccedilatildeo de

mediadores e efetores incluindo citocinas proacute-inflamatoacuterias oacutexido niacutetrico e

quimocinas com a finalidade de preservar a homeostasia cardiacuteaca (5622)

Os TLRs aleacutem de serem expressos nas ceacutelulas imunoloacutegicas satildeo

tambeacutem expressos noutros tecidos nomeadamente ao niacutevel do sistema

cardiovascular podendo funcionar como uma ligaccedilatildeo importante entre o

desenvolvimento de doenccedila cardiovascular e o sistema imunoloacutegico A

acrescentar a esse facto existe a evidecircncia de que a ativaccedilatildeo dos TLRs

contribui para o desenvolvimento e progressatildeo da arteriosclerose da disfunccedilatildeo

cardiacuteaca na sepsis na diminuiccedilatildeo da contractilidade e na IC (22)

Vaacuterios estudos efetuados em humanos e animais com IC concluiacuteram que

o sistema imunoloacutegico se encontrava ativado apesar de natildeo existir evidecircncia

de um agente patogeacutenico na sua etiologia A ativaccedilatildeo deste sistema estava

associada agrave progressatildeo desfavoraacutevel da IC (1936) A ativaccedilatildeo dos TLRs a


13

curto prazo conferiu uma resposta protetora ao coraccedilatildeo Por outro lado a sua

ativaccedilatildeo prolongada resultou na produccedilatildeo exagerada de citocinas proacute-

inflamatoacuterias e moleacuteculas de adesatildeo celular que levaram ao recrutamento de

neutroacutefilos monoacutecitos e ceacutelulas dendriacuteticas para o miocaacuterdio aumentando a

morte celular e resultando numa reparaccedilatildeo cardiacuteaca adversa (2037)

131 Expressatildeo dos TLR2 e TLR4

Vaacuterios estudos realizados constataram que nos doentes com enfarte do

miocaacuterdio a sinalizaccedilatildeo do TLR se encontrava ativada e havia um aumento da

produccedilatildeo de citocinas A expressatildeo do TLR4 em monoacutecitos perifeacutericos

encontrava-se tambeacutem aumentada estando relacionada com a gravidade da

patologia (3839) Frantz et al (9) observaram que o mesmo acontecia em

humanos e animais com IC e que o padratildeo de expressatildeo do TLR4 se

encontrava alterado Assim em doentes com IC o tecido miocaacuterdico

apresentava uma intensa expressatildeo de TLR4 em determinadas aacutereas focais

contrastando com o tecido miocaacuterdico normal cujo padratildeo de expressatildeo do

TLR4 era difuso indicando assim um maior recrutamento de monoacutecitos para

aacutereas do miocaacuterdio em processo de remodelaccedilatildeo (9142039)

Outras investigaccedilotildees estudaram o papel do TLR4 na lesatildeo de

reperfusatildeo miocaacuterdica nas quais constataram que a administraccedilatildeo de

pequenas doses de LPS (lipopolissacariacutedeo) ou monofosforil lipiacutedico A

(derivado da parede celular bacteriana de bacteacuterias Gram-negativas) protegeu

o miocaacuterdio contra posterior isquemia e lesatildeo de reperfusatildeo Poreacutem a

administraccedilatildeo de LPS em altas doses provocou uma diminuiccedilatildeo da funccedilatildeo

miocaacuterdica e este efeito foi dependente da sinalizaccedilatildeo mediada pelo TLR4

(1420)

Para compreender o papel do TLR4 no enfarte do miocaacuterdio e na

inflamaccedilatildeo apoacutes um periacuteodo de isquemia-reperfusatildeo Oyama et al (41)

utilizaram ratos deficientes em TLR4 e verificaram que estes em comparaccedilatildeo

com ratos normais tiveram enfartes em menor grau e uma atenuaccedilatildeo da

inflamaccedilatildeo relacionada com a lesatildeo Similarmente ratos preacute-tratados com um

antagonista de TLR4 (Eritoran) sofreram enfartes com menor extensatildeo e de

uma diminuiccedilatildeo da resposta inflamatoacuteria do fator nuclear-кB (NF-кB) e da

expressatildeo de mediadores inflamatoacuterios quando comparados com ratos


14

normais (40) Estes estudos concluiacuteram assim que o TLR4 estava envolvido na

resposta inflamatoacuteria a uma lesatildeo tecidual isqueacutemica (4041)

O potencial papel do TLR2 na resposta ao stress oxidativo foi

demonstrado em mioacutecitos cardiacuteacos de ratos receacutem-nascidos O bloqueio da

funccedilatildeo do TLR2 inibiu a produccedilatildeo de peroacutexido de hidrogeacutenio induzida pelo NF-

кB e diminuiu os seus efeitos toacutexicos (1419)

No sentido de esclarecer o papel do TLR2 na remodelaccedilatildeo ventricular

apoacutes um enfarte do miocaacuterdio Shishido et al (42) observaram que os ratos

deficientes para o TLR2 apresentaram um aumento da taxa de sobrevivecircncia e

a funccedilatildeo cardiacuteaca estava mais preservada do que os ratos normais

Verificaram tambeacutem uma atenuaccedilatildeo da fibrose miocaacuterdica nas aacutereas natildeo

afetadas pelo enfarte atraveacutes da diminuiccedilatildeo da expressatildeo do fator de

crescimento transformante-β1 e do colageacutenio ambos envolvidos neste tipo de

fibrose Este estudo comprovou que a remodelaccedilatildeo ventricular apoacutes enfarte do

miocaacuterdio ocorreu atraveacutes da via de sinalizaccedilatildeo dependente do TLR2 (42)

14 Caracterizaccedilatildeo fenotiacutepica dos monoacutecitos

Os monoacutecitos pertencem ao sistema fagociacutetico mononuclear que

juntamente com os macroacutefagos desempenham um papel importante na defesa

imunoloacutegica na inflamaccedilatildeo e na remodelaccedilatildeo tecidual atraveacutes da sua

capacidade para o processamento e apresentaccedilatildeo de antigeacutenios fagocitose de

agentes patogeacutenicos e produccedilatildeo de citocinas (183943)

Os monoacutecitos possuem na sua superfiacutecie celular recetores que podem

ser caracterizados pela ligaccedilatildeo a anticorpos monoclonais especiacuteficos atraveacutes

da teacutecnica de citometria de fluxo Estes recetores satildeo marcadores da sua

linhagem crescimento diferenciaccedilatildeo ativaccedilatildeo reconhecimento migraccedilatildeo e da

sua funccedilatildeo (8) Os antigeacutenios expressos pelos monoacutecitos encontram-se

sumariados na tabela 2


15

Tabela 2 ndash Antigeacutenios expressos pelos monoacutecitos com denominaccedilatildeo CD (do inglecircs

cluster of differentiation)

Abreviaturas IgG imunoglobulina G LBP proteiacutena de ligaccedilatildeo ao LPS LPS lipopolissacariacutedeo MHC-II complexo major de histocompatibilidade ndash classe II VIH viacuterus da imunodeficiecircncia humana Tabela adaptada e traduzida de OrsquoGorman amp Donnenberg (8)

Os monoacutecitos satildeo produzidos na medula oacutessea a partir de um progenitor

mieloide comum (16) A maturaccedilatildeo da linhagem monociacutetica processa-se em

trecircs estadios baseados na expressatildeo de antigeacutenios na sua superfiacutecie celular

(figura 3) O primeiro estadio (monoblasto) eacute identificado pela expressatildeo

intermeacutedia de CD45 pela expressatildeo de CD34 e CD117 Neste estadio tambeacutem

comeccedilam a ser expressos o CD64 CD36 (baixa expressatildeo) e HLA-Dr

Moleacutecula CD

Expressatildeo celular Funccedilatildeo

CD4 Linfoacutecitos T auxiliares monoacutecitos macroacutefagos e subpopulaccedilatildeo de

timoacutecitos

Ativaccedilatildeo dos linfoacutecitos T diferenciaccedilatildeo tiacutemica recetor do VIH

CD11b Monoacutecitos macroacutefagos

granuloacutecitos ceacutelulas NK e ceacutelulas dendriacuteticas

Adesatildeo quimiotaxia apoptose

CD14 Monoacutecitos macroacutefagos e ceacutelulas

Langerhans Recetor para o complexo de LPS e

LBP resposta imunoloacutegica inata

CD16 Granuloacutecitos macroacutefagos

monoacutecitos e ceacutelulas NK

Transduccedilatildeo do sinal ativaccedilatildeo das ceacutelulas NK e citotoxicidade celular

dependente de anticorpo

CD36 Monoacutecitos macrofaacutegos

plaquetas precursores eritroides e ceacutelulas endoteliais

Recetor scavenger adesatildeo e fagocitose

CD45 Leucoacutecitos Ativaccedilatildeo e sinalizaccedilatildeo

CD64 Monoacutecitos macroacutefagos ceacutelulas

dendriacuteticas e neutroacutefilos ativados

Recetor de alta afinidade para a IgG fagocitose citotoxicidade celular

dependente de anticorpo e captura de antigeacutenios

HLA-Dr

Linfoacutecitos B monoacutecitos macroacutefagos linfoacutecitos T ativados

ceacutelulas NK ativadas e ceacutelulas progenitoras

Reconhece o MHC-II e apresenta antigeacutenios peptiacutedicos aos linfoacutecitos T

auxiliares

IREM-2 Monoacutecitos e ceacutelulas dendriacuteticas

mieloides Recetor de ativaccedilatildeo atraveacutes da

interaccedilatildeo com a DAP12


16

mantendo-se este durante a restante maturaccedilatildeo dos monoacutecitos A progressatildeo

de monoblasto para promonoacutecito eacute marcada pelo desaparecimento de CD34 ndash

que perde a expressatildeo ainda como monoblasto ndash mantendo as ceacutelulas niacuteveis

intermeacutedios de CD45 Este estadio eacute ainda caracterizado pela expressatildeo alta

de CD64 intermeacutedia de CD36 pelo iniacutecio de expressatildeo de CD11b e pela

ausecircncia ou baixa expressatildeo de CD14 O aumento da expressatildeo do CD45 e do

CD14 e o aparecimento de IREM-2 identificam o estadio de monoacutecito (4445)

Figura 3 ndash Maturaccedilatildeo dos monoacutecitos na medula oacutesssea Figura adaptada e acedida do grupo de Orfatildeo (46)

Numerosos trabalhos efetuados verificaram que os monoacutecitos satildeo uma

populaccedilatildeo heterogeacutenea A identificaccedilatildeo de uma grande variedade de

marcadores celulares e das suas funccedilotildees permitiram a distinccedilatildeo fenotiacutepica e

funcional de subconjuntos monociacuteticos (1639)

Nos uacuteltimos 25 anos estudos realizados nos monoacutecitos humanos

observaram que estes podiam ser agrupados em 2 subconjuntos de acordo

com a expressatildeo de dois antigeacutenios o CD14 (faz parte do recetor para o LPS)

e o CD16 (recetor FcγIII) O subconjunto dominante representava 85 dos

monoacutecitos e expressava fortemente o CD14 (CD14+) sendo negativo para o

CD16 (CD16-) enquanto o subconjunto minoritaacuterio expressava o CD14 mais

fracamente (CD14dim) mas possuiacutea uma alta expressatildeo de CD16 (CD16+)

(4748) Os monoacutecitos CD14+CD16- foram designados de ldquoclaacutessicosrdquo porque o


17

fenoacutetipo apresentado correspondia agrave sua descriccedilatildeo original ao passo que a

subpopulaccedilatildeo monociacutetica CD14dimCD16+ foi designada como ldquonatildeo claacutessicardquo ou

ldquoproacute-inflamatoacuteriardquo (16)

Estudos funcionais realizados nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas

verificaram que os monoacutecitos CD14+CD16- expressavam altos niacuteveis do recetor

de quimiocina CCR2 baixos niacuteveis de CX3CR1 e produziam ROS

Contrastando com este subconjunto os monoacutecitos CD16+ expressavam niacuteveis

elevados de CX3CR1 e baixos niacuteveis de CCR2 natildeo produziam ROS e

possuiacuteam uma menor capacidade fagocitaacuteria que os monoacutecitos CD14+CD16-

(49-51)

Um novo subconjunto de monoacutecitos foi posteriormente encontrado em

investigaccedilotildees nas quais constataram que os monoacutecitos CD16+ podiam ser

divididos em duas populaccedilotildees com funccedilotildees distintas de acordo com a

expressatildeo diferencial de CD14 uma populaccedilatildeo (5 dos monoacutecitos) com uma

intensidade elevada de expressatildeo de CD14 (CD14+CD16+) designada de

intermeacutedia e uma outra populaccedilatildeo (10 dos monoacutecitos) com uma expressatildeo

mais fraca de CD14 (CD14dimCD16+) que foi designada de natildeo-claacutessica

(17495152) Os monoacutecitos CD14+CD16+ expressavam os recetores Fc CD64

e CD32 e possuiacuteam atividade fagocitaacuteria Jaacute os monoacutecitos CD14dimCD16+ natildeo

expressavam os recetores de Fc e a capacidade fagocitaacuteria era fraca

(171849) Esta subpopulaccedilatildeo foi encontrada expandida em respostas

inflamatoacuterias e infeciosas como na sepsis na infeccedilatildeo pelo viacuterus de

imunodeficiecircncia humana e na tuberculose (1753) Por sua vez os monoacutecitos

CD14+CD16+ tambeacutem estavam aumentados em receacutem-nascidos com sepsis

na arteriosclerose na artrite reumatoide e na asma grave (1754)

Na tabela 3 encontram-se representadas as subpopulaccedilotildees monociacuteticas

e as suas funccedilotildees


18

Tabela 3 ndash Funccedilotildees das subpopulaccedilotildees monociacuteticas

CD14+CD16- CD14+CD16+ CD14dimCD16+

Funccedilatildeo

Fagocitose remoccedilatildeo de restos

celulares libertaccedilatildeo de MMPs para a remodelaccedilatildeo da

ECM produccedilatildeo de citocinas libertaccedilatildeo

de ROS

Angiogeacutenese produccedilatildeo de citocinas anti-inflamatoacuterias (IL-

10)

Deposiccedilatildeo de colageacutenio reparaccedilatildeo

efeitos anti-inflamatoacuterios

Atividade fagocitaacuteria

Alta Alta Baixa

Produccedilatildeo de citocinas

estimulada pelo LPS

Produccedilatildeo de TNF-α IL-6 e IL-1

Produccedilatildeo semelhante de TNF-α aos

monoacutecitos CD14+CD16-

Produccedilatildeo aumentada de IL-10

Sem efeitos na produccedilatildeo de citocinas

proacute-inflamatoacuterias

Produccedilatildeo baixa de IL-10

Moleacuteculas de adesatildeo

Expressatildeo intermeacutedia de ICAM-

1 e VCAM-1

Alta expressatildeo do recetor ICAM-1 de

moleacuteculas de adesatildeo e aumento da

aderecircncia endotelial do monoacutecito

Alta expressatildeo do recetor VCAM-1

Recetores de quimocinas

Mobilizaccedilatildeo (via recetor CCR2) ao

ligando MCP-1

Mobilizaccedilatildeo (via CX3CR1) ao fractalkine

Informaccedilatildeo natildeo disponiacutevel

Abreviaturas ECM matriz extracelular ICAM moleacutecula de adesatildeo intracelular IL interleucina LPS lipopolissacariacutedeo MCP proteiacutena quimiotaacutetica de monoacutecitos MMPs metaloproteiacutenases da matriz ROS espeacutecies reativas de oxigeacutenio TNF fator de necrose tumoral VCAM moleacutecula de adesatildeo celular vascular Tabela adaptada e traduzida de Wrigley et al (39)


19

15 Objetivos

Este estudo tem como principal objetivo contribuir para uma melhor

caracterizaccedilatildeo dos mecanismos de ativaccedilatildeo da imunidade inata em doentes

com insuficiecircncia cardiacuteaca croacutenica utilizando a imunofenotipagem celular por

citometria de fluxo Neste contexto os objetivos especiacuteficos desta dissertaccedilatildeo

consistem na

- Observaccedilatildeo da expressatildeo dos TLR2 e TLR4 nos monoacutecitos de doentes

com IC

- Caracterizaccedilatildeo imunofenotiacutepica das subpopulaccedilotildees monociacuteticas do

sangue perifeacuterico

- Caracterizaccedilatildeo imunofenotiacutepica dos linfoacutecitos e neutroacutefilos do sangue

perifeacuterico

O cumprimento destes objetivos poderaacute contribuir para esclarecer o

papel da ativaccedilatildeo da imunidade inata na insuficiecircncia cardiacuteaca o que se

reveste de grande importacircncia para a compreensatildeo da sua fisiopatologia e para

o desenvolvimento de estrateacutegias terapecircuticas eficazes

2 Material e Meacutetodos


23

21 Participantes

Foram selecionados 15 doentes com ICC (9 do sexo masculino e 6 do

sexo feminino) com idades compreendidas entre os 50 e os 91 anos que se

encontravam a ser seguidos na consulta do Centro Hospitalar do Satildeo Joatildeo

(CHSJ) entre outubro e novembro de 2012 Como criteacuterios de inclusatildeo deste

estudo os doentes possuiacuteam uma disfunccedilatildeo sistoacutelica do ventriacuteculo esquerdo

encontravam-se clinicamente estaacuteveis e a terapecircutica meacutedica otimizada pelo

menos haacute 3 meses Os doentes que tivessem sido internados nos uacuteltimos 2

meses e que apresentassem a funccedilatildeo do ventriacuteculo esquerdo normal foram

exlcuiacutedos do estudo

Foi constituiacutedo um grupo controlo com 12 dadores de sangue (6 do sexo

masculino e 6 do sexo feminino) com idades compreendidas entre 17 e 42

anos aparentemente saudaacuteveis sem histoacuterico de doenccedilas cardiovasculares

Aquando da inclusatildeo no estudo dos doentes e do grupo controlo foram

registados os seguintes paracircmetros sexo idade classe de NYHA (classe I ndash

IV) existecircncia de diabetes e de hipertensatildeo e a medicaccedilatildeo Por citometria de

fluxo estudou-se o imunofenoacutetipo dos monoacutecitos (FSC SSC CD4 CD11b

CD14 CD16 CD36 CD45 CD64 HLA-Dr IREM-2 TLR2 e TLR4) dos

neutroacutefilos (FSC SSC CD10 CD11b CD13 CD15 CD16 e CD45) e dos

linfoacutecitos (CD3 CD4 CD8 CD16 CD19 e CD56) Determinou-se a proteiacutena C

reativa (PCR) a hemoglobina (HBG) e o nuacutemero de leucoacutecitos No grupo de

doentes procedeu-se ainda agrave determinaccedilatildeo do peacuteptido natriureacutetico do tipo B

(BNP do inglecircs B-type natriuretic peptide) e da creatinina

O estudo em questatildeo natildeo possui qualquer tipo de obstaacuteculo de iacutendole

eacutetica dado que se encontra de acordo com os princiacutepios eacuteticos da Declaraccedilatildeo

de Helsiacutenquia e foi aprovado pela comissatildeo de eacutetica do CHSJ

22 Obtenccedilatildeo e preparaccedilatildeo das amostras

De cada participante foram colhidas amostras de sangue perifeacuterico por

punccedilatildeo venosa Para a anaacutelise por citometria de fluxo e para a determinaccedilatildeo

dos paracircmetros hematoloacutegicos foi colhido sangue para um tubo contendo o

aacutecido etilenodiaminotetraceacutetico-tripotaacutessico (EDTA-K3) como anticoagulante


24

Num tubo com gel Z (ativador da coagulaccedilatildeo) colheu-se sangue para o

doseamento da creatinina e da PCR a fim de se obter soro apoacutes centrifugaccedilatildeo

a 3500 rotaccedilotildees por minuto (rpm) durante 10 minutos Para a determinaccedilatildeo do

BNP foi colhido sangue para um tubo contendo heparina liacutetio para obtenccedilatildeo de

plasma apoacutes centrifugaccedilatildeo a 3500rpm durante 10 minutos As amostras foram

processadas num periacuteodo inferior a 24 horas

23 Determinaccedilatildeo dos paracircmetros laboratoriais gerais

Os paracircmetros hematoloacutegicos (HGB e leucoacutecitos) foram determinados

no analisador de Hematologia automaacutetico Sysmex XE-5000 (Syxmex

Corporation Kobe Japan) apoacutes ter sido efetuado o controlo de qualidade

diaacuterio

A HGB foi analisada pelo detetor de HGB com base no meacutetodo de

deteccedilatildeo de hemoglobina SLS (Lauril sulfato de soacutedio) Os valores de referecircncia

da HGB utilizados pelo laboratoacuterio satildeo 130 a 170 gdl para o sexo masculino

(acima dos 13 anos) e 120 a 150 gdl para o sexo feminino (acima dos 13

anos)

Os leucoacutecitos foram analisados pelo bloco de deteccedilatildeo oacutetico com base no

meacutetodo de citometria de fluxo utilizando um laser semiconductor Os valores

compreendidos entre 40 e 110x109L satildeo considerados normais

A determinaccedilatildeo quantitativa da creatinina seacuterica foi realizada utilizando o

kit Creatinine (Beckman Coulter Brea California USA) Foi efetuado um

ensaio de cor cineacutetico (meacutetodo Jaffeacute) no autoanalisador Olympus AU5400

(Olympus Diagnostica GmbH Hamburg) A avaliaccedilatildeo da creatinina foi efetuada

apoacutes a realizaccedilatildeo do controlo de qualidade diaacuterio Os valores de referecircncia

utilizados pelo laboratoacuterio satildeo 08 a 14 mgdl para o sexo masculino e 06 a

11 mgdl para o sexo feminino

A PCR foi doseada no soro utilizando o kit CRP Latex (Beckman Coulter

Brea California USA) que se baseia num ensaio imuno-turbidimeacutetrico A sua

determinaccedilatildeo quantitativa foi efetuada no autoanalisador Olympus AU5400

(Olympus Diagnostica GmbH Hamburg) A anaacutelise da PCR foi realizada apoacutes o


25

controlo de qualidade diaacuterio do laboratoacuterio Os valores inferiores a lt3mgL satildeo

considerados normais

O BNP foi quantificado no plasma utilizando o kit de diagnoacutestico ndash

ARCHITECT BNP Reagent Kit (Abbott Laboratories Abbott Park IL USA) no

equipamento ARCHITECT PLUS i2000sr (Abbott Laboratories Abbott Park

Illinois USA) A determinaccedilatildeo da concentraccedilatildeo do BNP baseou-se num

imunoensaio de micropartiacuteculas por quimioluminiscecircncia (CMIA) sendo

efetuada apoacutes a realizaccedilatildeo do controlo de qualidade diaacuterio Os valores de

referecircncia utilizados pelo laboratoacuterio satildeo lt100 pgmol

24 Expressatildeo do TLR2 e TLR4 por citometria de fluxo

Para a anaacutelise da expressatildeo do TLR2 e TLR4 utilizaram-se os seguintes

anticorpos monoclonais TLR2-Alexa Fluorreg 488 (clone 11G7 BD

PharmingenTM San Diego California USA) TLR4 biotinilado (Biotin Mouse

Anti-Human Toll-Like Receptor 4 clone HTA125 BD PharmingenTM San

Diego California USA) com a utilizaccedilatildeo para marcaccedilatildeo fluorescente de

Estreptavidina-Proteiacutena Peridinina Clorofila-CianinaTM55 (PerCP-CyTM55 BD

PharmingenTM San Diego California USA) CD14-Aloficocianina (APC clone

MϕP9 BD Biosciences San Jose California USA) CD16-Ficoeritrina (PE

clone 3G8 Immunotechreg Marseille France) e CD45-Pacific Orange (clone

HI30 InvitrogenTM Frederick USA)

A preparaccedilatildeo das amostras iniciou-se pela adiccedilatildeo a 100 microl de sangue de

20 microl do anticorpo monoclonal TLR4 seguido de incubaccedilatildeo de 15 minutos no

escuro e agrave temperatura ambiente (TA) Procedeu-se a um passo de lavagem

adicionando 3 ml de soluccedilatildeo de lavagem (BD FACSFlowTM BD Biosciences

San Jose California USA) e centrifugando a 1500 rpm durante 5 minutos

Aspirou-se o sobrenadante e adicionou-se 20 microl de Estrepatvidina-PerCP-

CyTM55 Apoacutes nova incubaccedilatildeo de 15 minutos no escuro e agrave TA procedeu-se a

uma lavagem igual agrave anteriormente realizada Adicionaram-se os restantes

anticorpos monoclonais com marcaccedilatildeo direta (TLR2-Alexa Fluorreg 488 CD45-

Pacific Orange CD16-PE e CD14-APC) e incubou-se 15 minutos nas mesmas

condiccedilotildees anteriores Adicionou-se 2 ml de soluccedilatildeo de lise (FACS Lysing

Solution BD Biosciences San Jose California USA) para a lise dos eritroacutecitos


26

e voltou a incubar-se durante 15 minutos no escuro e agrave TA As ceacutelulas foram

posteriormente centrifugadas a 1500 rpm durante 5 minutos Apoacutes a rejeiccedilatildeo

do sobrenadante adicionou-se 3 ml da soluccedilatildeo de lavagem e centrifugou-se

novamente Por fim as amostras foram suspensas em 05ml de BD

FACSFlowTM

A aquisiccedilatildeo das amostras foi realizada no citoacutemetro de fluxo BD

FACSCantotrade II da Becton Dickinsonreg equipado com trecircs lasers um laser

azul (488nm) um laser vermelho (633nm) e um laser violeta (405nm) podendo

ler ateacute 8 fluorescecircncias A aquisiccedilatildeo foi efetuada apoacutes o controlo de qualidade

diaacuterio com esferas fluorescentes de configuraccedilatildeo (BDTM Cytometer Setup amp

Tracking Beads BD Biosciences San Jose California USA) Para a aquisiccedilatildeo

utilizou-se o software FACSDivatrade (BD PharmingenTM) adquirindo 150 000

ceacutelulas Na anaacutelise utilizou-se o software Infinicyt 12trade (Cytognos Salamanca

Spain) Os resultados foram expressos em termos de intensidade meacutedia de

fluorescecircncia (IMF)

25 Estudo fenotiacutepico dos monoacutecitos linfoacutecitos e neutroacutefilos por

citometria de fluxo

No estudo fenotiacutepico dos leucoacutecitos por citometria de fluxo foi utilizado o

seguinte painel de anticorpos monoclonais conjugados com fluorocromos que

se encontra esquematizado na tabela 4 Os anticorpos foram obtidos da BD

Biosciences (San Jose California USA CD3-APC clone SK7 CD8-

Isotiocianato de Fluoresceiacutena (FITC) clone SK1 CD13-PE clone L138 CD14-

APC clone MϕP9 CD14-APC-H7 clone MϕP9 CD15-FITC clone MMA

CD34-APC clone 8G12 CD45-PerCp-CyTM55) clone 2D1 CD56-PE clone

MY31) da Immunotechreg (Marseille France CD11b-FITC clone Bear1 CD16-

PE clone 3G8 CD19-Ficoeritrina cianina 7 (PC7) clone J3-119 CD64-PE

clone 22) e da BD PharmingenTM (Glostrup Denmark CD4-Pacific Blue clone

RPA-T4 CD36-FITC clone CB38 HLA-DR-PerCp-Cy55 clone L243) da

InvitrogenTM (Frederick USA CD45-Pacific Orange clone HI30) e da

Immunostep (Salamanca Spain IREM-2-APC)


27

Tabela 4 ndash Painel de anticorpos e respetivos fluorocromos utilizados

Populaccedilatildeo leucocitaacuteria a estudar

Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

Linfoacutecitos 4 45 8 16+56 - 19 3 -

Monoacutecitos 4 45 36 16 HLA-Dr - 14 -

Monoacutecitos - 45 16 64 - 14 -

Monoacutecitos - 45 11b 16 - IREM-2 14

Neutroacutefilos - - 11b 13 45 - 34 -

Neutroacutefilos - - 15 16 45 - 10 -

Para o estudo imunofenotiacutepico adicionou-se em cada tubo 100 microl de

sangue e uma quantidade apropriada de anticorpos monoclonais e incubou-se

15 minutos no escuro e agrave TA Para a lise dos eritroacutecitos adicionou-se 2ml de

soluccedilatildeo de lise (FACS Lysing Solution) e incubou-se durante 15 minutos nas

mesmas condiccedilotildees anteriores As ceacutelulas foram posteriormente centrifugadas

a 1500 rpm durante 5 minutos e depois o sobrenadante foi rejeitado De

seguida adicionou-se 3 ml de BD FACSFlowTM e centrifugou-se novamente

Por fim as amostras foram suspensas em 05 ml de BD FACSFlowTM


FACSCantotrade II da Becton Dickinsonreg apoacutes ter sido efetuado o controlo de

qualidade diaacuterio com esferas fluorescentes de configuraccedilatildeo (BDTM Cytometer

Setup amp Tracking Beads BD Biosciences San Jose California USA) Para a

aquisiccedilatildeo utilizou-se o software FACSDivatrade (BD Pharmingen TM) adquirindo

150 000 ceacutelulas Na anaacutelise utilizou-se o software Infinicyt 12trade (Cytognos

Salamanca Spain) Os resultados foram expressos em termos de percentagem

das ceacutelulas positivas para o respetivo antigeacutenio em cada tipo celular eou a

intensidade meacutedia de fluorescecircncia (IMF) respetiva


28

26 Estatiacutestica

Para efeitos de anaacutelise e tratamento estatiacutestico dos dados obtidos

utilizou-se o programa informaacutetico Microsoftreg Excel 2002 e Statistical Package

for Social Sciences (SPSS para o WindowsTM versatildeo 180 SPSS Inc Chicago

USA) As variaacuteveis numeacutericas contiacutenuas foram analisadas atraveacutes das

medidas descritivas percentis 25 50 e 75 e as variaacuteveis nominais foram

analisadas sob a forma de frequecircncias absolutas eou relativas

Para a anaacutelise das diferenccedilas entre os grupos estudados utilizaram-se

os testes natildeo-parameacutetricos Mann-Whitney ou de Wilcoxon conforme as

amostras fossem independentes ou emparelhadas respetivamente O niacutevel de

significacircncia foi de 95 (α=005)

3 Resultados


31

31 Caracterizaccedilatildeo da amostra

As caracteriacutesticas do grupo de doentes encontram-se sumariadas na

tabela 5

Tabela 5 ndash Caracteriacutesticas cliacutenicas dos doentes com ICC

Doentes com ICC

(n=15)

Hipertensatildeo 13 (867)

Diabetes 5 (333)

Etiologia

Isqueacutemica Natildeo-isqueacutemica

8 (533) 7(467)

Disfunccedilatildeo ventricular esquerda

Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo

Inibidores ECA β-bloqueadores Antiplaquetaacuterios Dislipideacutemicos

Diureacuteticos Espironolactona

Antidiabeacuteticos orais Insulina NPH

Anticoagulantes orais

13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)

Na figura 4 encontram-se representados os paracircmetros analiacuteticos

determinados nos doentes com ICC divididos em dois grupos segundo a

classe funcional de NYHA classe I e classe IIIII Devido ao nuacutemero reduzido

de doentes com ICC estudados natildeo foi possiacutevel dividir em 4 grupos de acordo

com as 4 classes existentes na classificaccedilatildeo de NYHA Apesar do aumento da

mediana entre os dois grupos definidos nos paracircmetros PCR (P50=265 mgL


32

versus P50=530 mgL) BNP (P50=11695 pgmol versus P50=39960 pgmol)

e creatinina (P50=098 mgdl versus P50=110 mgdl) os resultados natildeo foram

estatisticamente significativos O mesmo se verificou no nuacutemero de leucoacutecitos

contudo apresentaram uma diminuiccedilatildeo da mediana (P50= 762x109L versus

P50=682x109L) Por outro lado a diminuiccedilatildeo da HGB com o aumento da

classe de NYHA foi estatisticamente significativa (p=0020)

Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA

Classe I Classe IIIII

Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)

Classe I Classe IIIII Classe de NYHA

BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA


classe funcional de NYHA Valor de prova referente ao teste Mann-Whitney nos

doentes com ICC divididos em dois grupos classe NYHA I e classe NYHA IIIII

(α=005)

HB

(g

dl)



33

32 Anaacutelise fenotiacutepica dos leucoacutecitos

A anaacutelise das populaccedilotildees leucocitaacuterias seguiu uma seacuterie de estrateacutegias

de gate (regiatildeo de anaacutelise onde se encontram as ceacutelulas de interesse) para a

identificaccedilatildeo de cada tipo leucocitaacuterio Assim comeccedilou-se por identificar os

eventos a serem excluiacutedos da anaacutelise nos dot-plots FSC versus SSC e SSC

versus CD45 (figura 5 ndash A e B) foram selecionados os restos celulares e no dot-

plot FSC-A (aacuterea) versus FSC-H (altura) [figura 5 ndash C] selecionaram-se os

dupletos Seguidamente foram identificados os diferentes tipos de leucoacutecitos

nos dot-plots FSC versus SSC e SSC versus CD45 pelas suas caracteriacutesticas

de foward scatter (tamanho) side scatter (granularidade) e pela intensidade de

expressatildeo de CD45 (figura 6 ndash A e B) Para uma melhor delimitaccedilatildeo dos

monoacutecitos ainda se recorreu ao dot-plot SSC versus CD14 para uma correta

separaccedilatildeo destas ceacutelulas relativamente aos granuloacutecitos

B A B C

Figura 5 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da identificaccedilatildeo dos eventos a serem excluiacutedos da

anaacutelise (A e B) ndash Seleccedilatildeo da regiatildeo dos restos celulares (CD45- eventos a preto) nos

dot-plots FSC versus SSC e SSC versus CD45 (C) ndash Seleccedilatildeo dos dupletos (eventos a

preto) no dot-plot FSC-A versus FSC-H


34

Eosinoacutefilos Monoacutecitos Linfoacutecitos

Neutroacutefilos Basoacutefilos

B

C


perifeacuterico normal (A e B) Identificaccedilatildeo dos diferentes tipos de leucoacutecitos pelo seu

tamanho e granularidade (dot-plot FSC versus SSC) e pela intensidade de expressatildeo

de CD45 (SSC versus CD45) Linfoacutecitos - FSCbaixoSSCbaixoCD45++ Monoacutecitos -

FSCaltoSSCintermeacutedioCD45+ Neutroacutefilos - FSCaltoSSCaltoCD45+ Eosinoacutefilos -

FSCaltoSSCaltoCD45+ Basoacutefilos - FSCbaixoSSCbaixoCD45+ (C) Gate efetuado nos

granuloacutecitos (eventos a preto) no dot-plot SSC versus CD14 separando-os das

ceacutelulas mononucleares

Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35

Na tabela 6 encontra-se representada a anaacutelise efetuada nos

participantes deste estudo relativamente aos diferentes tipos de leucoacutecitos Na

comparaccedilatildeo entre o grupo de doentes e o grupo controlo observaram-se

diferenccedilas estatisticamente significativas nos linfoacutecitos (p=0010) monoacutecitos

(p=0025) nos neutroacutefilos (p=0022) e nas ceacutelulas CD34+ (p=005) Verificou-se

uma diminuiccedilatildeo da percentagem de linfoacutecitos nos doentes com ICC

(P50=1885 versus P50=2830) e um aumento da percentagem de

neutroacutefilos (P50=7016 versus P50=6214) e de monoacutecitos nos mesmos

doentes (P50=776 versus P50=554)

Tabela 6 ndash Anaacutelise dos tipos de leucoacutecitos nos participantes do estudo

Valor de prova referente ao teste Mann-Whitney entre o grupo de doentes com ICC e o grupo controlo (α=005)

Paracircmetro

Grupo ICC Grupo Controlo

Valor de p Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317

Ceacutelulas CD34+ ()

002 002 002 002 003 004 0050


36

33 Anaacutelise fenotiacutepica dos monoacutecitos

Dentro do gate efetuado anteriormente nos monoacutecitos procedeu-se agrave

sua divisatildeo em trecircs subpopulaccedilotildees no dot-plot CD14 versus CD16 (figura 7)

conforme a intensidade de expressatildeo destes marcadores

- Monoacutecitos CD14+CD16- - foram definidos pela expressatildeo forte de CD14

e a ausecircncia de expressatildeo de CD16

- Monoacutecitos CD14+CD16+ - foram definidos pela expressatildeo forte de

ambos os marcadores

- Monoacutecitos CD14dimCD16+ - foram definidos pela expressatildeo fraca

(heterogeacutenea) de CD14 e a expressatildeo forte de CD16

As subpopulaccedilotildees monociacuteticas foram observadas e quantificadas no

grupo de doentes com ICC e no grupo controlo (tabela 7) No grupo controlo

observou-se que a subpopulaccedilatildeo maioritaacuteria (CD14+CD16-) representava

8548 dos monoacutecitos do sangue perifeacuterico enquanto as subpopulaccedilotildees

CD14+CD16+ e a CD14dimCD16+ contabilizavam 733 e 802

respetivamente Em comparaccedilatildeo com o grupo controlo os doentes com ICC

tiveram um ligeiro aumento da subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ (977 versus

733) com consequente diminuiccedilatildeo dos monoacutecitos CD14+CD16- (8172

versus 8548) Contudo as diferenccedilas das percentagens das subpopulaccedilotildees

monociacuteticas entre os dois grupos estudados natildeo foram estatisticamente

significativas

Figura 7 ndash Definiccedilatildeo das subpopulaccedilotildees monociacuteticas (CD14+CD16- CD14+CD16+ e

CD14dimCD16+) no dot-plot CD14 versus CD16

CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37

Tabela 7 ndash Percentagem das subpopulaccedilotildees monociacuteticas nos grupos de doentes e

controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()

Grupo ICC 8172plusmn523 977plusmn278 853plusmn375

Grupo Controlo 8548plusmn566 733plusmn318 802plusmn438

Valor p 0922 0626 0733

Resultados expressos como meacutediaplusmndesvio padratildeo Valor de prova referente ao teste

Mann-Whitney entre o grupo de doentes com ICC e o grupo controlo (α=005)

Na divisatildeo dos doentes com ICC nos dois grupos formados de acordo

com a classificaccedilatildeo de NYHA (tabela 8) observaram-se diferenccedilas

estatisticamente significativas na subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ (p=0037) que

apresentou uma diminuiccedilatildeo da sua percentagem na classe de NYHA IIIII

(670 versus 1014) Embora natildeo se obtivesse diferenccedilas estatiacutesticas na

percentagem das outras subpopulaccedilotildees a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16- estava

ligeiramente aumentada na classe de NYHA IIIII (8393 versus 7978)

enquanto que a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ diminuiu a sua percentagem na

classe de NYHA IIIII (938 versus 1011)

Tabela 8 ndash Percentagem das subpopulaccedilotildees monociacuteticas nos doentes com ICC

conforme a classe de NYHA

Subpopulaccedilatildeo monociacutetica

Classe NYHA I (n=8) CLASSE NYHA IIIII

(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037

Resultados expressos como meacutediaplusmndesvio padratildeo Valor de prova referente ao teste Mann-

Whitney entre os grupos de doentes com ICC classe NYHA I e classe NYHA IIIII (α=005)

As subpopulaccedilotildees monociacuteticas foram estudadas relativamente agrave

expressatildeo de antigeacutenios pelos monoacutecitos CD4 CD11b CD36 CD45 CD64

HLA-Dr IREM-2 e agraves caracteriacutesticas fiacutesicas das ceacutelulas (FSC e SSC) A


38

expressatildeo dos diferentes marcadores celulares analisados nos monoacutecitos estaacute

representada na figura 8

O imunofenoacutetipo de cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica encontra-se

seguidamente descrito tendo-se verificado diferenccedilas estatisticamente

significativas (plt005) na expressatildeo dos diferentes marcadores

Os monoacutecitos CD14+CD16- possuiacuteam uma expressatildeo forte de CD11b

CD36 e CD64 contrastando com uma expressatildeo fraca dos antigeacutenios HLA-Dr

e CD4 Expressavam ainda os antigeacutenios CD45 e IREM-2 com uma IMF

inferior agraves restantes subpopulaccedilotildees monociacuteticas Esta subpopulaccedilatildeo

apresentou ainda um maior SSC e um menor FSC que as restantes

A subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ foi a que apresentou uma expressatildeo mais

elevada de CD11b CD36 HLA-Dr IREM-2 e CD4 Por sua vez os antigeacutenios

CD64 e o CD45 exibiram uma expressatildeo intermeacutedia comparativamente com

as outras subpopulaccedilotildees monociacuteticas Esta subpopulaccedilatildeo foi a que apresentou

maior FSC e um SSC intermeacutedio

Os monoacutecitos CD14dimCD16+ expressaram niacuteveis mais baixos de

CD11b CD36 e CD64 do que as outras subpopulaccedilotildees Apresentaram uma

intensidade de expressatildeo intermeacutedia para os marcadores IREM-2 e HLA-Dr O

CD4 possuiacutea uma IMF semelhante aos monoacutecitos claacutessicos Foi a

subpopulaccedilatildeo que teve menor SSC FSC intermeacutedio e maior intensidade de

expressatildeo de CD45


39

Doente com ICC

Controlo Normal

Figura 8 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da intensidade de expressatildeo dos marcadores celulares estudados nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas

comparando um exemplo de um caso tiacutepico do grupo controlo com um caso tiacutepico do grupo de doentes com ICC


40


comparando um exemplo de um caso tiacutepico do grupo controlo com um caso tiacutepico do grupo de doentes com ICC (continuaccedilatildeo)

Doente com ICC

Controlo Normal


41

Na figura 9 encontram-se representados os diagramas de caixa

referentes aos paracircmetros celulares estudados nos monoacutecitos Na comparaccedilatildeo

da expressatildeo dos paracircmetros analisados observaram-se nas trecircs

subpopulaccedilotildees monociacuteticas uma diminuiccedilatildeo estatisticamente significativa do

valor do CD45 HLA-Dr e FSC (plt005) nos doentes em comparaccedilatildeo com os

controlos Tambeacutem foram encontradas diferenccedilas nos monoacutecitos CD14+CD16-

para o antigeacutenio CD11b (plt005) apresentando uma diminuiccedilatildeo na sua

expressatildeo celular Nos marcadores celulares CD4 CD36 CD64 e IREM-2

observou-se um aumento ligeiro da sua expressatildeo no grupo de doentes no

entanto essas diferenccedilas natildeo foram significativas em termos estatiacutesticos

34 Anaacutelise da expressatildeo do TLR2 e TLR4

CD14+CD16- CD14+CD16+ CD14dim

CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)


CD16+ CD14+CD16- CD14+CD16+ CD14dim

CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B

Figura 9 ndash Diagramas de caixa apresentado a IMF dos marcadores celulares nas

subpopulaccedilotildees monociacuteticas no grupo de doentes e no grupo de controlo p lt 005 valor

de prova referente ao teste Mann-Whitney entre o grupo de doentes e o grupo controlo (α=005)


CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)

CD14+CD16+ CD14+CD16- CD14dim

CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)

Grupo Controlo Grupo ICC


CD16+

CD

36 (

IMF

)


42

Nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas identificadas foi tambeacutem analisada a

expressatildeo dos TLR2 e TLR4 (figura 10 e 11)

Na expressatildeo do TLR2 nos participantes deste estudo observou-se que

a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ apresentou uma IMF superior aos outros

subtipos de monoacutecitos tendo a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ apresentado uma

expressatildeo mais fraca deste recetor (figura 10) Na comparaccedilatildeo da expressatildeo

do TLR2 entre o grupo de doentes e controlos verificou-se uma ligeira sobre-

expressatildeo nos doentes com ICC nas subpopulaccedilotildees CD14+CD16- e

CD14+CD16+ (figura 11) A subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ apresentou uma

diminuiccedilatildeo significativa da sua expressatildeo (p=0002) entre o grupo de doentes

e os controlos

Na expressatildeo do TLR4 nos monoacutecitos dos mesmos indiviacuteduos verificou-

se que as subpopulaccedilotildees CD14+CD16+ e a CD14dimCD16+ apresentaram uma

expressatildeo mais forte do TLR4 em comparaccedilatildeo com a subpopulaccedilatildeo

maioritaacuteria De forma inversa a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16- foi a que obteve

uma intensidade de fluorescecircncia mais fraca do TLR4 (figura 10)

Os doentes com ICC apresentaram um ligeiro aumento da expressatildeo do

TLR4 comparativamente com o grupo controlo (figura 11) Poreacutem natildeo se

observaram diferenccedilas estatisticamente significativas na expressatildeo deste

recetor entre as subpopulaccedilotildees monociacuteticas

De salientar que a expressatildeo deste recetor apresentou valores de IMF

muito heterogeacuteneos uma vez que em alguns indiviacuteduos (controlos e doentes)

a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ obteve uma IMF superior aos monoacutecitos

CD14dimCD16+ e noutros indiviacuteduos ocorreu o inverso Em 6 controlos (500)

e em 6 doentes (40) a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ foi a que teve uma IMF

superior no TLR4 Este subtipo de monoacutecitos apresentou em dois doentes com

ICC uma IMF muito elevada obtendo o dobro da IMF observada na

subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+


43

Doente com ICC

Controlo Normal

Figura 10 ndash Representaccedilatildeo graacutefica da intensidade de expressatildeo dos TLR2 e TLR4 nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas comparando um exemplo

de um caso tiacutepico do grupo controlo com um caso tiacutepico do grupo de doentes com ICC


44

Na figura 12 encontra-se representado a expressatildeo dos TLR2 e TLR4

divididos em dois grupos classe NYHA I e classe NYHA IIIII Na anaacutelise

destes resultados verificou-se que a classe de NYHA I apresentou uma

expressatildeo mais elevada dos TLR2 e TLR4 do que na classe NHYA IIIII em

quase todas as subpopulaccedilotildees monociacuteticas Com a exceccedilatildeo da subpopulaccedilatildeo

CD14+CD16- no TLR4 a classe que apresentou uma IMF superior foi a classe

NYHA IIIII

O padratildeo de expressatildeo do TLR2 dividido nas classes de NYHA foi

semelhante ao apresentado na comparaccedilatildeo entre os grupos de doentes e

controlos A subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ foi a que obteve maior IMF nos dois

grupos definidos e a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ a que obteve menor IMF A

subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ apresentou diferenccedilas estatisticamente

significativas (p=0005) entre a classe NYHA I e a classe NYHA IIIII

Relativamente ao TLR4 observou-se tambeacutem um padratildeo de expressatildeo

semelhante agrave comparaccedilatildeo entre doentes e controlos Em termos estatiacutesticos

natildeo se observaram diferenccedilas significativas entre os dois grupos estudados


CD16+

TL

R4 (

IMF

)


Figura 11 ndash Diagramas de caixa apresentando a IMF entre o grupo de doentes e o

grupo controlo p lt 005 valor de prova referente ao teste Mann-Whitney entre o grupo de

doentes e o grupo controlo (α=005)


CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45

35 Anaacutelise fenotiacutepica dos linfoacutecitos

As populaccedilotildees linfocitaacuterias foram analisadas dentro do gate linfocitaacuterio

efetuado anteriormente Os linfoacutecitos T auxiliares foram identificados pela

expressatildeo simultacircnea de CD3 e CD4 os linfoacutecitos T citotoacutexicos foram definidos

pela expressatildeo de CD3 e CD8 os linfoacutecitos T CD4+CD8+ foram identificados

pela expressatildeo simultacircnea de CD3 CD4 e CD8 os linfoacutecitos T CD4-CD8-

foram definidos pela expressatildeo de CD3 e a ausecircncia de expressatildeo de CD4 e

de CD8 os linfoacutecitos T CD3+CD16+CD56+ foram definidos pela expressatildeo de

CD3 CD16 e CD56 os linfoacutecitos B foram identificados pela positividade de

CD19 e as ceacutelulas NK pela expressatildeo dos marcadores CD16 e CD56 e pela

ausecircncia de expressatildeo de CD3 (figura 13)


CD16+

TL

R4 (

IMF

)

Classe NYHA I Classe NYHA IIIII

Figura 12 ndash Diagramas de caixa apresentando a IMF entre os grupos classe de

NYHA I e classe de NYHA IIIII plt 005 valor de prova referente ao teste Mann-Whitney

entre os grupos de doentes com ICC classe NYHA I e classe NYHA IIIII (α=005)


CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46

Figura 13 ndash Anaacutelise sequencial para o estudo das populaccedilotildees linfocitaacuterias (A) Seleccedilatildeo dos

linfoacutecitos no dot-plot SSC versus CD45 (B) Gate efetuado nas ceacutelulas positivas para o CD3

(linfoacutecitos T) no dot-plot SSC versus CD3 (C) Gate efetuado nas ceacutelulas positivas para o

CD19 (linfoacutecitos B) no dot-plot SSC versus CD19 (D) Gate efetuado nas ceacutelulas positivas

para os marcadores CD16 e CD56 (ceacutelulas NK) no dot-plot SSC versus CD16+CD56 (E) No

dot-plot CD3 versus CD16+CD56 foi efetuado um gate nas ceacutelulas positivas para CD3 CD16

e CD56 (linfoacutecitos T CD3+CD16+CD56+) (F) Seleccedilatildeo dos linfoacutecitos T auxiliares (CD4+) no

dot-plot SSC versus CD4 (G) Seleccedilatildeo dos linfoacutecitos T citotoacutexicos (CD8+) no dot-plot SSC

versus CD8 (H) Dot-plot CD4 versus CD8 esquematizando os linfoacutecitos T CD4+CD8- CD4-

CD8+ CD4+CD8+ CD4-CD8-

C

D

A

Linfoacutecitos

B

Linfoacutecitos T Linfoacutecitos B

Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47

Na tabela 9 encontra-se representada a anaacutelise descritiva (percentis 25

50 e 75) e a anaacutelise inferencial das populaccedilotildees linfocitaacuterias do grupo de

controlo e do grupo de doentes com ICC Na avaliaccedilatildeo da frequecircncia () de

cada populaccedilatildeo linfocitaacuteria entre os dois grupos estudados apenas se

observaram diferenccedilas estatisticamente significativas nos linfoacutecitos T

CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)

Tabela 9 ndash Anaacutelise comparativa das populaccedilotildees linfocitaacuterias

Populaccedilatildeo linfocitaacuteria

Grupo ICC Grupo de controlo

p

P25 P50 P75 P25 P50 P75

Linfoacutecitos T dentro do total de linfoacutecitos ()

7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558

Linfoacutecitos T auxiliares dentro dos linfoacutecitos T ()

5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283

Linfoacutecitos T citotoacutexicos dentro dos linfoacutecitos T ()

2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242

Linfoacutecitos T CD4+CD8+ dentro dos linfoacutecitos T ()

107 197 240 083 104 141 0016

Linfoacutecitos T CD4-CD8- dentro dos linfoacutecitos T ()

143 212 351 231 424 761 0028

Linfoacutecitos T CD3+CD16+CD56+

dentro dos linfoacutecitos T () 534 684 1455 638 779 1104 0884

Linfoacutecitos B dentro do total de linfoacutecitos ()

351 672 1192 937 1032 1119 0107

Ceacutelulas NK dentro do total de linfoacutecitos ()

804 1103 1629 684 1086 1338 0575

Abreviaturas P percentil

Valor de prova referente ao teste Mann-Whitney entre o grupo de doentes com ICC e o grupo

controlo (α=005)


48

36 Anaacutelise fenotiacutepica dos neutroacutefilos

Dentro do gate dos neutroacutefilos efetuado previamente observou-se a

expressatildeo dos antigeacutenios celulares CD10 CD11b CD13 CD15 CD16 e CD45

e dos paracircmetros FSC e SSC (figura 14) Pela intensidade de expressatildeo dos

marcadores CD11b e CD13 avaliou-se a presenccedila de precursores neutrofiacutelicos

(figura 14-B) metamieloacutecitos - CD11b+fracoCD13+forte mieloacutecitos

CD11b+fracoCD13+fraco A IMF para estes marcadores foi registada nos

neutroacutefilos maduros (CD11b+forteCD13+forte)

A anaacutelise estatiacutestica dos antigeacutenios celulares e das caracteriacutesticas fiacutesicas

(FSC e SSC) dos neutroacutefilos encontra-se esquematizada na tabela 11

O FSC a percentagem de neutroacutefilos maduros e de metamieloacutecitos

evidenciaram diferenccedilas estatisticamente significativas entre os dois grupos

estudados (p=0036 p=0039 p=0024 respetivamente) Observou-se assim

uma diminuiccedilatildeo do tamanho celular dos neutroacutefilos da percentagem de

neutroacutefilos maduros e um aumento dos metamieloacutecitos nos doentes com ICC

Figura 14 ndash Anaacutelise dos neutroacutefilos (A) Seleccedilatildeo dos neutroacutefilos no dot-plot SSC versus

CD45 (B) Divisatildeo dos neutroacutefilos (neutroacutefilos metamieloacutecitos e mieloacutecitos) no dot-plot

CD11b versus CD13 (C) Expressatildeo dos antigeacutenios CD15 e CD16 nos neutroacutefilos (dot-

plot CD15 versus CD16)

C B A Neutroacutefilos maduros

Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49

Tabela 10 ndash Anaacutelise comparativa dos paracircmetros celulares estudados nos neutroacutefilos



controlo (α=005)

1 Natildeo se observaram mieloacutecitos em todos os participantes do estudo observaram-se em 10

doentes com ICC e em 4 controlos


p

P25 P50 P75 P25 P50 P75

Neutroacutefilos maduros () no total de neutroacutefilos

9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039

Metamieloacutecitos () no total de

neutroacutefilos 004 006 014 002 003 006 0024

Mieloacutecitos () no total de

neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo

No presente estudo analisou-se a imunidade inata em doentes com

insuficiecircncia cardiacuteaca croacutenica particularmente o papel dos monoacutecitos neste tipo

de imunidade

Este estudo foi limitado pelo baixo nuacutemero de doentes incluiacutedos o que

poderaacute condicionar a interpretaccedilatildeo dos resultados e consequentes conclusotildees

A gravidade dos doentes com ICC foi classificada de acordo com os

criteacuterios da classificaccedilatildeo funcional de NYHA Devido agrave reduzida dimensatildeo

amostral natildeo foi possiacutevel dividir os doentes em 4 grupos conforme a

existecircncia de 4 classes de NYHA tendo sido divididos apenas em 2 grupos

(classe de NYHA I e classe de NYHA IIIII)

Perante os dados analisados constatou-se que a HGB diminuiu a sua

concentraccedilatildeo com o aumento da classe de NYHA revelando diferenccedilas

estatisticamente significativas Estes resultados vatildeo de encontro agrave literatura

publicada que refere o aparecimento de anemia em doentes com ICC (5556)

Os doentes com IC estatildeo associados a uma deterioraccedilatildeo da funccedilatildeo

renal podendo em estadios mais avanccedilados da patologia desenvolver

insuficiecircncia renal (57) Sendo a creatinina um dos marcadores da funccedilatildeo

renal esta foi estudada Os seus niacuteveis apresentaram nos doentes da classe

de NYHA IIIII um ligeiro aumento comparativamente com os doentes da

classe de NYHA I natildeo revelando diferenccedilas estatisticamente significativas

O peacuteptido natriureacutetico do tipo B (BNP) eacute um biomarcador uacutetil para o

diagnoacutestico estratificaccedilatildeo do risco avaliaccedilatildeo prognoacutestica e monitorizaccedilatildeo da

terapecircutica na IC (5859) Este biomarcador natildeo revelou diferenccedilas

significativas nos niacuteveis plasmaacuteticos de BNP entre os dois grupos constituiacutedos

classe I e classe IIIII de NYHA embora se tenha verificado um aumento do

BNP no grupo de NYHA classe IIIII

Nos doentes com ICC tambeacutem foi estudada a proteiacutena C reativa (PCR)

que eacute um biomarcador de inflamaccedilatildeo sisteacutemica e da lesatildeo tecidual (760) Os

niacuteveis seacutericos da PCR natildeo evidenciaram diferenccedilas estatisticamente

significativas entre os dois grupos definidos (classe I e classe IIIII de NYHA)

observando-se um aumento da sua concentraccedilatildeo no grupo de doentes com


54

classe de NYHA IIIII Do mesmo modo que o BNP vaacuterios estudos associaram

o aumento da PCR com uma maior progressatildeo e gravidade da doenccedila (61)

O nuacutemero de leucoacutecitos nos doentes da classe de NYHA IIIII tiveram

uma diminuiccedilatildeo do seu nuacutemero relativamente aos doentes da classe de NYHA

I apesar de natildeo ser uma diminuiccedilatildeo significativa Estes resultados estatildeo em

desacordo com o estudo de Marques et al (62) em que observou um aumento

da concentraccedilatildeo de leucoacutecitos nos doentes em estadios sintomaacuteticos mais

avanccedilados

Os monoacutecitos desempenham um papel crucial na defesa imunoloacutegica

na inflamaccedilatildeo e na remodelaccedilatildeo tecidual (1839) Possuem na sua superfiacutecie

celular um conjunto de recetores os TLRs que satildeo responsaacuteveis pelo

reconhecimento de microrganismos invasores iniciando assim a resposta

imunoloacutegica inata (17)

Desta forma estudou-se a expressatildeo de dois TLRs que estatildeo presentes

nos monoacutecitos o TLR2 e o TLR4 Embora a maioria de estudos sobre o TLR2

e o TLR4 tenham sido centrados no seu papel de recetor para as moleacuteculas

exogeacutenas tambeacutem tem sido demonstrado que satildeo ativados por vaacuterias

moleacuteculas endoacutegenas (DAMPs) como por exemplo as proteiacutenas de choque

teacutermico o fibrinogeacutenio e a fibronectina (20223963) A sua ativaccedilatildeo induz

uma resposta inflamatoacuteria com produccedilatildeo de citocinas proinflamatoacuterias (TNF-α

IL-1 IL-6) processo este necessaacuterio para a reparaccedilatildeo celular (64) Enquanto a

resposta inflamatoacuteria inicial confere uma resposta protetora ao coraccedilatildeo uma

resposta inflamatoacuteria inadequada e persistente pode levar a efeitos deleteacuterios

no coraccedilatildeo (2037)

Para aleacutem disso estes recetores natildeo satildeo apenas expressos nas ceacutelulas

imunoloacutegicas mas tambeacutem noutros tecidos como eacute o caso do proacuteprio coraccedilatildeo

(522) Estes dados permitem assim associar a imunidade inata agrave IC indicando

que os monoacutecitos poderatildeo desempenhar um papel importante na coordenaccedilatildeo

da resposta inflamatoacuteria e na patogeacutenese da IC

Neste estudo avaliou-se a expressatildeo do TLR2 e TLR4 e de vaacuterios

antigeacutenios celulares nos monoacutecitos do sangue perifeacuterico Na anaacutelise dos

monoacutecitos observou-se que estes podem-se dividir em trecircs subpopulaccedilotildees de

acordo com a intensidade de expressatildeo do CD14 e CD16 A subpopulaccedilatildeo

maioritaacuteria possui uma expressatildeo forte do CD14 e eacute negativa para o CD16


55

(CD14+CD16-) As outras duas subpopulaccedilotildees expressam o CD16 mas

diferem na intensidade de expressatildeo do CD14 uma expressa-o fortemente

(CD14+CD16+) e na outra encontra-se diminuiacutedo (CD14dimCD16+) Estas

observaccedilotildees estatildeo de acordo com os estudos mais recentes (17185354) nos

quais foram identificadas estas subpopulaccedilotildees monociacuteticas verificando a

existecircncia de diferenccedilas fenotiacutepicas e funcionais

Eacute de salientar que esta subdivisatildeo dos monoacutecitos apenas foi possiacutevel

com os fluorocromos e clones utilizados neste estudo jaacute que com outras

combinaccedilotildees de fluorocromos experimentadas natildeo foi possiacutevel fazer a

separaccedilatildeo das trecircs subpopulaccedilotildees monociacuteticas A escolha correta do

fluorocromo estaacute dependente de algumas caracteriacutesticas tais como ser inerte

(como por exemplo natildeo afetar as ceacutelulas ou natildeo se ligar diretamente a

elementos celulares) possuir uma intensidade de fluorescecircncia alta exibir uma

baixa sobreposiccedilatildeo espectral com outros fluorocromos e ser facilmente

conjugado com o anticorpo monoclonal (66)

Para aleacutem da escolha da combinaccedilatildeo dos fluorocromos vaacuterios fatores

poderatildeo influir na possibilidade de visualizaccedilatildeo destas populaccedilotildees O grande

avanccedilo em citometria de fluxo registado nos uacuteltimos anos com o

desenvolvimento da aacuterea informaacutetica (aparecimento de novos hardware

software) assim como avanccedilos na caracterizaccedilatildeo e produccedilatildeo de novos

fluorocromos possibilitaram o aparecimento de citoacutemetros de fluxo capazes de

detetar 10 ou mais fluorocromos aumentando assim a capacidade de revelar

simultaneamente e rapidamente muacuteltiplas caracteriacutesticas celulares (66) Desta

forma a existecircncia de novos equipamentos com capacidades discriminativas

altas poderatildeo permitir a identificaccedilatildeo de pequenas populaccedilotildees que

anteriormente passariam despercebidas e estas serem importantes para a

compreensatildeo da patogeacutenese de diversas patologias

Neste estudo foi observado que em indiviacuteduos saudaacuteveis a

subpopulaccedilatildeo monociacutetica CD14+CD16- correspondia em meacutedia a 8548 de

monoacutecitos do sangue perifeacuterico enquanto as subpopulaccedilotildees CD14+CD16+ e a

CD14dimCD16+ contabilizavam em meacutedia 733 e 802 respetivamente

Estes valores obtidos em cada subpopulaccedilatildeo estatildeo de acordo com alguns

estudos publicados (5165)


56

Foram poucos os estudos que examinaram as subpopulaccedilotildees

monociacuteticas na ICC Barisione et al (67) constataram que o subconjunto

CD14+CD16+ (123) estava aumentado em pacientes com ICC estaacutevel e

refletia a gravidade da doenccedila De forma inversa o subconjunto CD14dimCD16+

(46) encontrava-se diminuiacutedo nos mesmos doentes (67) Neste estudo

observou-se nos doentes com ICC um aumento da subpopulaccedilatildeo

CD14+CD16+ (977) mas os monoacutecitos CD14dimCD16+ apresentaram uma

percentagem semelhante ao grupo controlo Por sua vez os monoacutecitos

claacutessicos tiveram uma ligeira diminuiccedilatildeo da sua percentagem (8172)

Uma questatildeo importante que se pode depreender da heterogeneidade

existente nos monoacutecitos deve-se ao facto destas subpopulaccedilotildees monociacuteticas

puderem estar relacionadas com a progressatildeo da doenccedila Vaacuterios estudos

concluiacuteram que niacuteveis elevados de monoacutecitos CD14+CD16- estavam

relacionados negativamente com a recuperaccedilatildeo ventricular esquerda apoacutes um

enfarte agudo do miocaacuterdio e tambeacutem estavam associados com uma maior

mortalidade Por sua vez o aumento da expressatildeo dos monoacutecitos

CD14+CD16+ e CD14dimCD16+ estavam associados com um melhor

prognoacutestico em doentes com a mesma patologia (5163) Em doentes com

doenccedila arterial coronaacuteria observaram-se concentraccedilotildees elevadas de monoacutecitos

CD14dimCD16+ e de monoacutecitos CD16+ quando comparados com os controlos

saudaacuteveis (5154) No nosso estudo observou-se uma diminuiccedilatildeo

estatisticamente significativa da subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ com o aumento

da gravidade da patologia (caracterizada pelas classes de NYHA) Esta

diminuiccedilatildeo observada acompanhada pela diminuiccedilatildeo ligeira da subpopulaccedilatildeo

CD14+CD16+ assim como pela tendecircncia de aumento da quantidade de

monoacutecitos claacutessicos com o aumento da classe de NYHA poderatildeo estar

associadas com a evoluccedilatildeo cliacutenica da ICC Nas funccedilotildees apresentadas na

tabela 3 de cada subpopulaccedilatildeo (39) verifica-se que os monoacutecitos claacutessicos

apresentam um papel relevante na resposta inflamatoacuteria inicial (fagocitose

produccedilatildeo de citocinas proacute-inflamatoacuterias e de ROS remoccedilatildeo dos restos

celulares etc) enquanto que os monoacutecitos CD16+ apresentam caracteriacutesticas

funcionais mais tardias a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ pode ter uma funccedilatildeo

anti-inflamatoacuteria e a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ tem a capacidade de

reparaccedilatildeo celular Deste modo os doentes que se encontram na classe IIIII


57

estando numa fase mais avanccedilada da doenccedila poderatildeo apresentar uma

resposta inflamatoacuteria mais exacerbada e consequentemente uma diminuiccedilatildeo

das subpopulaccedilotildees CD16+ e um aumento dos monoacutecitos claacutessicos Mais

estudos seratildeo necessaacuterios para avaliar e esclarecer o papel e a quantificaccedilatildeo

das subpopulaccedilotildees monociacuteticas na evoluccedilatildeo e mortalidade dos doentes com

IC

Na anaacutelise da expressatildeo dos TLR2 e TLR4 nas subpopulaccedilotildees

monociacuteticas de doentes com ICC verificou-se uma ligeira sobre-expressatildeo

destes recetores em comparaccedilatildeo com os controlos saudaacuteveis exceto na

subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ para o TLR2 Contudo em termos estatiacutesticos a

subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ foi a uacutenica que demonstrou diferenccedilas

significativas na expressatildeo do TLR2 (diminuiccedilatildeo da sua expressatildeo) entre o

grupo de doentes com ICC e o grupo controlo

Nas diferentes subpopulaccedilotildees monociacuteticas identificadas observou-se

que a subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ foi a que apresentou uma expressatildeo mais

forte do TLR2 em comparaccedilatildeo com as outras subpopulaccedilotildees monociacuteticas De

forma inversa a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ possuiacutea uma expressatildeo mais

fraca deste recetor celular Estes resultados foram encontrados tanto nos

doentes com ICC como nos controlos Os resultados encontrados neste

trabalho cientiacutefico corroboram o estudo de Skrzeczynacuteska-Moncznik et al (17)

realizado em indiviacuteduos saudaacuteveis

Na anaacutelise do TLR4 as subpopulaccedilotildees CD14+CD16+ e CD14dimCD16+

foram as que expressaram o TLR4 com maior intensidade Contudo a anaacutelise

da expressatildeo do TLR4 tem de ser cuidadosa devido agraves IMFs natildeo seguirem

sempre o mesmo padratildeo de expressatildeo celular nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas

em alguns indiviacuteduos (doentes e controlos) os monoacutecitos CD14+CD16+

apresentaram uma IMF superior ao passo que noutros a subpopulaccedilatildeo

CD14dimCD16+ expressou mais intensamente este recetor Em dois doentes

com ICC verificou-se que a expressatildeo do TLR4 na subpopulaccedilatildeo

CD14dimCD16+ apresentou um aumento pronunciado comparativamente com

os outros subtipos de monoacutecitos Devido ao nuacutemero reduzido de amostras

incluiacutedas neste estudo os resultados tornam-se difiacuteceis de valorizar

Nos poucos estudos (4150) em que avaliaram em dadores saudaacuteveis a

expressatildeo do TLR4 nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas constataram que os


58

monoacutecitos CD14+CD16+ expressavam mais intensamente este recetor Nestes

estudos natildeo fizeram referecircncia agraves diferenccedilas de expressatildeo de TLR4 entre as

subpopulaccedilotildees CD14+CD16+ e CD14dimCD16+ encontradas no presente

estudo

No nosso estudo observou-se que a expressatildeo do TLR2 e TLR4

encontrava-se ligeiramente aumentada na classe I comparativamente com a

classe IIIII Apenas nos monoacutecitos claacutessicos o TLR4 apresentou uma

tendecircncia de aumento da sua expressatildeo na classe IIIII Contudo em termos

estatiacutesticos apenas a subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+ no TLR2 revelou

diferenccedilas apresentando um aumento da sua expressatildeo na classe de NYHA I

Foumlldes et al (68) verificaram um aumento da expressatildeo do TLR4 na

totalidade de monoacutecitos perifeacutericos de doentes com ICC e os seus valores

estavam relacionados diretamente com a gravidade da patologia Neste estudo

soacute os monoacutecitos claacutessicos tiveram uma tendecircncia de aumento da expressatildeo do

TLR4 com o aumento da gravidade dos doentes (classe de NYHA IIIII)

Relativamente agrave expressatildeo de TLR2 Foumlldes et al (68) verificaram que a

expressatildeo do TLR2 foi similar ao grupo controlo Estes resultados satildeo de difiacutecil

discussatildeo por terem sido analisados na totalidade de monoacutecitos sem terem

sido efetuados nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas que possuem diferentes

expressotildees deste recetor

A expressatildeo de vaacuterios antigeacutenios celulares associados agrave diferenciaccedilatildeo e

funccedilatildeo dos monoacutecitos foram avaliados experimentalmente tendo-se verificado

diferenccedilas na intensidade de expressatildeo celular apresentada pelas diferentes

subpopulaccedilotildees monociacuteticas Os monoacutecitos CD14+CD16- expressavam niacuteveis

elevados de CD36 CD11b contrastando com os niacuteveis mais baixos de HLA-Dr

e CD4 Esta subpopulaccedilatildeo CD14+CD16- expressou ainda o IREM-2 e o CD45

mas com uma intensidade mais fraca que as subpopulaccedilotildees minoritaacuterias

A subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ foi a que exibiu uma expressatildeo mais

elevada dos antigeacutenios celulares CD11b CD36 HLA-Dr IREM-2 e CD4 e uma

expressatildeo intermeacutedia do CD64 e CD45

Como caracteriacutesticas fenotiacutepicas os monoacutecitos CD14dimCD16+

apresentaram intensidades de expressatildeo mais baixas dos antigeacutenios celulares

CD11b CD36 e CD64 Exibiram ainda uma expressatildeo intermeacutedia de IREM-2 e


59

HLA-Dr e foi a subpopulaccedilatildeo que apresentou o antigeacutenio CD45 com uma

intensidade de expressatildeo superior

Na anaacutelise do fenoacutetipo de cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica observou-se

que o IREM-2 eacute um marcador importante para avaliar a maturidade dos

monoacutecitos no sangue perifeacuterico Tal facto se deve ao IREM-2 ser uma

glicoproteiacutena restrita dos monoacutecitos e das ceacutelulas dendriacuteticas mieloides e

durante a maturaccedilatildeo dos monoacutecitos ser expressa apenas no uacuteltimo estadio de

maturaccedilatildeo (monoacutecitos) apoacutes a forte expressatildeo de CD14 [Orfatildeo (46) tabela 3]

Neste estudo observou-se que este marcador era expresso em todas as

subpopulaccedilotildees monociacuteticas podendo concluir que todos os monoacutecitos no

sangue perifeacuterico eram ceacutelulas maduras Contudo o fenoacutetipo apresentado

pelos monoacutecitos CD14dimCD16+ suscitou algumas duacutevidas relativamente agrave sua

maturidade uma vez que esta subpopulaccedilatildeo apresentava uma expressatildeo mais

fraca de CD11b de CD36 e uma expressatildeo heterogeacutenea de CD14 Segundo o

esquema de maturaccedilatildeo dos monoacutecitos de Orfatildeo (46) estas caracteriacutesticas

fenotiacutepicas estatildeo de acordo com as apresentadas pelos promonoacutecitos

suscitando a duacutevida de imaturidade destas ceacutelulas A presenccedila da expressatildeo

de IREM-2 neste subtipo celular veio assim a refutar esta duacutevida Deste modo

seria necessaacuterio estudar a maturaccedilatildeo de cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica na

medula oacutessea para uma melhor compreensatildeo do fenoacutetipo apresentado pelas

subpopulaccedilotildees minoritaacuterias no sangue perifeacuterico

A comparaccedilatildeo do fenoacutetipo obtido nas subpopulaccedilotildees monociacuteticas com a

bibliografia existente eacute limitada uma vez que soacute alguns marcadores celulares

utilizados neste estudo (HLA-Dr CD11b CD36 e CD64) estatildeo documentados

em estudos anteriores (171865) Tal deve-se ao facto de em muitos dos

estudos realizados a identificaccedilatildeo ser de apenas duas subpopulaccedilotildees

monociacuteticas (CD14+CD16- e CD14dimCD16+) sem fazerem contudo a

subdivisatildeo das ceacutelulas CD16+ em CD14+ e CD14dim Os resultados obtidos da

expressatildeo dos antigeacutenios celulares comuns estatildeo concordantes com os

estudos preacutevios (171865)

Durante a avaliaccedilatildeo das caracteriacutesticas citomeacutetricas observaram-se

diferenccedilas estatisticamente significativas na granularidade e no tamanho

celular entre as subpopulaccedilotildees monociacuteticas Verificou-se que agrave medida que os

monoacutecitos aumentavam a expressatildeo de CD14 e diminuiacuteam a expressatildeo de


60

CD16 aumentavam a sua granularidade Assim os monoacutecitos claacutessicos

possuiacuteam uma maior complexidade celular ao passo que os monoacutecitos

CD14dimCD16+ apresentaram menor Relativamente ao tamanho celular a

subpopulaccedilatildeo que apresentou maior FSC foi a CD14+CD16+ e a subpopulaccedilatildeo

CD14+CD16- a que teve menor FSC Estes dados estatildeo de acordo com a

literatura existente (65)

Exceto para o CD14 e CD16 que foram utilizados para a identificaccedilatildeo

das subpopulaccedilotildees monociacuteticas os marcadores de superfiacutecie celular incluiacutedos

neste estudo exibiram o mesmo padratildeo de expressatildeo celular nas

subpopulaccedilotildees monociacuteticas entre os doentes com ICC e controlos Em todas

as subpopulaccedilotildees monociacuteticas os paracircmetros HLA-Dr e CD45 apresentaram

uma diminuiccedilatildeo da sua expressatildeo no grupo de doentes em comparaccedilatildeo com

os controlos Da mesma forma verificou-se uma diminuiccedilatildeo significativa do

tamanho celular nos doentes com ICC nas trecircs subpopulaccedilotildees monociacuteticas

Contrariamente agrave diminuiccedilatildeo destes paracircmetros no grupo de doentes os

antigeacutenios CD4 CD36 CD64 e IREM-2 apresentaram um aumento da sua

expressatildeo nos monoacutecitos dos doentes com ICC

Perante a anaacutelise imunofenotiacutepica dos subtipos de monoacutecitos verificou-

se que os monoacutecitos CD14+CD16+ foram as ceacutelulas que expressaram com

maior intensidade vaacuterios marcadores da ativaccedilatildeo (CD4 CD11b CD16 IREM-2

e HLA-Dr) assim como os recetores da imunidade inata (TLR2 e TLR4) Foi

tambeacutem a subpopulaccedilatildeo que teve um aumento ligeiro no sangue perifeacuterico dos

doentes estudados quando comparados com o grupo controlo Este aumento

poder-se-aacute dever agraves funccedilotildees desta subpopulaccedilatildeo Segundo Skrzeczynska-

Moncznik et al (17) este subtipo de monoacutecitos apresenta uma capacidade de

produccedilatildeo aumentada da citocina IL-10 tendo um papel anti-inflamatoacuterio Como

os doentes deste estudo se encontravam numa fase clinicamente estaacutevel haacute

pelo menos dois meses possivelmente encontravam-se numa fase anti-

inflamatoacuteria tendo esta subpopulaccedilatildeo um papel mais significativo na tentativa

de resoluccedilatildeo da inflamaccedilatildeo croacutenica

No futuro para aleacutem do estudo fenotiacutepico dos subtipos de monoacutecitos

seria importante fazer um estudo funcional Aleacutem disso as funccedilotildees especiacuteficas

de cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica na IC ainda natildeo foram investigadas


61

Para aleacutem do estudo fenotiacutepico dos monoacutecitos na IC tambeacutem se

estudaram fenotiacutepicamente os linfoacutecitos e os neutroacutefilos

Os linfoacutecitos satildeo as principais ceacutelulas imunoloacutegicas que participam na

resposta imunoloacutegica adaptativa e reconhecem especificamente o micro-

organismo invasor (69)

Existe pouca bibliografia comparando as populaccedilotildees linfocitaacuterias nas

doenccedilas cardiovasculares Num estudo realizado em doentes com

cardiomiopatia dilatada idiopaacutetica foi observado uma diminuiccedilatildeo dos linfoacutecitos T

supressores (70) Contrariamente num estudo efetuado em tecido do

miocaacuterdio de doentes com IC em fase avanccedilada da doenccedila verificaram que os

linfoacutecitos T (CD3+) estavam aumentados (70) Yndestad et al (71) verificaram

que os linfoacutecitos T se encontravam ativados na ICC tanto pelo aumento dos

niacuteveis de citocinas inflamatoacuterias produzidas como pelo aumento da expressatildeo

superficial de marcadores de ativaccedilatildeo (CD25 e CD69)

Neste nosso estudo observou-se uma diminuiccedilatildeo da percentagem dos

linfoacutecitos nos doentes com ICC Estes resultados estatildeo de acordo com alguns

estudos publicados (7273) onde verificaram que a diminuiccedilatildeo estava

inversamente associada agrave taxa de mortalidade

Na comparaccedilatildeo das populaccedilotildees linfocitaacuterias entre os dois grupos

estudados apenas se observaram diferenccedilas estatisticamente significativas

nos linfoacutecitos T CD4+CD8+ e CD4-CD8- Estes resultados natildeo vatildeo de encontro

ao estudo realizado por Maisel et al (74) que constatou uma diminuiccedilatildeo dos

linfoacutecitos circulantes devido a uma reduccedilatildeo dos linfoacutecitos T citotoacutexicos e das

ceacutelulas NK

Os neutroacutefilos possuem um importante papel na imunidade inata sendo

as primeiras ceacutelulas a chegar ao local da inflamaccedilatildeo Estas ceacutelulas satildeo

caracterizadas pela sua capacidade de fagocitose de libertar enzimas liacuteticas

dos seus gracircnulos e produzir intermediaacuterios de oxigeacutenio reativos com potencial

antimicrobiano Aiacute efetuam a fagocitose de fragmentos celulares e participam

na reparaccedilatildeo tecidular pela secreccedilatildeo de citocinas e fatores de crescimento

(7576)

Neste estudo observou-se um aumento do nuacutemero de neutroacutefilos no

sangue perifeacuterico dos doentes com ICC o que estaacute de acordo com a literatura

publicada (6777)


62

Diversos antigeacutenios celulares expressos pelos neutroacutefilos do sangue perifeacuterico

foram estudados nos doentes com ICC CD10 CD11b CD13 CD15 CD16 e

CD45 Na comparaccedilatildeo da expressatildeo dos antigeacutenios pesquisados natildeo se

observaram diferenccedilas entre os doentes com ICC e os controlos saudaacuteveis

Apenas se observou uma diminuiccedilatildeo estatisticamente significativa do tamanho

celular (FSC) e do nuacutemero de neutroacutefilos maduros nos doentes com ICC e um

aumento de metamieloacutecitos no sangue perifeacuterico dos mesmos O valor e

significado destes resultados eacute algo que teraacute de ser avaliado em futuros

trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo

O presente estudo embora limitado pela dimensatildeo amostral

demonstrou o papel dos monoacutecitos como mediadores da imunidade inata na

insuficiecircncia cardiacuteaca

Perante a anaacutelise do fenoacutetipo dos monoacutecitos concluiu-se que estas

ceacutelulas se podem dividir em trecircs subtipos com caracteriacutesticas fenotiacutepicas

distintas Esta heterogeneidade da populaccedilatildeo de monoacutecitos poderaacute ser

importante para a compreensatildeo da patogeacutenese e progressatildeo da IC

Neste estudo observou-se uma tendecircncia de aumento da expressatildeo dos

recetores de ativaccedilatildeo da imunidade inata os TLR2 e TLR4 nos doentes com

ICC Contudo em termos estatiacutesticos natildeo se observaram diferenccedilas entre o

grupo de doentes e controlos concluindo que os monoacutecitos dos doentes com

ICC natildeo aparentavam uma ativaccedilatildeo sustentada da resposta imunoloacutegica inata

A estabilidade cliacutenica em que se encontravam os doentes estudados pode ser

uma explicaccedilatildeo para os resultados obtidos

O TLR2 e o TLR4 apresentaram diferentes intensidades de expressatildeo

em cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica podendo cada subpopulaccedilatildeo ter um papel

especiacutefico na ativaccedilatildeo da imunidade inata A subpopulaccedilatildeo CD14dimCD16+

apresentou uma diminuiccedilatildeo significativa da expressatildeo do TLR2 no grupo de

doentes e com o aumento da gravidade da IC Esta subpopulaccedilatildeo foi tambeacutem a

que apresentou uma menor expressatildeo dos recetores da imunidade inata Deste

modo os monoacutecitos CD14dimCD16+ poderatildeo desempenhar um papel menos

ativo na ativaccedilatildeo da imunidade inata

Pelo contraacuterio a expressatildeo do TLR2 e TLR4 foi maior nas

subpopulaccedilotildees CD14+CD16- e CD14+CD16+ o que poderaacute indicar um papel

mais relevante destes subtipos de monoacutecitos na resposta imunoloacutegica inata

A subpopulaccedilatildeo CD14+CD16+ encontrava-se ligeiramente aumentada

nos doentes com ICC e foi a que apresentou uma expressatildeo mais intensa de

vaacuterios antigeacutenios de ativaccedilatildeo assim como dos recetores TLR2 e TLR4 Este

aumento tambeacutem foi acompanhado pela tendecircncia de diminuiccedilatildeo dos

monoacutecitos claacutessicos Os monoacutecitos CD14dimCD16+ apresentaram uma


66

diminuiccedilatildeo significativa da sua percentagem com o aumento da gravidade nos

doentes com ICC

As diferenccedilas na expressatildeo dos antigeacutenios celulares nas diferentes

subpopulaccedilotildees monociacuteticas e das percentagens de cada subpopulaccedilatildeo poder-

se-atildeo dever agraves diferentes fases que se encontravam os doentes com ICC

fazendo que cada subtipo seja diferentemente recrutado para a execuccedilatildeo das

suas funccedilotildees Deste modo satildeo necessaacuterios mais estudos para compreender o

papel especiacutefico de cada subpopulaccedilatildeo monociacutetica na IC

No futuro seria pertinente efetuar o mesmo estudo em doentes em

situaccedilatildeo aguda nos momentos de admissatildeo e de alta hospitalar bem como

efetuar uma reavaliaccedilatildeo 2 meses apoacutes a alta hospitalar

6 Referecircncias Bibliograacuteficas


69

1 - Baacutertholo RM Baacutertholo TP Imunidade inata e a importacircncia dos receptores

Toll-similar Pulmatildeo RJ 2009 2 52-58

2 - Pacheco FC Cardoso EM Imunidade Inata e Adaptativa Fundamentos de

Imunologia 1st Edition Lisboa Lidel 2007

3 - Calich V Vaz C Imunologia 1st Edition Rio de Janeiro Revinter 2001

4 - Roitt I Brostoff J Male D Imunologia 1st Edition Satildeo Paulo Editora

Manole Ltda 1999

5 - Linde A Mosier D Blecha F et al Innate immunity and inflammation - New

frontiers in comparative cardiovascular pathology Cardiovascular Research

2007 73 26ndash36

6 - Knuefermann P Nemoto S Baumgarten G et al Cardiac Inflammation and

Innate Immunity in Septic Shock Is There a Role for Toll-Like Receptors

Chest 2002 121 1329-1336

7 - Licastro F Candore G Lio D et al Innate immunity and inflammation in

ageing a key for understanding age-related diseases Immunity amp Ageing

2005 2 1-14

8 - OrsquoGorman MRG Donnenberg AD Handbook of Human Immnunology 2ordf

ediccedilatildeo Boca Raton CRC Press 2008

9 - Frantz S Ertl G Bauersachs J Mechanisms of Disease Toll-like receptors

in cardiovascular disease Nature clinical practice 2007 4 444-454

10 - Janeway CA Medzhitov JR Innate immunity Lipoproteins take their Toll

on the host Current Biology 1999 9 R879ndashR882

11 - Akira S Uematsu S Takeuchi O Pathogen Recognition and Innate

Immunity Cell 2006 124 783ndash801

12 - Kawai T Akira S TLR signaling Seminars in Immunology 2007 19 24ndash32

13 - Moresco EMY LaVine D Beutler B Toll-like receptors Current Biology

2011 21 R488-R493


70

14 - Valeur HS Valen G Innate immunity and myocardial adaptation to

ischemia Basic Res Cardiol 2008 104 22ndash32

15 - Kumar H Kawai T Akira S Toll-like receptors and innate immunity

Biochemical and Biophysical Research Communications 2009 388 621ndash625

16 - Gordon S Taylor PR Monocyte and macrophage heterogeneity Nature

Reviews Immunology 2005 5 953-964

17 - Skrzeczynska-Moncznik J Bzowska M Loseke S et al Peripheral Blood

CD14high CD16+ Monocytes are Main Producers of IL-10 Scandinavian

Journal of Immunology 2008 67 152ndash159

18 - Tallone T Turconi G Soldati G et al Heterogeneity of Human Monocytes

An Optimized Four-Color Flow Cytometry Protocol for Analysis of Monocyte

Subsets J of Cardiovasc Trans Res 2011 4211ndash219

19 - Frantz S Bauersachs J Kelly RA Innate Immunity and the Heart Current

Pharmaceutical Design 2005 11 1279-1290

20 - Valen G Innate immunity and remodeling Heart Fail Rev 2011 16 71-78

21 - Gallucci S Lolkema M Matzinger P Natural adjuvants endogenous

activators of dendritic cells Nat Med 1999 Nov 5(11)1249-55

22 - Mann DL Topkara VK Evans S et al Innate immunity in the adult

mammalian heart for whom the cell tolls Trans Am Clin Climatol Assoc 2010

121 34-51

23 - Gallucci S Matzinger P Danger signals SOS to the immune system

Current Opinion in Immunology 2001 13114ndash119

24 - Frantz S Bauersachs J Toll-like receptors emerging therapeutic targets

for heart failure Heart Metab 2010 47 19-22

25 - Candia AM Juacutenior HV Mesquita ET Ativaccedilatildeo Imune-Inflamatoacuteria na

Insuficiecircncia Cardiacuteaca Arq Bras Cardiol 2007 89 201-208


71

26 - Fonseca C Ceia F Brito D et al How pacients with Heart Failure are

managed in Portugal Eur J Heart Fail 2002 4 563-566

27 - Vasan RS Wilson PWF Epidemiology and causes of heart failure [Web

page] 2011 [updated 2011 cited 2011 25 outubro] Available from

httpwwwuptodatecomcontentsepidemiology-and-causes-of-heart-

failuresource=search_resultampsearch=heart+faolureampselectedTitle= 37E150

28 - Dickstein K Solal AC Filippatos G et al ESC Guidelines for the diagnosis

and treatmentof acute and chronic heart failure 2008 European Heart Journal

2008 29 2388ndash2442

29 - Ceia F Fonseca C Mota T et al Prevalence of chronic heart failure in

Southwestern Europe the EPICA study Eur J Heart Fail 2002 4 531-539

30 - Ramrakha P Hill J Oxford Handbook of Cardiology 2 edition New York

Oxford University Press 2012

31 - McMurray JV Adamopoulos S Anker SD et al ESC Guidelines for the

diagnosis and treatment of acute and chronic heart failure 2012 European

Heart Journal 2012 33 1787ndash1847

32 - Bocchi EA Braga FG Ferreira SM et al III Diretriz Brasileira de

Insuficiecircncia Cardiacuteaca Crocircnica Arq Bras Cardiol 2009 93(1) 1-71

33 - Hunt SA Baker DW Chin MH et al ACCAHA Guidelines for the

Evaluation and Management of Chronic Heart Failure in the Adult Executive

Summary A Report of the American College of CardiologyAmerican Heart

Association Task Force on Practice Guidelines Circulation 2001 104 2996-

3007

34 - Torre-Amione G Immune Activation in Chronic Heart Failure Am J Cardiol

2005 95 3C-8C

35 - Montera WM Almeida DR Tinoco EM et al II Diretriz Brasileira de

Insuficiecircncia Cardiacuteaca Aguda Arq Bras Cardiol 2009 93(3 supl3) 1-65


72

36 - Vrie M Heymans S Schroen B MicroRNA Involvement in Immune

Activation During Heart Failure Cardiovasc Drugs Ther 201 25 161ndash170

37 - Mann DL The Emerging Role of Innate Immunity in the Heart and Vascular

System For Whom the Cell Tolls Circulation Research 2011 108 1133-1145

38 - Frantz S Kobzik L Kim Y et al Toll4 (TLR4) expression in cardiac

myocytes in normal and failing myocardium The Journal of Clinical

Investigation 1999 104 271ndash280

39 - Wrigley BJ Lip GYH Shantsila E The role of monocytes and inflammation

in the pathophysiology of heart failure European Journal of Heart Failure 2011

13 1161ndash1171

40 - Shimamoto A Chong AJ Yada M et al Inhibition of Toll-like Receptor 4

With Eritoran Attenuates Myocardial Ischemia Reperfusion Injury Circulation

2006 114270-274

41 - Oyama J Blais C Liu X et al Reduced Myocardial Ischemia-Reperfusion

Injury in Toll-Like Receptor 4-Deficient Mice Circulation 2004 109784-789

42 - Shishido T Nozaki N Yamaguchi S et al Toll-Like Receptor-2 Modulates

Ventricular Remodeling After Myocardial Infarction Circulation 2003 108

2905-2910

43 - Apostolakis S Lip GYH Shantsila E Monocytes in heart failure

relationship to a deteriorating immune overreaction or a desperate attempt for

tissue repair Cardiovascular Research 2010 85 649ndash660

44 - Lochem EG Velden VHJ Wind HK et al Immunophenotypic

Differentiation Patterns of Normal Hematopoiesis in Human Bone Marrow

Reference Patterns for Age-Related Changes and Disease-Induced Shifts

Cytometry Part B (Clinical Cytometry) 2004 60B 1ndash13

45 ndash Dongen JJM Lhermitte L Almeida J et al EuroFlow antibody panels for

standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal

reactive and malignant leukocytes Leukemia 2012 261908ndash1975


73

46 - Grupo de Orfatildeo A da Universidade de Salamanca

httpwwwchsporgbrpdfs_wordpresscongressos21-LeucemiasAgudaspdf

Acedido em 23 de Outubro de 2012

47 - Passlick B Flieger D Ziegler-Heitbrock HW Identification and

characterization of a novel monocyte subpopulation in human peripheral blood

Blood 1989 74 2527-2534

48 - Ziegler-Heitbrock HWL Heterogeneity of human blood monocytes the

CD14+CD16+ subpopulation Immunology Today 1996 17 424-8

49 - Auffray C Sieweke MH Geissmann F Blood Monocytes Development

Heterogeneity and Relationship with Dendritic Cells Annu Rev Immunol

2009 27 669ndash692

50 - Nahrendorf M Pittet MJ Swirski FK Monocytes Protagonists of Infarct

Inflammation and Repair After Myocardial Infarction Circulation 2010 121

2437-2445

51 - Hristov M Weber C Differential role of monocyte subsets in

atherosclerosis Thromb Haemost 2011 106757ndash762

52 - Heitbrock L Ancuta P Crowe S et al Nomenclature of monocytes and

dendritic cells in blood Blood 2010 116 e74-e80

53 - Castanotilde D Garcia LF Rojas M Increased frequency and cell death of

CD16thorn monocytes with Mycobacterium tuberculosis infection Tuberculosis

2011 91348-360

54 - Grage-Griebenow E Flad HD Ernst M Heterogeneity of human peripheral

blood monocyte subsets Journal of Leukocyte Biology 2001 6911-20

55 - Tang Y Katz SD Anemia in Chronic Heart Failure Prevalence Etiology

Clinical Correlates and Treatment Options Circulation 2006 1132454-2461

56 ndash Coats AJS Anaemia and heart failure Heart 2004 90977ndash979


74

57 ndash Gottlieb SS Abraham W Butler J et al The Prognostic Importance of

Different Definitions of Worsening Renal Function in Congestive Heart Failure

Journal of Cardiac Failure 2002 8(3) 136-140

58 - Silver MA Maisel A Yancy CW et al BNP Consensus Panel 2004 A

Clinical Approach for the Diagnostic Prognostic Screening Treatment

Monitoring and Therapeutic Roles of Natriuretic Peptides in Cardiovascular

Diseases Congestive Heart Failure 2004 10(5)

59 ndash Braunwald E Biomarkers in Heart Failure N Engl J Med 2008 3582148-

2159

60 - Kaptoge S Di Angelantonio E Lowe G et al C-reactive protein

concentration and risk of coronary heart disease stroke and mortality an

individual participant meta-analysis Lancet 20109(375)132ndash140

61 - Anand IS Latini R Florea VG et al C-Reactive Protein in Heart Failure

Prognostic Value and the Effect of Valsartan Circulation 20051121428-1434

62 - Marques JS Luz-Rodrigues H David C et al Biomarcadores da classe

funcional na insuficiecircncia cardiacuteaca sistoacutelica Relevacircncia da copeptina Rev Port

Cardiol 201231(11)701-710

63 - Urra X Villamor N Amaro S et al Monocyte subtypes predict clinical

course and prognosis in human stroke Journal of Cerebral Blood Flow amp

Metabolism 2009 29994ndash1002

64 ndash Gullestad L Ueland T Vinge LE et al Inflammatory cytokines in heart

failure mediators and markers Cardiology 2012122(1)23-35

65 - Shantsila E Wrigley B Tapp L Immunophenotypic characterization of

human monocyte subsets possible implications for cardiovascular disease

pathophysiology Journal of Thrombosis and Haemostasis 2011 9 1056ndash1066

66 - Baumgarth N Roederer M A practical approach to multicolor flow

cytometry for immunophenotyping Journal of Immunological Methods 2000

24377ndash97


75

67 ndash Barisione C Garibaldi S Ghigliotti G CD14CD16 monocyte subset levels

in heart failure patients Disease Markers 2010 28115-124

68 ndashFoumlldes G von Haehling S Okonko DO et al Fluvastatin reduces increased

blood monocyte Toll-like receptor 4 expression in whole blood from patients

with chronic heart failure Int J Cardiol 2008 20(124)80-85

69- Cruvinel WM Juacutenior DM Arauacutejo JAP et al Sistema Imunitaacuterio ndash Parte I

Fundamentos da imunidade inata com ecircnfase nos mecanismos moleculares e

celulares da resposta inflamatoacuteria artigo sistema imunitaacuterio ndash parte I Rev Bras

Reumatol 2010 50(4)434-61

70 - Anker SD von Haehling S Inflammatory mediators in chronic heart failure

an overview Heart 2004 90(4)464ndash470

71 - Yndestad A Holma AM Muller FM et al Enhanced expression of

inflammatory cytokines and activation markers in T-cells from patients with

chronic heart failure Cardiovascular Research 2003 60141ndash146

72 - Charach G Grosskopf I Roth A et al Usefulness of Total Lymphocyte

Count as Predictor of Outcome in Patients With Chronic Heart Failure Am J

Cardiol 2011 1071353ndash1356

73 - Ommen SR Hodge DO Rodeheffer RJ et al Predictive Power of the

Relative Lymphocyte Concentration in Patients With Advanced Heart Failure

Circulation 1998 9719-22

74 - Maisel AS Knowlton KU Fowler P et al Adrenergic Control of Circulating

Lymphocyte Subpopulations Effects of Congestive Heart Failure Dynamic

Exercise and Terbutaline Treatment J Clin Invest 1990 85462-467

75 - Carvalheiro T Velada I Valado A et al Phenotypic and Functional

Alterations on Inflammatory Peripheral Blood Cells After Acute Myocardial

Infarction J of Cardiovasc Trans Res 2012 5309ndash320


76

76 - Mantovani A Cassatella MA Costantini C et al Neutrophils in the

activation and regulation of innate and adaptive immunity Nature Reviews

2011 11519-531

77 - Shantsila E Bialiuk N Navitski D et al Blood leukocytes in heart failure

with preserved ejection fraction Impact on prognosis Int J Cardiol 2012

8(155)337-338

78 - Erickson B Sperber K Frishman WH Toll-Like Receptors New

Therapeutic Targets for the Treatment of Atherosclerosis Acute Coronary

Syndromes and Myocardial Failure Cardiology in Review 200816273-279

7 Anexos


79

Anexo 1 PAMPsDAMPs e os TLRs

Abreviaturas ADN Aacutecido desoxirrobunucleico ARN Aacutecido ribonucleico CpG Citidina-fosfato-guanosina HSP Proteiacutena choque teacutermico LAM Lipoarabinomannan LPS Lipopolissacariacutedeo MMTV Mouse mammary tumor virus VSR viacuterus sincicial respiratoacuterio Tabela adaptada de Kumar et al (15) Erickson et al (78)

Membro da famiacutelia

TLR Localizaccedilatildeo do TLR PAMP DAMP

Adaptador de

sinalizaccedilatildeo

Factor(es) de

transcriccedilatildeoCitocinas efectoras

Lipopeacuteptidos triciacuteclicos (bacteacuteria

micobacteacuteria)

Factores soluveacuteis (Neisseria

meningitides )

Lipoproteiacutenaslipopeacuteptidos (vaacuterios

microorganismos)hsp60

Peptidoglicano (bacteacuterias Gram-

positivas)hsp70

Aacutecido lipoteicoico (bacteacuterias Gram-

negativas)hsp96

LAM (Micobacteacuteria)

Hemaglutinina (viacuterus Measles)

Fosfolipomannan (Candida)

Mucina glicose fosfatidil inositol

(Tripanosoma)

TLR 3 Endossoma ARN de dupla cadeia (viacuterus) mRNA TRIF NF-kB IRF37Citocinas inflamatoacuterias (TNF-

alfa IL-6-etc) IFNs tipo I

LPS (bacteacuterias Gram-negativas) hsp60

Proteiacutenas de envelope (MMTV)Domiacutenio EDA da

fibronectina

Proteiacutena de fusatildeo (VSR) hsp96

Taxol (planta) hsp70

Oligossacariacutedeos de aacutecido

hialuroacutenico

Fragmento polissacariacutedeo

do sulfato de heparina

Fibrinogeacutenio

TLR 5 Flagelina (bacteacuteria) _ MyD88

Lipopeacuteptidos diacicliacutecos

(micoplasma)_

Factor soluacutevel termo-laacutebil

(Estreptococos grupo B)

Modulina fenol soluacutevel

(Estafilococos )

ARN viral de cadeia simples _

Imidazoquinolina (compostos

sinteacuteticos)

ADN CpG natildeo-metilado (bacteacuteria) Complexos Cromatina-IgG

Hemozoiacutena (Plasmoacutedio)

ADN viral de dupla cadeia

Factores de bacteacuterias

uropatogeacutenicas _

Moleacutecula profiling-like (Toxoplasma

gondii)

Citocinas inflamatoacuterias (TNF-

alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1

Membrana plasmaacutetica

(superfiacutecie celular)

_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7



HSP60 (Chlamydia pneumoniae )

NF-kBCitocinas inflamatoacuterias (TNF-

alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88


(superfiacutecie celular)NF-kB


alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88

NF-kB IRF7Citocinas inflamatoacuterias (TNF-


TLR 8 ARN viral de cadeia simples

TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


Ano 2012




Dissertaccedilatildeo apresentada agrave Universidade de Aveiro para cumprimento dos requisitos necessaacuterios agrave obtenccedilatildeo do grau de Mestre em Biologia Molecular e Celular realizada sob a orientaccedilatildeo cientiacutefica do Professor Doutor Joatildeo Tiago de Sousa Pinto Guimaratildees Professor associado da Faculdade de Medicina da Universidade do Porto e coorientaccedilatildeo da Professora Doutora Maria da Conceiccedilatildeo Lopes Vieira dos Santos Professora associada com agregaccedilatildeo da Universidade de Aveiro

o juacuteri





Agradecimentos


palavras-chave


Resumo


+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim





+CD16


+CD16

- A




dimCD16



Keywords



+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim


CD14+CD16



+CD16


+CD16

-


CD16+


dimCD16




i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)

o juacuteri





Agradecimentos


palavras-chave


Resumo


+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim





+CD16


+CD16

- A




dimCD16



Keywords



+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim


CD14+CD16



+CD16


+CD16

-


CD16+


dimCD16




i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)

Agradecimentos


palavras-chave


Resumo


+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim





+CD16


+CD16

- A




dimCD16



Keywords



+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim


CD14+CD16



+CD16


+CD16

-


CD16+


dimCD16




i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)

palavras-chave


Resumo


+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim





+CD16


+CD16

- A




dimCD16



Keywords



+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim


CD14+CD16



+CD16


+CD16

-


CD16+


dimCD16




i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)

Keywords



+CD16

- CD14

+CD16

+ e

CD14dim


CD14+CD16



+CD16


+CD16

-


CD16+


dimCD16




i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


i

Iacutendice

Abreviaturas iv











15 Objetivos 19


21 Participantes 23






3 Resultados 29







4 Discussatildeo 51

5 Conclusatildeo 63


7 Anexos 77


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


ii
















doentes com ICC 39



41











iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


iii



Association 12













neutroacutefilos 49


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


iv

Abreviaturas






















v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


v


molecule)










protein



protein)










vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


vi





















molecule)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)



3








restrita (12)

11 Imunidade inata























4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)


4





























adaptativa (91214)




5































6

























7


Kumar et al (15)








(313)







8




















Moresco et al (13)


9

































10






(202223)




















mais de 80 anos






11






















(35)





doenccedila (2832)


12
































13

























(1420)










14





























15










Moleacutecula CD



timoacutecitos




















HLA-Dr




auxiliares





16






















17










(49-51)



















18



Funccedilatildeo




de ROS


10)




Alta Alta Baixa


estimulada pelo LPS










1 e VCAM-1







ligando MCP-1





19

15 Objetivos





consistem na


com IC




perifeacuterico







23

21 Participantes
































24











diaacuterio





anos)
















25


































26





FACSFlowTM












citometria de fluxo















27



Pacific Blue

Pacific Orange

FITC PE PerCP-Cy55

PE-Cy7 APC APC-

H7

























28

26 Estatiacutestica











3 Resultados


31



tabela 5


Doentes com ICC

(n=15)


Diabetes 5 (333)

Etiologia


8 (533) 7(467)


Ligeira Moderada

Grave

2 (133) 7 (467) 6 (400)

Classe NYHA

I II III IV

8 (533) 4 (267) 3 (200)

0 (0)

Medicaccedilatildeo





13 (867) 14 (933) 9 (600) 11 (733) 13 (867) 4 (267) 4 (267) 3 (200) 2 (133)








32







Cre

ati

nin

a (

mg

dl)

Classe de NYHA


Classe IIIII

Classe de NYHA

Classe I

PC

R (

mgL

)


BN

P (

pg

mol)

Le

ucoacute

cit

os

(1

09L

)


Classe de NYHA




(α=005)

HB

(g

dl)



33














B A B C






34



B

C









Linfoacutecitos

Basoacutefilos

Neutroacutefilos

Eosinoacutefilos

Monoacutecitos

A


35












Paracircmetro



25 Percentil

50 Percentil

75 Percentil

25 Percentil

50 Percentil

75

Linfoacutecitos ()

1476 1885 2488 2407 2830 3009 0010

Monoacutecitos ()

537 776 851 48475 554 651 0025

Neutroacutefilos ()

6481 7016 7442 6007 6214 6676 0022

Eosinoacutefilos ()

114 225 384 197 290 460 0205

Basoacutefilos ()

048 054 098 053 072 101 0317


002 002 002 002 003 004 0050


36








ambos os marcadores













significativas



CD14dim

CD16+

CD14+CD16

+

CD14+CD16

-


37


controlos

CD14+CD16

- () CD14

+CD16

+ () CD14

dimCD16

+ ()



Valor p 0922 0626 0733
















(n=7) Valor p

CD14+CD16

- 7978plusmn552 8393plusmn 418 0132

CD14+CD16

+ 1011plusmn367 938plusmn139 0817

CD14dim

CD16+ 1014plusmn329 670plusmn358 0037







38























39

Doente com ICC

Controlo Normal




40



Doente com ICC

Controlo Normal


41













CD16+

HL

A-D

R (

IMF

)

CD

45 (

IMF

)



CD16+

CD

11b

(IM

F)


CD16+

FS

C (

IMF

)

Linfoacutecitos B





CD16+

CD

64 (

IMF

)


CD16+

SS

C (

IMF

)


CD16+

IRE

M-2

(IM

F)


CD16+

CD

4 (

IMF

)



CD16+

CD

36 (

IMF

)


42











e os controlos



















43

Doente com ICC

Controlo Normal




44







NYHA IIIII











CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


45













CD16+

TL

R4 (

IMF

)






CD16+

TL

R2 (

IMF

)


46











C

D

A

Linfoacutecitos

B


Ceacutelulas NK

E

Ceacutelulas NK

Linfoacutecitos B

Linfoacutecitos T

CD3+CD16

+CD56

+

Linfoacutecitos T

F

Linfoacutecitos T

auxiliares

G

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

H

Linfoacutecitos T

auxiliares

Linfoacutecitos T

citotoacutexicos

Linfoacutecitos T

CD4+CD8

+

Linfoacutecitos T

CD4-CD8

-


47






CD4+CD8+ (p=0016) e CD4-CD8- (p=0028)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


7752 8057 8718 7652 7876 8375 0558


5432 6222 6933 5196 5831 6262 0283


2478 3182 4228 3252 3500 3938 0242


107 197 240 083 104 141 0016


143 212 351 231 424 761 0028




351 672 1192 937 1032 1119 0107


804 1103 1629 684 1086 1338 0575



controlo (α=005)


48





















Metamieloacutecitos

Mieloacutecitos


49




controlo (α=005)




p

P25 P50 P75 P25 P50 P75


9981 9991 9995 9993 9998 9998 0039




neutroacutefilos1

002 004 009 001 003 008 0617

SSC 7306713 8460821 8808459 8224771 9132409 9433104 0079

FSC 10443702 10861636 11435681 11092164 11455943 12007825 0036

CD10 (IMF) 402245 428782 581778 363185 455941 764605 0712

CD11b (IMF) 591336 698223 836554 460361 658475 755704 0407

CD13 (IMF) 548237 656937 692014 502249 584749 812526 0770

CD15 (IMF) 8339095 10523346 13182129 7969838 11766679 13107754 0696

CD16 (IMF) 7897538 8501437 9665379 6523872 8515832 10389766 0961

CD45 (IMF) 313697 349649 369194 250588 347496 430352 0845

4 Discussatildeo


53

4 Discussatildeo



de imunidade






























54








avanccedilados




























55



































56




































57






IC






























58




estudo































59




































60



































61
























ceacutelulas NK







(7576)



publicada (6777)


62









trabalhos

5 Conclusatildeo


65

5 Conclusatildeo
































66


doentes com ICC












69







Manole Ltda 1999



2007 73 26ndash36



Chest 2002 121 1329-1336



2005 2 1-14











2011 21 R488-R493


70




















121 34-51








71









2008 29 2388ndash2442














3007


2005 95 3C-8C




72










13 1161ndash1171



2006 114270-274





2905-2910












73






Blood 1989 74 2527-2534





2009 27 669ndash692



2437-2445







2011 91348-360







74









2159








Cardiol 201231(11)701-710











24377ndash97


75









Reumatol 2010 50(4)434-61



















76



2011 11519-531



8(155)337-338




7 Anexos


79





Adaptador de


Factor(es) de



micobacteacuteria)


meningitides )




positivas)hsp70


negativas)hsp96





(Tripanosoma)





fibronectina




hialuroacutenico



Fibrinogeacutenio



(micoplasma)_




(Estafilococos )



sinteacuteticos)







gondii)


alfa IL-6-etc)

TLR2

TLR1



_

TIRAP MyD88 NF-kB

TLR 4



TIRAP MyD88 TRAM e

TRIFNF-kB IRF3 7





alfa IL-6-etc)

TLR 6 TIRAP MyD88




alfa IL-6-etc)

TLR 7

Endossoma

MyD88




TLR 9

TLR 11 (expresso no

rato)

CLÁUDIO ARAÚJO A IMUNIDADE INATA NA INSUFICIÊNCIA …

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